目的探討通過添加TGF-β抑制劑SB431542控制人羊膜上皮細胞的干性、表型和間質特性,為SB431542在預防人羊膜上皮細胞上皮間質轉化(EMT)中的作用提供依據。方法使用不同濃度SB431542培養(yǎng)P2代人羊膜上皮細胞,通過細胞的增殖曲線和基因水平(CK8、ACTA2、OCT4和KLF4)表達的差異,篩選出最適濃度。以不加SB431542的細胞為對照組,以加最適濃度的SB431542為實驗組,比較不同代次的對照組和實驗組的細胞倍增時間,基因表達水平(CK8、CK19、OCT4、KLF4、Vimentin、ACTA2),流式檢測細胞表面標志物(CD146、CD105、SSEA4)和免疫熒光檢測細胞蛋白表達情況(CK8、ACTA2、EpCAM)的差異。結果使用不同濃度SB431542培養(yǎng)P2代人羊膜上皮細胞,5μmol/L SB431542培養(yǎng)條件下的細胞增殖曲線最優(yōu),且基因水平(CK8、ACTA2、OCT4和KLF4)表達最優(yōu),最終篩選最適藥物濃度為5μmol/LSB431542完成后續(xù)實驗。在5μmol/L SB431542培養(yǎng)條件下,P7代實驗組的細胞倍增時間優(yōu)于對照組;P7代實驗組細胞的CK8、CK19、KLF4、OCT4的表達水平明顯高于對照組細胞的表達水平,實驗組的ACTA2(α-SMA)和Vimentin表達水平明顯低于對照組細胞的表達水平;P3和P5代細胞的實驗組的間充質標志物CD146、CD105的表達量均比對照組的低,實驗組干細胞標志物SSEA4的表達量均比對照組的高;P7代實驗組的CK8和EpCAM表達效果強于P7代對照組細胞,且P7代實驗組的α-SMA基本不表達。結論 5μmol/LSB431542在人羊膜上皮細胞體外培養(yǎng)7個代次以內可以有效地抑制其上皮間質轉化的發(fā)生。
【部分圖文】：

實驗數據（圖2）表明，P1～P6人羊膜上皮細胞加藥和不加藥的細胞倍增時間基本一致。在P7代，加藥的細胞倍增時間為43.5 h，不加藥的細胞倍增時間為61.4 h。5μmol/L SB431542在7個代次內可維持羊膜上皮細胞的增殖。圖2 5μmol/L SB431542對不同代次的人羊膜上皮細胞的倍增時間影響

圖1 5μmol/L SB431542為hAECs生長的最佳的濃度（A：每天將CCK8加入不同濃度SB431542培養(yǎng)的細胞中，根據OD450讀數繪制生長曲線；B：使用qPCR檢測不同濃度SB431542培養(yǎng)的P2 hAECs的生物標志物的表達水平情況；*P<0.05)2.3 5μmol/L SB431542對人羊膜上皮細胞的基因表達水平的影響

使用qPCR檢測對照組和實驗組P1、P3、P7代人羊膜上皮細胞的基因表達水平情況。使用的Marker為上皮標志物角蛋白8(CK8）和19(CK19）、干細胞標志物OCT4和KLF4、間充質干細胞標志物波形蛋白和ACTA2（α-SMA）。從實驗數據（圖3）來看，對照組和實驗組在CK8、CK19、KLF4、OCT4、波形蛋白和ACTA2（α-SMA）的基因表達水平上都有顯著性差異（P<0.05）。且在P7代時，實驗組細胞的CK8、CK19、KLF4、OCT4的表達水平明顯高于對照組細胞的表達水平；實驗組細胞的ACTA2（α-SMA）和波形蛋白明顯低于對照組的表達水平。2.4 5μmol/L SB431542對人羊膜上皮細胞的表面標志物的影響
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