為了篩選出免疫原性最佳的基因Ⅰ型乙型腦炎病毒亞單位疫苗候選抗原,將基因Ⅰ型JEVGS株的prMEIII融合基因、polytope復合表位基因和prMEIII-polytope融合基因分別克隆構建到原核表達載體pET-30a上,經誘導表達純化獲得重組蛋白。將制備的重組蛋白免疫小鼠,通過ELISA監(jiān)測體液免疫反應、通過噬斑減少中和試驗滴定中和抗體滴度、通過細胞因子表達豐度和淋巴細胞增殖實驗分析細胞介導的免疫反應,比較分析制備的乙型腦炎病毒亞單位疫苗候選抗原的免疫原性。結果表明:獲得的分子量分別為35kDa(prMEIII)、28kDa(polytope復合表位抗原)和57 kDa (prMEIII-polytope)的重組蛋白均能誘導免疫小鼠產生較強的體液免疫和細胞免疫反應。與prMEIII-polytope和polytope重組蛋白免疫組相比,prMEIII蛋白可誘導免疫小鼠產生更高的IL-2和IFN-γ表達豐度和淋巴細胞增殖水平(P0.05)。prMEIII蛋白免疫小鼠誘導產生的中和抗體滴度接近于商品化乙腦減毒疫苗SA14-14-2 (P0.05)。上述研究結果表明,prMEIII重組蛋白可以作為乙型腦炎病毒亞單位疫苗的備選蛋白。
【部分圖文】：

SDS-PAGE結果顯示，重組prMEIII和prMEIII-polytope蛋白主要以包涵體形式表達，分子量大小分別約為35 kDa和57 kDa，重組polytope蛋白主要以可溶性形式表達，分子量大小約為28 kDa，進一步經鎳柱親和層析純化，獲得了純度較高的重組蛋白(圖2)。純化的prMEIII、polytope和prMEIII-polytope重組蛋白的濃度分別是600μg/mL、800μg/mL和530μg/mL。圖2 重組蛋白的誘導表達及可溶性分析

重組蛋白的誘導表達及可溶性分析

通過間接ELISA測定第0、7、14、21、28、35、42天收集的免疫小鼠血清中的特異性抗體。結果顯示，3種基因重組表達的蛋白質免疫組和減毒疫苗免疫組均可誘導小鼠產生特異性抗體,但減毒疫苗SA-14-14-2免疫組誘導產生的抗體水平顯著低于本研究所重組表達的蛋白免疫組(圖4)。圖4 特異ELISA抗體滴度動態(tài)曲線
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