目的觀察高遷移率族蛋白B1(High mobility group box 1,HMGB1)在出生后不同年齡段小鼠耳蝸中的表達分布,探索其功能及意義。方法采用免疫熒光染色及激光共聚焦顯微鏡檢測HMGB1在出生后第1天(P1)、7天(P7)、12天(P12)、17天(P17)、21天(P21)以及成年小鼠共6個年齡段耳蝸中的表達分布。結(jié)果各年齡段小鼠耳蝸中均可見HMGB1的胞核表達,HMGB1胞核表達廣泛分布在血管紋和螺旋韌帶、耳蝸側(cè)壁的血管、Corti器支持細胞及感覺毛細胞、螺旋緣、螺旋神經(jīng)元及其周圍的神經(jīng)膠質(zhì)細胞。免疫熒光雙重染色顯示HMGB1與Sox2共表達在各組耳蝸Corti器支持細胞及神經(jīng)膠質(zhì)細胞。從P1至P12,HMGB1與Sox2表達分布在大上皮嵴。HMGB1在P7開始表達在聽覺外周神經(jīng)纖維和內(nèi)凹細胞,并從P12起出現(xiàn)表達在少數(shù)螺旋神經(jīng)元的胞漿和胞核,一直持續(xù)至成年。分析平均光密度值發(fā)現(xiàn),P1組Deiters細胞HMGB1表達的平均光密度值與P7、P12、P21和成年組之間有明顯差異,且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(F=4.125、P=0.017*0.05)。結(jié)論 HMGB1在小鼠耳蝸發(fā)育過程中的時空表達,表明其在耳蝸發(fā)育及聽覺功能中發(fā)揮十分重要的作用。
【部分圖文】：

新生小鼠耳蝸側(cè)壁尚未發(fā)育成熟，構(gòu)成血管紋的3層細胞未完全形成。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，HMGB1在耳蝸側(cè)壁胞核的表達自出生即出現(xiàn)(圖1A)。P7組，血管紋3層細胞清晰可見，細胞間隙擴大。HMGB1表達在血管紋中央?yún)^(qū)域的血管，血管紋緣細胞、中間細胞和連接螺旋韌帶的基底細胞。HMGB1胞核表達也出現(xiàn)在螺旋韌帶纖維細胞與螺旋韌帶內(nèi)血管(圖1B)。P12組，血管紋及螺旋韌帶基本發(fā)育成熟，HMGB1的表達繼續(xù)在血管紋、螺旋韌帶以及耳蝸側(cè)壁血管(圖1C-D)。在P17和P21組，HMGB1在耳蝸側(cè)壁的表達分布與P12組基本一致(圖1E-G)，并持續(xù)至成年期(圖1H-I)。2.2 聽覺上皮HMGB1的表達

在P1和P7組，HMGB1除了表達在Corti器中的內(nèi)毛細胞和外毛細胞外，Deiters細胞、柱細胞、Hensen細胞以及大上皮嵴也出現(xiàn)HMGB1的表達，并與支持細胞標記蛋白Sox2共表達(圖2A-F)。另外，襯覆基底膜鼓階面的鼓室邊緣細胞可見HMGB1的表達。從P7起，HMGB1開始表達在內(nèi)毛細胞突觸區(qū)的神經(jīng)纖維末梢(圖2D)。P12組大上皮嵴細胞的數(shù)量及形態(tài)出現(xiàn)變化，大上皮嵴“嵴突”消失，而內(nèi)凹細胞明顯可見。HMGB1與Sox2共表達在大上皮嵴未完全退化的殘留柱狀細胞(圖2G-I)。隨著P17組大上皮嵴完全退化解體，HMGB1與Sox2在大上皮嵴的共表達也消失(圖3A-C)。P21和成年期，HMGB1與Sox2的表達分布未見明顯改變，鼓室邊緣細胞仍有HMGB1的胞核表達(圖3D-I)。圖3 P17、P21和成年組聽覺上皮HMGB1及Sox2的表達。A、D、G：各組均可見HMGB1表達在Corti器內(nèi)指細胞、毛細胞、Deiters細胞、Hensen細胞、鼓室邊緣細胞及外周神經(jīng)纖維末梢（箭頭）。B、E、H：各組均可見Sox2表達在Corti器支持細胞。C、F、I為DAPI、HMGB1和Sox2的疊加成像。ipc：內(nèi)指細胞；ihc：內(nèi)毛細胞；ohc：外毛細胞；dc:Deiters細胞；pc：柱細胞；hc:Hensen細胞；tbc：鼓室邊緣細胞；is：內(nèi)凹細胞。

圖2 P1、P7和P12組聽覺上皮HMGB1及Sox2的表達。A、D、G:HMGB1表達在大上皮嵴、Corti器毛細胞、柱細胞、De-iters細胞以及Hensen細胞。鼓室邊緣細胞及內(nèi)毛細胞基底部的神經(jīng)纖維末梢（箭頭）也有HMGB1的表達。P12組，HMGB1在內(nèi)凹細胞的表達顯著。B、E、H:Sox2表達在大上皮嵴、Corti器支持細胞。C、F、I為DAPI、HMGB1和Sox2的疊加成像。ger：大上皮嵴；ihc：內(nèi)毛細胞；ohc：外毛細胞；dc:Deiters細胞；pc：柱細胞；hc:Hensen細胞；tbc：鼓室邊緣細胞；is：內(nèi)凹細胞。2.3 螺旋緣HMGB1的表達
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