發(fā)布時間：2020-12-15 13:24

　　目的:探討斑馬魚體內(nèi)髓樣特異性過氧化物酶（mpx）在胚胎發(fā)育過程中的表達(dá)模式。方法:按Trizol法提取斑馬魚總RNA后逆轉(zhuǎn)錄成c DNA,再以c DNA為模板RT-PCR擴(kuò)增mpx基因片段;用基因重組技術(shù)構(gòu)建p CS2⁺-mpx重組質(zhì)粒后將質(zhì)粒酶切線性化,T3聚合酶制備mpx反義RNA探針,用全胚胎原位雜交檢測mpx基因的表達(dá)。結(jié)果:成功構(gòu)建了p CS2⁺-mpx重組質(zhì)粒,原位雜交結(jié)果顯示在24 hpf,mpx基因在斑馬魚胚胎中間細(xì)胞團(tuán)表達(dá);從24 hpf開始,mpx基因在斑馬魚胚胎卵黃囊表面、心臟和軸向脈管系統(tǒng)中高表達(dá),一直持續(xù)到72 hpf;尤其是在72 hpf,mpx基因在整個胚胎頭部、卵黃囊表面、尾部中彌散表達(dá)。結(jié)論:mpx基因在斑馬魚心血管系統(tǒng)發(fā)育的時間和部位中都有表達(dá),mpx基因可能參與調(diào)控斑馬魚心血管系統(tǒng)發(fā)育。 

【文章來源】：貴州醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2020年05期

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

pCS2+-mpx重組質(zhì)粒HindⅢ、XhoⅠ雙酶切產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果

pCS2+-mpx重組質(zhì)粒菌落RT-PCR產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果

結(jié)果顯示在18 hpf前的斑馬魚胚胎中無明顯陽性信號表達(dá)，在24 hpf，斑馬魚胚胎中間細(xì)胞團(tuán)有較弱的藍(lán)紫色陽性信號表達(dá);從24 hpf開始一直持續(xù)到72 hpf，在斑馬魚胚胎卵黃囊表面、心臟和軸向脈管系統(tǒng)中出現(xiàn)較強的的藍(lán)紫色陽性信號表達(dá);尤其是在72 hpf，在整個胚胎頭部、卵黃囊表面、尾部中均有彌散的藍(lán)紫色陽性信號表達(dá)(圖5)。說明mpx基因在斑馬魚胚胎18 hpf以后開始表達(dá)，并且主要在心血管系統(tǒng)中高表達(dá)。圖5 mpx基因的斑馬魚全胚胎原位雜交結(jié)果(40×)


本文編號：2918342