背景呼吸是哺乳動物一切生命活動的前提,延髓基本節(jié)律性呼吸放電起源于延髓腹側(cè)呼吸中樞的面神經(jīng)后核內(nèi)側(cè)區(qū)。煙堿型乙酰膽堿受體(nicotinic acetylcholine receptors,nAChRs)是一種廣泛分布在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的離子通道型受體,參與調(diào)節(jié)包括中樞神經(jīng)系統(tǒng)在內(nèi)的人體多種生理功能,如注意力、學習、覺醒和認知功能等。近年來對nAChRs功能的研究大多集中在中樞神經(jīng)元損傷后的神經(jīng)保護作用,對它在調(diào)節(jié)延髓呼吸中樞方面的研究不多見。隨著新生兒缺血缺氧性腦病和新生兒發(fā)育緩慢引起的延髓呼吸中樞抑制的發(fā)生率逐年增加,研究nAChRs在常氧和低氧條件下對延髓呼吸中樞基本節(jié)律性呼吸放電作用的研究有重要意義。腺苷作為直接能量物質(zhì)ATP的中間代謝產(chǎn)物通過增加腺苷濃度間接增加ATP濃度和作為神經(jīng)遞質(zhì)通過腺苷受體調(diào)節(jié)神經(jīng)元興奮性。ATP在臨床上廣泛用于治療缺血缺氧性疾病,ATP進入體內(nèi)后會改變體內(nèi)腺苷濃度。為研究nAChRs在常氧和低氧條件下對新生大鼠離體延髓腦片基本節(jié)律性呼吸放電(respiratory related rhythmic discharge,RRDA)的調(diào)節(jié)作用和腺苷是否參與該調(diào)節(jié)作用我們設計并完成本實驗,為中樞性呼吸疾病的研究及治療提供新的實驗依據(jù)及理論支持。目的探討nAChRs在常氧和低氧條件下對新生大鼠離體延髓腦片RRDA的調(diào)節(jié)作用,檢測不同氧濃度下和激活(阻斷)nAChRs時的腺苷濃度,研究分析腺苷是否參與nAChRs對新生大鼠離體延髓腦片RRDA的調(diào)節(jié)作用,為治療新生動物缺氧條件下延髓呼吸中樞疾病提供實驗基礎和思路。方法1.nAChRs增強低氧條件下新生大鼠延髓腦片RRDA。制備新生2d大鼠的離體延髓腦片并記錄腦片舌下神經(jīng)根RRDA。將腦片分為6組,每組6只。對照組,對比95%氧濃度下RRDA在10min、20min、30min、40min、50min有無差異,檢驗實驗模型是否成立并提供空白對照;低氧組,依次使用含95%、65%、50%氧濃度下的人工腦脊液依次灌流腦片,記錄RRDA;不同濃度尼古丁組,在95%氧濃度下,觀察不同濃度nAChRs激動劑尼古丁對RRDA的作用并選擇最適尼古丁濃度。不同濃度美加明組,在95%氧濃度下,觀察不同濃度nAChR抑制劑美加明對RRDA的作用并選擇最適美加明濃度。不同氧濃度尼古丁組,觀察分別在95%、65%、50%氧濃度下最適尼古丁濃度對RRDA的作用。不同氧濃度美加明組,觀察分別在95%、65%、50%氧濃度下最適美加明濃度對RRDA的作用。2.采用高效液相色譜法檢測腦片腺苷濃度。制備36只新生2d的大鼠離體延髓腦片,將腦片隨機分6組:95%對照組、50%低氧組、95%尼古丁組、95%美加明組、50%尼古丁組、50%美加明組。各組腦片分別在含95%氧濃度、50%氧濃度、95%氧濃度最適尼古丁濃度、50%氧濃度最適尼古丁、95%氧濃度最適美加明濃度、50%氧濃度最適美加明的人工腦脊液中孵育20min后檢測各組腦片腺苷濃度。結(jié)果1.對照組離體腦片各時間點RRDA在統(tǒng)計學上無差異(P0.05),確認了實驗可靠性和穩(wěn)定性。低氧抑制RRDA,隨著氧濃度的降低RRDA逐漸減弱,且不同氧濃度間有統(tǒng)計學差異(P0.01)。尼古丁在10μmol/L至80μmol/L濃度范圍內(nèi)興奮RRDA,40μmol/L尼古丁是最適濃度(P0.01)。美加明在2.5μmol/L至20μmol/L濃度范圍內(nèi)抑制RRDA,10μmol/L美加明是最適濃度(P0.01)。尼古丁增強相應氧濃度下RRDA(P0.01),隨氧濃度下降尼古丁對RRDA的作用逐漸減弱。美加明降低相應氧濃度下RRDA(P0.01),隨氧濃度下降美加明對RRDA的作用逐漸增強。2.高效液相色譜檢測實驗結(jié)果顯示:95%氧濃度時腺苷濃度是50%氧濃度的860.47%;95%氧濃度時尼古丁增加腺苷濃度252.70%,50%氧濃度時尼古丁增加腺苷濃度511.63%;95%氧濃度時美加明降低腺苷濃度71.62%,50%氧濃度時美加明降低腺苷濃度290.69%。nAChRs增強低氧時腺苷濃度,腺苷參與nAChRs對新生大鼠離體延髓腦片RRDA的興奮作用。結(jié)論激活nAChRs興奮新生大鼠離體延髓腦片RRDA;低氧抑制新生大鼠離體延髓腦片RRDA;nAChRs對低氧時的RRDA有興奮作用。腺苷參與nAChRs對低氧時RRDA的興奮作用。
【學位單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R332
【部分圖文】：

下神經(jīng)根的位置，用負壓吸附電極吸附到腦片腹側(cè)面的舌下神經(jīng)根，RRDA 經(jīng)直流前置放大器放大后由 BL-420F 信號采集系統(tǒng)采集并儲存在計算機內(nèi)，離體延髓腦片結(jié)構(gòu)如下圖1 所示。在實驗中使用不同氧濃度的人工腦脊液灌流腦片前，該腦脊液使用相應氧濃度的混合氣體飽和 30min 并在灌流過程中注意持續(xù)通氣和做好灌流槽的密封以防止氧氣彌散外漏。圖 1 新生大鼠離體延髓腦片結(jié)構(gòu)示意圖1.2.1.3 實驗分組本次實驗分為對照組、低氧組、不同濃度尼古丁組、不同濃度美加明組、不同氧濃度尼古丁組、不同氧濃度美加明組，共 6組，每組隨機分 6 只腦片，各組如下：

本組實驗用 95%氧濃度的混合氣體飽和并持續(xù)通氣的人工腦脊液灌流離體延髓腦片，對比 10min、20min、30min、40min、50 min 等 5 個時間點離體延髓腦片 RRDA 參數(shù) TI、IA、RC 數(shù)據(jù)之間有無統(tǒng)計學差異。實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn) 5 個時間點 RRDA 的TI、IA、RC 在統(tǒng)計學上無差異（p＞0.05），說明 RRDA 在 50min 內(nèi)穩(wěn)定、無增強無衰減，本部分實驗模型成立。結(jié)果見表 1、圖 2。表 1 對照組不同時間點的 RRDA 數(shù)據(jù)（ x±s ,n =6）時間（min） TI IA RC10 100 100 10020 98.33±3.26 99.36±5.39 102.06±6.2730 102.29±3.74 102.68±4.70 98.33±5.9140 98.75±4.45 98.67±5.53 99.16±7.1250 97.67±5.22 98.13±6.01 98.35±6.1F 0.521 0.369 0.674P 0.643 0.727 0.531

測量不同氧濃度灌流 10min 時離體延髓腦片 RRDA 的 TI、IA、RC，通過對比不同濃度下 RRDA 低氧對 RRDA 的作用。實驗結(jié)果顯示隨氧濃度的降低，離體延髓腦RRDA 逐漸減弱、TI 降低、IA 縮短、RC 延長。65%、50%氧濃度下 RRDA 與95%氧濃度下 RRDA 相比有統(tǒng)計學差異；65%氧濃度和 50%氧濃度下 RRDA 相比同樣在顯著性差異。結(jié)果如下表 2、圖 3。表 2 不同氧濃度對 RRDA 作用（ x±s ,n =6）氧濃度 TI IA RC對照組 100 100 10095% 100.57±3.72 101.67±4.70 102.67±3.2465% 75.57±5.09*73.09±5.89*128.28±4.25*50% 56.39±6.02*#54.59±7.48*#147.01±6.17*#F 25.162 39.153 17.947P 0.000 0.000 0.000注：與 95%氧濃度比較*P＜0.05 , 與 65%氧濃度比較#P＜0.05
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本文編號：2876420