發(fā)布時(shí)間：2017-04-06 19:01

  本文關(guān)鍵詞：尼古丁對(duì)大鼠下丘腦室旁核小細(xì)胞神經(jīng)元活動(dòng)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：[目的]下丘腦室旁核(PVN)小細(xì)胞神經(jīng)元調(diào)控自主神經(jīng)活動(dòng),在心血管功能、神經(jīng)內(nèi)分泌活動(dòng)及能量代謝調(diào)節(jié)方面起重要作用。在體實(shí)驗(yàn)研究表明,尼古丁可活化PVN神經(jīng)元煙堿樣受體,影響攝食、能量代謝和神經(jīng)內(nèi)分泌功能,然而在離體條件下,活化煙堿樣受體對(duì)PVN小細(xì)胞神經(jīng)元活動(dòng)影響機(jī)制尚無報(bào)道。因此,本研究聯(lián)合應(yīng)用膜片鉗記錄、組織化學(xué)和神經(jīng)藥理學(xué)等技術(shù)手段,在新生大鼠下丘腦切片上觀察尼古丁對(duì)大鼠下丘腦小細(xì)胞神經(jīng)元自發(fā)性放電和興奮性突觸后電流(sEPSC)活動(dòng)的影響；研究尼古丁對(duì)自發(fā)性活動(dòng)影響的劑量依存性以及半數(shù)有效濃度；探討PVN內(nèi)尼古丁敏感小細(xì)胞神經(jīng)元的組織學(xué)特征；明確尼古丁對(duì)PVN小細(xì)胞神經(jīng)元的影響機(jī)制,有助于闡明尼古丁對(duì)心血管及下丘腦神經(jīng)內(nèi)分泌功能活動(dòng)的調(diào)節(jié)機(jī)理。[材料與方法]出生后14-21d的Wistar雄性的大鼠。使用異氟烷深度麻醉后,斷頭取腦,使用萊卡1200S全自動(dòng)振動(dòng)切片機(jī)制備厚度為250μm、內(nèi)含PVN的下丘腦切片。在室溫下,將下丘腦切片置于充95%02和5%C02混合氣體的人工腦脊液中孵育1h以上。人工腦脊液由以下成分構(gòu)成(in mM)：118 NaCl,3 KCl, 1 MgCl2·6H2O,1 NaH2PO4·2H2O,25 NaHCO3,10 D-Glucose,2 CaCl2; PH:7.3-7.4,滲透壓為295-305 mOsM。記錄電極內(nèi)灌裝10μl內(nèi)液,電極阻抗為4-6 MΩ。聯(lián)合應(yīng)用全細(xì)胞膜片鉗、生物素染色和神經(jīng)藥理學(xué)手段研究尼古丁對(duì)PVN小細(xì)胞神經(jīng)元自發(fā)性放電頻率、膜電位和sEPSCs的影響。PVN神經(jīng)元全細(xì)胞膜片鉗記錄是通過Axon-700B膜片鉗放大器、Digidata 1400 A系列數(shù)模轉(zhuǎn)換器、Clampex10.4數(shù)據(jù)包和電腦來實(shí)現(xiàn)的,數(shù)據(jù)采集后存于移動(dòng)硬盤和DVD光盤用于分析,只有記錄完整且基線穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用于數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后腦片用4%多聚甲醛在室溫下固定24h后,然后置于生物素復(fù)合物中過夜。通過DAB組織化學(xué)檢測(cè)生物素分布,顯微鏡下分析記錄細(xì)胞的組織學(xué)特征。采用Clampfit10.4軟件對(duì)電生理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,采用SPSS軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,均數(shù)的比較采用配對(duì)T檢驗(yàn),P0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。[結(jié)果](1)PVN小細(xì)胞神經(jīng)元胞體平均直徑為12.6±1.10μm,樹突個(gè)數(shù)為2-6個(gè)；自發(fā)性放電頻率為2.21±0.24 Hz,平均膜電位為-54.7±1.3 mV。(2)在電流鉗記錄模式下,灌流尼古丁(1μM)可使46.6%的PVN小細(xì)胞神經(jīng)元產(chǎn)生可逆性膜電位去極化和放電頻率增加。(3)尼古丁對(duì)部分PVN小細(xì)胞神經(jīng)元自發(fā)性活動(dòng)的興奮作用具有劑量依存性,半數(shù)有效抑制濃度為13μM。(4)尼古丁可顯著增加尼古丁敏感PVN小細(xì)胞神經(jīng)元興奮性突觸電流(EPSCs)的發(fā)生頻率,但對(duì)EPSCs振幅影響不大。提示尼古丁誘發(fā)PVN敏感神經(jīng)元興奮可能與其突觸前行為有關(guān)。[結(jié)論]尼古丁興奮PVN煙堿能傳人纖維,導(dǎo)致部分PVN小細(xì)胞神經(jīng)元產(chǎn)生膜去極化,增加自發(fā)性放電和sEPSCs頻率。
【關(guān)鍵詞】：尼古丁 下丘腦室旁核 小細(xì)胞神經(jīng)元 全細(xì)胞膜片鉗記錄 生物素染色 自發(fā)性放電
【學(xué)位授予單位】：延邊大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R338
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-11
• 英文縮寫詞11-13
• 第一章 前言13-16
• 第二章 材料與方法16-19
• 1. 試驗(yàn)材料16-17
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及腦片制備16
• 1.2 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備16
• 1.3 實(shí)驗(yàn)用藥16-17
• 2 實(shí)驗(yàn)方法與步驟17-19
• 2.1 全細(xì)胞膜片鉗記錄及生物素染色17
• 2.2 生物素染色17-18
• 2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析18-19
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果19-25
• 3.1 PVN小細(xì)胞神經(jīng)元的電生理與組織學(xué)特征19-20
• 3.2 尼古丁對(duì)PVN處小細(xì)胞神經(jīng)元自發(fā)性放電活動(dòng)的影響20-23
• 3.3 尼古丁對(duì)PVN敏感小細(xì)胞神經(jīng)元興奮性性突觸后電位的影響23-25
• 第四章 討論25-27
• 第五章 結(jié)論27-28
• 參考文獻(xiàn)28-30
• 綜述 尼古丁對(duì)神經(jīng)元活動(dòng)及突觸傳遞的作用30-45
• 1. 尼古丁的理化性質(zhì)30-31
• 2. 尼古丁受體31-32
• 3. 尼古丁對(duì)突觸傳遞及遞質(zhì)釋放的影響32-35
• 4. 尼古丁的神經(jīng)保護(hù)功能35-37
• 參考文獻(xiàn)37-45
• 致謝45

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 羅蘭,張維寧,鄭元林,吳馥梅;ACTH_(4-9)類似物對(duì)小鼠海馬突觸體Ca~(2+)水平的調(diào)節(jié)作用[J];生理學(xué)報(bào);1998年04期

  本文關(guān)鍵詞：尼古丁對(duì)大鼠下丘腦室旁核小細(xì)胞神經(jīng)元活動(dòng)的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：289449