目的探究干擾素刺激基因（ISG）12a對寨卡病毒（ZIKV）復制的影響和作用機制。方法通過質粒轉染（2μg ISG12a）或者siRNA（20μmo/Ll）沉默分別上調或者抑制A549細胞（細胞密度2×10⁵/mL）中ISG12a的表達,再用ZIKV（MOI=1）感染A549細胞,48 h后收樣,采用RT-qPCR以及Western blot等方法檢測ZIKV的RNA的復制水平及宿主抗病毒先天免疫相關基因表達水平;將1μg含有干擾素刺激應答元件（ISRE）的螢火蟲熒光報告質粒（ISRE-luc）和2 ng海腎熒光質粒（pRL-TK）與1μg的ISG12a質粒共轉入2×10⁵/mL的A549細胞中24 h,用ZIKV（MOI=1）感染A549細胞24 h,用終濃度為100 IU/mL IFNβ再處理細胞24 h后收樣,用雙熒光報告基因試驗檢測ISRE活性;在2×10⁵/mL的A549細胞中轉染2μg ISG12a質粒,24 h后用ZIKV（MOI=1）感染A549細胞24 h,用終濃度為100 IU/mL IFNβ再處理細... 

【文章來源】：中國輸血雜志. 2020年05期 第446-452頁

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

在mRNA水平抑制ISG12a表達促進ZIKV復制

RT-qPCR檢測:ZIKV能夠感染A549細胞,并且隨著感染時間的延長,細胞內病毒RNA水平逐漸增加(圖1-A);隨著時間的延長,至72 h時ISG12a表達明顯增高(圖1-B)。2.2 外源性IFNβ誘導ISG12a高表達

RT-qPCR檢測:與空載組相比,轉染劑量(μg)為0.5、1和2的3組中ISG12a相對值為12.285 9±0.445 9、23.399 9±3.155 2、42.896 9±1.049 1(P<0.05或<0.01)(圖3-A);實驗組ISG12a相對值253 3.544 4±74.859 6(P<0.01),ZIKV RNA分子的相對值為0.438 8±0.011(P<0.01)。WB確認: ISG12a在蛋白水平成功高表達(圖3-B)并抑制ZIKV的復制(圖3-E)。2.4 抑制ISG12a的表達促進ZIKV的復制


本文編號：2903185