目的:本實(shí)驗(yàn)通過(guò)使用LPS腹腔注射構(gòu)建小鼠膿毒血癥急性腎損傷動(dòng)物模型,通過(guò)分析多種炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激指標(biāo),闡明OCA預(yù)處理對(duì)膿毒血癥小鼠急性腎損傷的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以為膿毒血癥急性腎損傷的臨床治療提供參考。方法:將總共48只小鼠隨機(jī)分成4組,分別為:對(duì)照組、OCA組、LPS組、LPS+OCA組。在LPS組中,給小鼠腹腔內(nèi)注射LPS;在對(duì)照組中,使用等劑量的生理鹽水代替LPS進(jìn)行注射;在LPS+OCA組中,分別在LPS注射前的第48小時(shí)、24小時(shí)和1小時(shí)使用OCA經(jīng)管飼法對(duì)小鼠經(jīng)行預(yù)處理。在OCA組中,分別在生理鹽水注射前第48小時(shí)、24小時(shí)和1小時(shí)通過(guò)管飼法給小鼠施用三劑OCA。分別在注射藥物后2小時(shí),8小時(shí)和24小時(shí)處死小鼠。收集小鼠全腎組織(包括皮質(zhì)和髓質(zhì))及小鼠血清(血液樣本于小鼠處死時(shí)留取)用于評(píng)價(jià)腎功能、分析腎臟病理?yè)p傷和明確炎性反應(yīng)及氧化應(yīng)激的分子指標(biāo)。結(jié)果:OCA預(yù)處理激活了小鼠腎臟組織中的FXR信號(hào),OCA預(yù)處理減輕了LPS誘導(dǎo)的小鼠急性腎損傷期間的腎功能障礙和病理?yè)p傷。首先,OCA預(yù)處理減少LPS誘導(dǎo)的小鼠急性腎損傷期間腎臟組織炎癥相關(guān)細(xì)胞因子的產(chǎn)生;經(jīng)過(guò)進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn),我們發(fā)現(xiàn)OCA預(yù)處理可抑制小鼠腎皮質(zhì)腎小管上皮細(xì)胞NF-κB p65和NF-κB p50亞基的核轉(zhuǎn)位;其次,我們還發(fā)現(xiàn)OCA預(yù)處理減少了LPS誘導(dǎo)的膿毒血癥期間小鼠腎臟組織GSH(谷胱甘肽)的消耗,同時(shí)可以減緩腎組織脂質(zhì)過(guò)氧化;抑制腎臟蛋白質(zhì)的硝化作用;最后我們發(fā)現(xiàn)使用OCA預(yù)處理可以部分抑制LPS誘導(dǎo)的膿毒血癥期間小鼠腎臟組織NADPH氧化酶和i NOS(誘導(dǎo)型一氧化氮合酶)基因的轉(zhuǎn)錄。結(jié)論:通過(guò)實(shí)驗(yàn)我們發(fā)現(xiàn)OCA可以通過(guò)激活腎臟FXR信號(hào)進(jìn)而抑制腎臟炎性反應(yīng)和氧化應(yīng)激,最終可以減輕膿毒血癥誘導(dǎo)的急性腎損傷。這些結(jié)果為FXR作為腎臟炎性反應(yīng)和氧化應(yīng)激的重要調(diào)節(jié)劑提供了證據(jù)。
【學(xué)位單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類(lèi)】：R459.7;R692.5;R-332
【部分圖文】：

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文通過(guò)使用免疫組織化學(xué)法，我們分析了 OCA 預(yù)處理對(duì)小鼠腎臟組織 FXR 活化的影響。正如預(yù)期的結(jié)果那樣， FXR 陽(yáng)性細(xì)胞主要分布于腎臟近端腎小管上皮細(xì)胞，進(jìn)一步分析我們發(fā)現(xiàn)經(jīng)過(guò) OCA 預(yù)處理的小鼠腎組織中 FXR 陽(yáng)性細(xì)胞核的3.結(jié)果3.1 OCA 預(yù)處理促進(jìn)小鼠腎臟 FXR 的核轉(zhuǎn)位

20圖 2.OCA 預(yù)處理減輕 LPS 誘導(dǎo)的小鼠急性腎損傷和腎功能障礙。（A 和 B）評(píng)估腎臟組織病理學(xué)。（ A）HE 染色顯示腎小管擴(kuò)張（實(shí)心箭頭），腎小球擴(kuò)張（空心箭頭），細(xì)胞質(zhì)空泡化（箭頭）和腎小管上皮細(xì)胞的管狀刷狀緣消失（*）。DCT：遠(yuǎn)曲小管；PCT：近曲小管;；G：腎小球。顯微鏡放大倍數(shù)：400×。（B）病理學(xué)評(píng)分用于評(píng)估不同組之間腎損傷的程度。（C 和 D）血液指標(biāo)評(píng)估腎功能。（C）血清肌酐；（D）血清 BUN。所有數(shù)據(jù)均表示為 X±SEM（n = 6）。* P <0.05，** P <0.01。3.3 OCA 預(yù)處理抑制 LPS 誘導(dǎo)的小鼠急性腎損傷中的腎細(xì)胞凋亡通過(guò)使用 TUNEL 染色，我們分析了 OCA 預(yù)處理對(duì) LPS 誘導(dǎo)的小鼠腎細(xì)胞凋亡的影響。如圖 3A 所示，我們?cè)?LPS 注射后 2 小時(shí)觀察到小鼠腎組織中的大量TUNEL 陽(yáng)性細(xì)胞。進(jìn)一步分析顯示 TUNEL 陽(yáng)性細(xì)胞主要分布在腎皮質(zhì)腎小管上

圖 3.OCA 預(yù)處理抑制 LPS 誘導(dǎo)的小鼠急性腎損傷中的腎細(xì)胞凋亡。（A）通過(guò) TUNEL 技術(shù)檢測(cè)腎臟細(xì)胞凋亡。箭頭表示腎皮質(zhì)腎小管上皮細(xì)胞中的 TUNEL +細(xì)胞。顯微鏡放大倍數(shù)：400×。（B）評(píng)估 TUNEL +細(xì)胞在不同組中的百分比。所有數(shù)據(jù)均表示為 X±SEM（n = 6）。** P <0.01。3.4 OCA 預(yù)處理抑制小鼠急性腎損傷中 LPS 誘導(dǎo)的促炎細(xì)胞因子和趨化因子使用實(shí)時(shí)定量 PCR，我們分析了 OCA 預(yù)處理對(duì)小鼠急性腎損傷時(shí) LPS 誘導(dǎo)的腎炎性細(xì)胞因子基因轉(zhuǎn)錄的影響。如圖 4A-C 所示，腎臟組織 tnf-α，il-6 和 il-1β三種促炎細(xì)胞因子的 mRNAs，LPS 注射后 2 小時(shí)和 LPS 注射后 8 小時(shí)增加顯著。雖然 OCA 預(yù)處理對(duì) LPS 注射后 2 小時(shí)小鼠腎臟炎癥細(xì)胞因子的基因轉(zhuǎn)錄幾乎沒(méi)有影響，但在 LPS 注射后 8 小時(shí)，OCA 預(yù)處理顯著抑制小鼠促炎細(xì)胞因子的基因轉(zhuǎn)錄（圖 4A- C）。我們分析了 OCA 預(yù)處理對(duì)小鼠腎組織中 LPS 誘導(dǎo)的趨化因子基因轉(zhuǎn)錄的影響。如圖 4D- F 所示，正如我們預(yù)期的那樣，在 LPS 注射后 2 小時(shí)，腎臟組織 mip-2、kc 和 mcp-1 mRNAs 的表達(dá)顯著上升，LPS 注射后 8 小時(shí)仍然保持高水平。LPS 注射后 8 小時(shí)的 OCA 預(yù)處理顯著抑制小鼠腎組織中 mip-2，kc 和
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本文編號(hào)：2886176