目的對(duì)云南省血吸蟲(chóng)病流行區(qū)的一種擬釘螺及其寄生吸蟲(chóng)進(jìn)行分子生物學(xué)鑒定,了解其種屬分類地位。方法采集云南省祥云縣擬釘螺和釘螺,壓碎鏡檢采集螺軟體腹足部組織,并觀察其體內(nèi)尾拗寄生情況。采用逸拗法采集擬釘螺寄生的不同形態(tài)尾拗,螺體組織和尾拗樣本分別提取基因組DNA,采用PCR法擴(kuò)增螺體內(nèi)16S核糖體RNA(16S rRNA)、細(xì)胞色素c氧化酶I (COI)、28S核糖體DNA (28S rDNA)基因及其體內(nèi)寄生吸蟲(chóng)尾拗的NADH脫氫酶亞基l(ND1)、28S rfNA基因,對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序,并通過(guò)序列比對(duì)及系統(tǒng)進(jìn)化分析鑒定樣本螺和寄生吸蟲(chóng)種屬。結(jié)果共檢測(cè)擬釘螺樣本382只,發(fā)現(xiàn)無(wú)叉形、雙叉形、燕子形等3種形態(tài)吸蟲(chóng)尾拗,陽(yáng)性率分別為20.94%(80/382)、3.40%(13/382)、7.07%(27/382)。基于16S rRNA、COI、28S rDNA基因的分子進(jìn)化分析顯示,該擬釘螺與滇池德拉維螺(Delavaya dianchiensis同源性較高、聚在同一個(gè)分支�；贜D1、28S rDNA4基因的序列分析顯示,無(wú)叉形尾拗吸蟲(chóng)屬側(cè)殖吸蟲(chóng)科,燕子形尾拗吸蟲(chóng)屬孔腸科,雙叉形尾拗吸蟲(chóng)可能為不同于中華血吸蟲(chóng)(Schistosoma sinensium)和勾形卵血吸蟲(chóng)(Schistosoma ovuncatum)的另一種血吸蟲(chóng)。結(jié)論初步了解了云南省血吸蟲(chóng)病流行區(qū)擬釘螺及其寄生吸蟲(chóng)種屬分類,但更明確的分類關(guān)系和危害性等尚有待深入研究。
【部分圖文】：

采集的擬釘螺樣本剔除死螺后，有382只進(jìn)行了壓碎鏡檢觀察，發(fā)現(xiàn)燕子形、無(wú)叉形和雙叉形3種形態(tài)的吸蟲(chóng)尾蚴(圖1)，其檢出陽(yáng)性率分別為7.07%(27/382）、3.40%(13/382）、20.94%(80/382）。其中2只擬釘螺體內(nèi)同時(shí)發(fā)現(xiàn)了無(wú)叉形和燕子形尾蚴。2樣本螺分子鑒定

云南省血吸蟲(chóng)病流行區(qū)擬釘螺和釘螺16S rRNA、COI、28S rDNA基因擴(kuò)增片段長(zhǎng)度相似，分別為500、630、740 bp左右（圖2）。初步序列比對(duì)顯示，該地區(qū)擬釘螺16S rRNA、COI、28S rDNA基因擴(kuò)增產(chǎn)物序列與GenBank中滇池德拉維螺（Delavaya dianchiensis）同源性分別為94.8%、87.6%、95.7%；釘螺16S rRNA、28S rDNA基因擴(kuò)增產(chǎn)物序列與湖北釘螺滇川亞種同源性均為100%（圖3～5）。圖3 云南省血吸蟲(chóng)病流行區(qū)擬釘螺和釘螺2828SS rDNA基因序列

圖2 云南省血吸蟲(chóng)病流行區(qū)擬釘螺1616S rRNAS、COI、2828SrDNA基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳分析圖4 云南省血吸蟲(chóng)病流行區(qū)擬釘螺1616S rRNAS基因擴(kuò)增序列
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