發(fā)布時間：2020-11-05 17:02

　　 目的:了解貴州省不同地區(qū)中華按蚊(Anopheles sinensis)抗藥性靶標基因突變情況,分析中華按蚊種群遺傳多樣性、遺傳分化和種群擴張情況及系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系,為貴州省中華按蚊抗藥性機制研究及其防制提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和科學(xué)指導(dǎo)。方法:采用燈誘法在貴州省不同地區(qū)稻田周邊采集成蚊,挑選經(jīng)形態(tài)學(xué)鑒定的中華按蚊雌蚊,用WHO推薦的接觸筒法測定中華按蚊成蚊對擬除蟲菊酯類殺蟲劑的抗藥性情況,然后提取基因組DNA擴增mtDNA-COI基因進行蚊種的分子鑒定;對確認為中華按蚊的DNA樣本PCR擴增kdr、ace-1基因并測序,運用DNAStar軟件對測序結(jié)果進行拼接和比對,檢測kdr基因1014位點和ace-1基因119位點的突變情況,計算相關(guān)基因頻率和基因型頻率;使用DNASP5.0軟件分析mtDNA-COI基因的多態(tài)性,計算種群分化系數(shù)和基因流大小,并進行中性檢驗和錯配分析;使用MEGA7.1軟件計算各種群間的遺傳距離,并分析其與地理距離的相關(guān)性,基于種群遺傳距離構(gòu)建種群系統(tǒng)發(fā)育進化樹。結(jié)果:貴州省中華按蚊接觸殺蟲劑藥膜1 h后,擊倒率在34.31%~86.21%之間,24 h的死亡率在37.93%~89.74%之間;經(jīng)形態(tài)學(xué)和分子鑒定,12個種群共獲得中華按蚊樣本551只,經(jīng)PCR擴增、測序拼接和比對,得到kdr、ace-1和mtDNA-COI基因序列各551條,其中kdr基因1014位點檢測到5種等位基因,分別為1014L(70.50%)、1014F(24.44%)、1014C(0.63%)、1014S(2.17%)和1014W(2.26%),各種群突變基因頻率在2.00%~57.69%之間,共發(fā)現(xiàn)18種基因型,基因型頻率在0.18%~56.48%之間;ace-1基因119位點檢測到2種等位基因,分別為119G(49.64%)和119S(50.36%),突變基因頻率在6.00%~77.00%之間,共發(fā)現(xiàn)5種基因型,基因型頻率在0.18%~38.47%之間。551條mtDNA-COI基因序列中共檢出329種單倍型,占總樣本數(shù)的百分比為59.71%,各種群單倍型占其樣本數(shù)的百分比在70%以上,單倍型多樣性指數(shù)在0.99以上,核苷酸多樣性在0.015以上,12個種群的Fst值在0.0008~0.4207之間,Nm值在0.0861~75.239之間,中性檢驗統(tǒng)計值均為負值,大部分種群錯配分析的歧點分布曲線呈單峰,種群內(nèi)遺傳距離范圍在0.0071~0.0529之間,種群間的遺傳距離范圍在0.0079~0.0522之間,遺傳距離與地理距離之間的決定系數(shù)R~2=0.1658,兩者間有一定的正相關(guān)關(guān)系,都勻、織金種群系統(tǒng)發(fā)育進化樹中較其他種群相對獨立。結(jié)論:貴州省中華按蚊對擬除蟲菊酯類殺蟲劑產(chǎn)生了一定程度的抗藥性,kdr基因1014位點存在4種基因突變,基因突變頻率較低,突變基因以L1014F為主;貴州省中華按蚊ace-1基因119位點發(fā)生G119S突變的頻率較高且分布廣泛,有一定抗藥性風(fēng)險;貴州省中華按蚊種群遺傳多樣性較高,大部分種群之間遺傳分化較小,基因交流比較豐富,在歷史上經(jīng)歷了種群擴張,存在一定的地理隔離,呈現(xiàn)出交流與隔離并存的分布格局。
【學(xué)位單位】：貴州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R384.1
【部分圖文】：

圖 1-1 貴州省中華按蚊野外種群采集點分布圖Fig. 1-1 Sampling sites of field-population of Anopheles sinensis in Guizhou表 1-3 貴州省中華按蚊野外種群采集點信息Table 1-3 Collection information of field-population of Anopheles sinensis in Guizhou集地點ection sites經(jīng)緯度Longitude andlatitude海拔高度Altitude采集點生境情況Habitat conditions at collection sites采集時間Collectiontime種Po市平壩縣 26.554 N，106.341 E 1253 m 牛圈、豬圈燈誘，周邊有稻田 2017.07 平州冊亨縣 24.994 N，105.771 E 706 m 牛圈、豬圈燈誘，周邊有大片稻田 2017.08 冊州羅甸縣 25.226 N，106.682 E 389 m 牛圈、豬圈燈誘，周邊有稻田 2017.08 羅市花溪區(qū) 26.399 N，106.591 E 1170 m 牛圈、豬圈燈誘，周邊有稻田 2018.07 花市織金縣 26.694 N，105.835 E 1270 m 牛圈燈誘，周邊有稻田 2018.07 織州黎平縣 26.202 N，108.951 E 594 m 牛圈、豬圈燈誘，周邊有稻田 2018.07 黎

圖 2-1 中華按蚊 mtDNA-COI 基因電泳結(jié)果Fig. 2-1 The results of electrophoresis of mtDNA-COI gene in Anop2.3 中華按蚊 kdr 基因 1014 位點突變檢測結(jié)果2.3.1 中華按蚊 kdr 基因 PCR 擴增及電泳檢測將分子鑒定為中華按蚊的 DNA 樣本用特異性 kdr 引物( kdr-F 擴增 kdr 基因，PCR 產(chǎn)物經(jīng)電泳成像后顯示在 DL2000 DNA Mark500 bp 條帶之間有明顯單一條帶。（圖 2-2）圖 2-2 中華按蚊 kdr 基因電泳結(jié)果

圖 2-1 中華按蚊 mtDNA-COI 基因電泳結(jié)果Fig. 2-1 The results of electrophoresis of mtDNA-COI gene in Anopheles 2.3 中華按蚊 kdr 基因 1014 位點突變檢測結(jié)果2.3.1 中華按蚊 kdr 基因 PCR 擴增及電泳檢測將分子鑒定為中華按蚊的 DNA 樣本用特異性 kdr 引物( kdr-F 和 kd擴增 kdr 基因，PCR 產(chǎn)物經(jīng)電泳成像后顯示在 DL2000 DNA Marker 的500 bp 條帶之間有明顯單一條帶。（圖 2-2）M：D1-22：
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本文編號：2871929