目的探討維持精原干細胞及其干細胞特性的關(guān)鍵基因及亮氨酸重復(fù)序列（LRR）家族成員Lrrc34在小鼠精原干細胞中的功能。方法應(yīng)用差異表達基因（DEG）分析、基因本體（GO）分析和京都基因和基因組百科全書（KEGG）分析等生物信息學(xué)方法尋找潛在的多能性相關(guān)基因。分別采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)（RT-PCR）、免疫熒光（IF）檢測Lrrc34在小鼠精原干細胞中的m RNA和蛋白質(zhì)表達水平。采用RNA干擾實驗研究Lrrc34敲低后對體外培養(yǎng)精原干細胞的瞬時效應(yīng)。結(jié)果我們分別在ID4-EGFP+（G）和ID4-EGFP+/TSPAN8High （TH）、G和ID4-EGFP+/TSPAN8Low （TL）、TH和TL組發(fā)現(xiàn)了8、8、11個差異表達基因,并在這些差異表達基因組成的相互作用網(wǎng)絡(luò)中發(fā)現(xiàn)了11個顯著的相互作用模塊。第五個相互作用模塊中與纖維母細胞生長因子2存在相互作用的差異表達基因Lrrc34被選擇作為多能性相關(guān)候選基因。免疫熒光實驗顯示Lrrc34特異表達于被LIN28A標(biāo)記的未分化精原細胞的部分亞群中,RT-PCR證明了Lrrc34高表達于出生后7天和成年小鼠的精原干細胞中。Lrrc3... 

【文章來源】：Chinese Medical Sciences Journal. 2020年01期

【文章頁數(shù)】：12 頁

【文章目錄】：
MATERIALS AND METHODS
    Materials
    Data downloading and DEG analysis
    GO and KEGG pathway enrichment analyses
    Construction of the PPI network
    SOM clustering
    Isolation of testis cells and enrichment of THY1+spermatogonia
    Immunofluorescent assay
    Quantitative real-time PCR
    In vitro SSC culture
    RNA interference by siRNA
    Statistical analysis
RESULTS
    Identification of DEGs among P6 ID4-EGFP+spermatogonia
    PPI network of DEGs among P6 ID4-EGFP+spermatogonia and module analysis
    LRRC34 is highly expressed in SSCs from P7 and adult C57BL/6 male mice
    The knockdown of Lrrc34 led to variations in the transcriptome signaling pathway in SSC colonies in vitro
DISCUSSION
Conflict of Interests Statement



本文編號：2914258