目的:構(gòu)建高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖小鼠模型和自發(fā)形成肥胖的ob-/-、db-/-小鼠模型,在不同肥胖模型中探究肥胖對(duì)PDGs形態(tài)結(jié)構(gòu)及相關(guān)蛋白指標(biāo)的影響。方法:肥胖小鼠模型構(gòu)建及分組:HFD組(n=10):通過(guò)高脂飲食誘導(dǎo)C57BL/6小鼠3個(gè)月構(gòu)建肥胖小鼠模型;HFD-ctrl組(n=6):選取同期C57BL/6小鼠,普通飲食3個(gè)月;OB組(n=8):選取7-8周齡ob-/-小鼠,普通飲食喂養(yǎng)4周;OB-ctrl組(n=6):選取同窩ob-/w小鼠,普通飲食喂養(yǎng)4周;DB組(n=8)選取7-8周齡db-/-小鼠,普通飲食喂養(yǎng)4周;DB-ctrl組(n=6):選取同窩db-/w小鼠,普通飲食喂養(yǎng)4周;每周稱重,檢測(cè)血糖、甘油三酯及總膽固醇;通過(guò)HE染色分析小鼠PDGs結(jié)構(gòu)及肥胖對(duì)PDGs結(jié)構(gòu)及數(shù)量影響;通過(guò)免疫組化及特殊染色探究肥胖條件下PDGs中TFF2、MUC5AC表達(dá)及Alcian blue染色變化情況。結(jié)果:肥胖小鼠體重、血糖、甘油三酯、總膽固醇較對(duì)照組明顯升高,差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;胰腺主導(dǎo)管周?chē)嬖赑DGs結(jié)構(gòu),與瘦鼠相比,肥胖小鼠的PDGs數(shù)量增多;TFF2及Alcian blue染色是PDGs特異性標(biāo)記,肥胖小鼠PDGs中TFF2表達(dá)升高、Alcian blue染色加深,MUC5AC表達(dá)陰性。結(jié)論:高脂飲食誘導(dǎo)法成功建立肥胖小鼠模型,肥胖促進(jìn)了PDGs的增殖,導(dǎo)致酸性粘蛋白分泌增加及TFF2表達(dá)升高,這可能與胰腺導(dǎo)管損傷修復(fù)相關(guān)。
【學(xué)位單位】：東南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R589.2;R-332
【部分圖文】：

血糖輕度升高，OB 組小鼠血糖中度升高，DB 組小鼠形成糖尿病；圖 E:小鼠總膽固醇變化 ，三組肥胖小鼠總膽固醇均較各自瘦鼠組升高，差異顯著；圖 F:小鼠甘油三酯變化，三組肥胖小鼠總膽固醇均較各自瘦鼠組升高，差異顯著;*:P<0.05; **:P<0.001）2.2 胰腺導(dǎo)管周?chē)?PDGs 結(jié)構(gòu)PDGs 結(jié)構(gòu)上呈主胰管芽出的腺體樣囊性外突的特殊結(jié)構(gòu)，存在于胰腺近端大導(dǎo)管周?chē)g質(zhì)內(nèi)，其內(nèi)細(xì)胞含有豐富粘液性蛋白，TFF2 及 Alcian blue 染色是 PDGs 的特異性標(biāo)記，PDGs 形態(tài)及功能類似于胃腸道上皮組織內(nèi)干細(xì)胞[52]。通過(guò)對(duì)臨近切片分別進(jìn)行 HE 染色、TFF2 免疫組化及阿利新藍(lán)染色，發(fā)現(xiàn)正常小鼠的近端主胰管壁內(nèi)存在形態(tài)上不同于胰腺導(dǎo)管的特殊結(jié)構(gòu)，該結(jié)構(gòu)內(nèi)細(xì)胞呈單層矮柱狀排列，含有豐富的胞漿，細(xì)胞核呈圓形，位于細(xì)胞基底部，同時(shí)發(fā)現(xiàn)該特殊結(jié)構(gòu)內(nèi) TFF2 的表達(dá)及 Alcian blue染色陽(yáng)性，而在胰腺導(dǎo)管內(nèi) TFF2 及 Alcian blue 染色陰性。這說(shuō)明胰腺主導(dǎo)管周?chē)_實(shí)存在不同于胰腺導(dǎo)管的特殊結(jié)構(gòu)，PDGs，(圖 2)。

圖 3：肥胖小鼠和對(duì)照組 PDGs 結(jié)構(gòu)數(shù)量(圖 A：HFD 小鼠組 PDGs 結(jié)構(gòu),100X；圖 B：HFD-ctrl 小鼠組 PDGs 結(jié)構(gòu) 100X；圖 C：OB 小鼠組結(jié)構(gòu)，40X；圖 D：OB-ctrl 小鼠組 PDGs 結(jié)構(gòu)，40X；圖 E：DB 小鼠組 PDGs 結(jié)構(gòu)，40X；圖 F：DB小鼠組 PDGs 結(jié)構(gòu)，40X；圖 G：圖 A 與圖 B 中 PDGs 結(jié)構(gòu)數(shù)量對(duì)比；圖 H：圖 C 與圖 D 中 PDGs 數(shù)量對(duì)比；圖 I：圖 E 與圖 F 中 PDGs 結(jié)構(gòu)數(shù)量對(duì)比； 表示 PDGs 結(jié)構(gòu))2.4 肥胖小鼠 PDGs 中標(biāo)記物表達(dá)變化2.4.1 Alcian blue 染色變化：本實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn) HFD-ctrl 組小鼠、OB-ctrl 組小鼠及 DB-ctrl 組小鼠 PDGs 結(jié)構(gòu)內(nèi)較淺的Alcian blue染色,染色面積較小，而對(duì)應(yīng)的HFD組小鼠、OB小鼠及DB小鼠P結(jié)構(gòu)中 Alcian blue 染色明顯增強(qiáng)，且染色面積增大，這說(shuō)明肥胖能夠促進(jìn) PDGs 分性粘蛋白（圖 4）。C

27圖 5：PDGs 結(jié)構(gòu)中 TFF2 表達(dá) A:HFD 小鼠組 PDGs 結(jié)構(gòu)中 TFF2 表達(dá),200X；圖 B:HFD-ctrl 小鼠組 PDGs 結(jié)構(gòu)中 TFF2 表00X；圖 C:OB 小鼠組 PDGs 結(jié)構(gòu)中 TFF2 表達(dá),200X；圖 D:OB-ctrl 小鼠組 PDGs 結(jié)構(gòu)中 TFF,200X;圖 E:DB 小鼠組 PDGs 結(jié)構(gòu)中 TFF2 表達(dá),200X 圖 F:DB-ctrl 小鼠組 PDGs 結(jié)構(gòu)中 TFF200X）。.3 MUC5AC 表達(dá)變化：PDGs 在受到炎性刺激時(shí)，發(fā)生粘液性化生，表達(dá)諸多和化生相關(guān)蛋白。通過(guò)免，在三組肥胖模型小鼠及各自對(duì)照瘦鼠的 PDGs 中 MUC5AC 的表達(dá)均呈陰性（圖 6明肥胖未能引起 PDGs 發(fā)生明顯的化生性改變。
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