目的:本實驗通過采用前交叉韌帶橫斷加內(nèi)側(cè)半月板切除的方法構(gòu)建SD大鼠骨關(guān)節(jié)炎(OA)模型,觀察其大體變化,向OA大鼠模型的關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射慢病毒介導(dǎo)的微小RNA(miRNA)-411,使軟骨組織中表現(xiàn)出miR-411過表達(dá)及低表達(dá)狀態(tài),并檢測基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-13、Ⅱ型膠原和Ⅳ型膠原的表達(dá),從而研究miR-411及MMP-13對大鼠OA模型中軟骨損傷的作用,對miR-411在OA發(fā)生發(fā)展中的作用機制進(jìn)行了初步的研究。方法:構(gòu)建SD大鼠OA模型,取8-10周齡,體重為280-300g雄性SD大鼠40只,隨機分為4組:A組為手術(shù)組;B組為手術(shù)聯(lián)合注射miR-411 mimics;C組為手術(shù)聯(lián)合注射miR-411 inhibitor;D組為假手術(shù)聯(lián)合注射miR-411 LV陰性對照組(每組10只)。手術(shù)組行右膝前交叉韌帶橫斷加內(nèi)側(cè)半月板切除。對照組僅打開關(guān)節(jié)囊,不破壞前交叉韌帶和內(nèi)側(cè)半月板,在OA模型手術(shù)后的第7天和第14天將100uL慢病毒介導(dǎo)的miR-411 mimics(3*10~8 TU/ml),miR-411 inhibitor(2?3*~8 TU/ml),miR-411 LV陰性對照(5*10~8 TU/ml)分別注射到相應(yīng)分組的SD大鼠OA模型的膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)。4周后處死所有大鼠,取大鼠的關(guān)節(jié)軟骨,對軟骨情況進(jìn)行大體的觀察,應(yīng)用qRT-PCR檢測miR-411在關(guān)節(jié)軟骨組織中的表達(dá)情況,利用Western Blot對關(guān)節(jié)軟骨中的MMP-13、Ⅱ型膠原和Ⅳ型膠原的表達(dá)水平進(jìn)行檢測。結(jié)果:1.在SD大鼠OA模型中,手術(shù)組4周后的脛骨平臺關(guān)節(jié)軟骨表面尚平滑,略粗糙,失去正常光澤,顏色較正常顏色略黃,局部軟化。假手術(shù)組軟骨則無明顯退行性改變。2.通過qRT-PCR檢測不同分組中軟骨組織的miR-411表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn)在假手術(shù)組及LV陰性對照組中的表達(dá)水平尚無明顯改變。而在過表達(dá)組中,miR-411的表達(dá)水平顯著上調(diào)(P0.05),低表達(dá)組中miR-411的表達(dá)水平顯著下調(diào)(P0.05)。3.通過Western Blot檢測造模后的MMP-13、Ⅱ型膠原和Ⅳ型膠原的表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn)在在手術(shù)組中MMP-13的表達(dá)較假手術(shù)組升高,而II型膠原和IV型膠原的表達(dá)降低;在miR-411過表達(dá)組中則發(fā)現(xiàn)MMP-13的表達(dá)水平降低,而II型和IV型膠原的表達(dá)略增加;而miR-411低表達(dá)組則情況相反,MMP-13的表達(dá)增加,而II型和IV型膠原的表達(dá)降低。發(fā)現(xiàn)miR-411隨著關(guān)節(jié)軟骨退行的程度加深而表達(dá)水平呈下降趨勢,而MMP-13的表達(dá)則隨著關(guān)節(jié)軟骨退行的程度加深而表達(dá)水平呈上升趨勢,II型膠原和IV型膠原的表達(dá)則與miR-411表達(dá)趨勢相似。結(jié)論:1.驗證了通過采用前交叉韌帶橫斷加內(nèi)側(cè)半月板切除的方法可以構(gòu)建SD大鼠OA模型,該手術(shù)方法操作簡單,創(chuàng)傷較小,可重復(fù)性高,適合骨性關(guān)節(jié)炎動物模型的建立。2.miR-411在SD大鼠OA模型軟骨組織中呈低表達(dá),而MMP-13在軟骨組織中呈高表達(dá),兩者呈現(xiàn)顯著的負(fù)相關(guān)關(guān)系,共同作用于骨性關(guān)節(jié)炎軟骨組織的退變過程中。本研究通過關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射慢病毒構(gòu)建miR-411異常表達(dá)的模型,發(fā)現(xiàn)miR-411的表達(dá)水平同OA發(fā)展的嚴(yán)重程度密切相關(guān),當(dāng)miR-411過表達(dá)時可以通過靶向抑制MMP-13的表達(dá)來延緩OA進(jìn)程中軟骨退變程度,在OA的發(fā)生發(fā)展中扮演重要角色,為OA發(fā)病機制的探索及OA新型靶向治療提供了新思路。
【學(xué)位單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R684.3;R-332
【部分圖文】：

取仰臥位，術(shù)者帶手術(shù)帽、口罩，洗手消毒后戴無菌手套，對大鼠右下巾，首先觸及右膝關(guān)節(jié)髕骨位置，在其內(nèi)側(cè) 1cm 左右位置行縱行切口，長約 切開剝離，直至暴露膝關(guān)節(jié)腔，然后假手術(shù)組逐層縫合各層組織，不破壞任手術(shù)組將髕骨向外側(cè)脫位，然后屈曲膝關(guān)節(jié)，將前交叉韌帶及內(nèi)側(cè)半月板充術(shù)中注意保護(hù)內(nèi)側(cè)副韌帶，然后直視下將前交叉韌帶完全橫斷，注意避免術(shù)帶發(fā)生增生黏連，隨后使用眼科剪將內(nèi)側(cè)半月板切除，最后將髕骨復(fù)位后，水及碘伏沖洗關(guān)節(jié)腔，使用 5-0 縫線完整關(guān)閉關(guān)節(jié)腔，逐層縫合切口，刀口大鼠清醒后回籠飼養(yǎng)，自由活動，不固定術(shù)側(cè)下肢。術(shù)后前三天給與注射青感染，每 3 天更換一次墊料，每天觀察大鼠生命狀態(tài)，確保右下肢可正�；顒覱A 模型手術(shù)后的第 7 天和第 14 天將 100uL 慢病毒介導(dǎo)的 miR-411 m*108TU / ml）、100uL 慢病毒介導(dǎo)的 miR-411inhibitor（2*108TU / ml）注射到的大鼠膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)，將 100uL 慢病毒介導(dǎo)的 miR-411 LV 陰性對照（5*108TU 到假手術(shù)組大鼠膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)，4 周后處死所有組別的大鼠并收集膝關(guān)節(jié)標(biāo)本的脛骨平臺、股骨內(nèi)外側(cè)髁及髕股關(guān)節(jié)處的軟骨及軟骨下骨，放置于液氮中保

結(jié)果結(jié)果1 大鼠脛骨平臺關(guān)節(jié)面大體觀察各組小鼠均存活至實驗完成，未發(fā)生感染、死亡等情況，動物模型制備完成后手術(shù)組組大鼠右膝關(guān)節(jié)活動受限明顯，假手術(shù)組未見明顯異常。手術(shù)組 4 周后可見膝脛骨平臺關(guān)節(jié)軟骨表面尚平滑，略粗糙，失去正常光澤，透明度下降，顏色較正顏色略黃，局部軟化。假手術(shù)組軟骨則無明顯退行性改變。

手術(shù)組 miR-411 mimics miR-411 inhibitor 假手術(shù)組圖 3 Western Blot 檢測 MMP-13、II 型膠原和 IV 型膠原的表達(dá)RT-PCR 結(jié)果通過 qRT-PCR 檢測不同分組中軟骨組織的 miR-411 表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)在所有 OA軟骨中均有 miR-411 表達(dá)，其中在假手術(shù)組及 LV 陰性對照組中 miR-411 的表達(dá)尚無明顯改變。而在過表達(dá)組中，miR-411 的表達(dá)水平顯著上調(diào)（P＜0.05），低組中 miR-411 的表達(dá)水平顯著下調(diào)（P＜0.05）。
【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 宋歌;呂月濤;狄林林;宗文納;陳伯旺;;早期腸內(nèi)營養(yǎng)對重癥肺炎大鼠免疫功能的影響分析[J];中國醫(yī)學(xué)前沿雜志(電子版);2017年01期

2 葉敏;陳達(dá)柔;陳宇中;杜少冰;杜展鑫;李玉鳳;唐珮瑜;楊昌山;朱曉琴;;右美托咪定后處理對大鼠肝缺血再灌注損傷的保護(hù)作用[J];臨床醫(yī)學(xué)工程;2017年02期

3 王雅樂;李文泉;姚鳳云;;黃連解毒湯對營養(yǎng)性肥胖大鼠的毒性研究[J];光明中醫(yī);2017年10期

4 關(guān)智宇;;三七總皂甙對骨折大鼠血管內(nèi)皮生長因子基因擴增及蛋白表達(dá)水平影響的研究[J];臨床醫(yī)藥文獻(xiàn)電子雜志;2017年51期

5 王帥;賈琦珍;陳根元;程勇;張玲;馬春暉;;小花棘豆中毒對大鼠下丘腦—垂體—卵巢軸α-甘露糖苷酶的影響[J];福建農(nóng)林大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2016年01期

6 周挺;夏菁;李增攀;徐麗艷;韓文文;方建江;;法舒地爾對百草枯致大鼠肺纖維化的干預(yù)作用[J];浙江實用醫(yī)學(xué);2016年01期

7 王亞東;李東朋;郭德偉;宋及時;李紅偉;錢偉強;楊波;;富血小板血漿對創(chuàng)傷性顱腦損傷大鼠神經(jīng)功能的保護(hù)作用[J];吉林大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2016年05期

8 鄭國祥;于強;;白虎湯對全身炎癥反應(yīng)綜合征大鼠炎癥因子的影響[J];四川中醫(yī);2015年01期

9 符暉;王橋生;方志雄;劉雁;周斌;彭忠田;梁咸章;;辛伐他汀預(yù)處理對大鼠神經(jīng)源性肺水腫的作用及其機制[J];中國動脈硬化雜志;2015年10期

10 商明紅;何龍其;;西維來司鈉對大鼠腦出血保護(hù)作用機制的實驗研究[J];現(xiàn)代養(yǎng)生;2017年10期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 毋囡囡;“安全”劑量雙酚A及乙炔雌二醇對雄性大鼠生殖功能及子代效應(yīng)的比較研究[D];華中科技大學(xué);2019年

2 陳巍;電針對超促排卵大鼠圍著床期子宮內(nèi)膜血管生成的調(diào)節(jié)作用及其機制研究[D];華中科技大學(xué);2019年

3 崔凱;人組織緩激肽釋放酶1對高同型半胱氨酸血癥大鼠陰莖勃起功能的影響及機制研究[D];華中科技大學(xué);2019年

4 孫東晟;慢性應(yīng)激對大鼠學(xué)習(xí)記憶功能的影響及其機制研究[D];華中科技大學(xué);2019年

5 杜智會;Cav1.3鈣離子通道蛋白和LaminB1核纖層蛋白在大鼠耳蝸發(fā)育階段的表達(dá)及作用[D];華中科技大學(xué);2019年

6 宋濤;重復(fù)抗抑郁劑氟西汀給藥對正常SD雄性大鼠行為及大腦的影響[D];華中科技大學(xué);2019年

7 嚴(yán)丹丹;丙烯酰胺對大鼠學(xué)習(xí)記憶的影響及機制研究[D];華中科技大學(xué);2019年

8 金曄;探討多模態(tài)影像技術(shù)評價NAFLD初步研究[D];上海交通大學(xué);2016年

9 朱星;散結(jié)通脈方對動脈粥樣硬化大鼠CD40/CD40L信號通路干預(yù)的實驗研究[D];長春中醫(yī)藥大學(xué);2019年

10 范大鵬;SHP-2基因轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞修復(fù)大鼠骨缺損的實驗研究[D];上海交通大學(xué);2016年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 金偉中;出生前尼古丁暴露對新生大鼠orexin A呼吸調(diào)節(jié)作用的影響[D];復(fù)旦大學(xué);2009年

2 孟農(nóng)欽;精索靜脈曲張致勃起功能障礙大鼠性激素機制及活血起萎顆粒干預(yù)研究[D];廣西中醫(yī)藥大學(xué);2019年

3 王海霞;補陽還五湯調(diào)節(jié)Wnt/β-catenin信號通路干預(yù)氣虛血瘀型特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化大鼠的實驗研究[D];甘肅中醫(yī)藥大學(xué);2019年

4 蘇杉;秦艽不同配伍藥對對風(fēng)寒濕痹RA模型大鼠NF-κB、VEGF、MMP-3、TIMP-1表達(dá)的影響[D];甘肅中醫(yī)藥大學(xué);2019年

5 扈婷婷;人參皂苷Rg3治療大鼠急性放射性直腸炎的實驗研究[D];甘肅中醫(yī)藥大學(xué);2019年

6 石賀;化瘀軟肝膠囊對氣滯血瘀型非酒精性脂肪性肝病大鼠糖脂代謝相關(guān)酶及氧化產(chǎn)物的影響[D];甘肅中醫(yī)藥大學(xué);2019年

7 呂潤超;SiO_2脅迫下肺纖維化大鼠模型的建立及其轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)分析[D];內(nèi)蒙古科技大學(xué);2019年

8 戴曦;丹紅注射液對膿毒癥大鼠心肌損傷的保護(hù)作用[D];華中科技大學(xué);2019年

9 李惠;亮氨酸干預(yù)對胰島素抵抗大鼠膽汁酸代謝的影響[D];華中科技大學(xué);2019年

10 姜雨晴;一種可降解骨引導(dǎo)膜材料的制備及其用于大鼠顱骨修復(fù)的研究[D];華中科技大學(xué);2019年

本文編號：2876115