目的以葡聚糖硫酸鈉(dextran sulfate sodium,DSS)誘導(dǎo)CD1d基因敲除(基因背景:C57BL/6)及野生型(基因背景:C57BL/6)結(jié)腸炎模型小鼠為研究對象,探討CD1d分子對小鼠急性腸炎病理進程的影響。在腸道黏膜的免疫系統(tǒng)中,免疫細(xì)胞和結(jié)腸上皮細(xì)胞在結(jié)腸炎的發(fā)展進程中均發(fā)揮著關(guān)鍵的作用,為明確CD1d分子在DSS誘導(dǎo)的腸炎模型中發(fā)揮的作用是否依賴于骨髓造血細(xì)胞,進一步使用骨髓嵌合小鼠(WT和WT骨髓自體移植:WTWT;CD1d-/-和CD1d-/-骨髓自體移植:CD1d-/-CD1d-/-及異體骨髓移植:WICD1d-/-或CD1d-/-WT)探究骨髓來源細(xì)胞的CD1d分子在小鼠結(jié)腸炎進程中的調(diào)節(jié)作用以及其可能的作用機制。方法取SPF級C57BL/6小鼠和CD1d-/-(基因背景:C57BL/6)小鼠,每天給予2.5%DSS喂養(yǎng),連續(xù)6d,每天記錄小鼠的體重變化、糞便性狀、活動情況等,評估小鼠的疾病活動指數(shù)(DAI),并記錄小鼠的生存情況。第6天用FITC-dextran灌胃檢測腸通透性,測量結(jié)腸長度,并用HE染色法觀察結(jié)腸組織病理學(xué)變化,免疫組化法檢測腸上皮增殖情況。進一步取SPF級C57BL/6小鼠、CD1d-/-小鼠全身一次性接受1OGy劑量60 Co的放射源進行Y射線照射3h后接受骨髓移植構(gòu)建4組骨髓嵌合小鼠,重組12周后誘導(dǎo)結(jié)腸炎,飲用2.5%DSS連續(xù)7d,每天記錄各組小鼠的體重變化、活動情況、糞便性狀等并且評估小鼠的疾病活動指數(shù)(DAI)。第7天用FITC-dextran灌胃檢測各組小鼠腸通透性、測量其結(jié)腸長度,并用HE染色法觀察結(jié)腸組織的病理學(xué)變化。免疫印跡法檢測各組小鼠結(jié)腸組織炎性因子 NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18 的表達。結(jié)果1.與C57/BL6小鼠相比,CD1d-/-小鼠的生存率高(P0.05),CD1d-/-小鼠前3d的體重變化不明顯,從第3天開始CD1d-/-小鼠的體重下降明顯減輕,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05);與此同時,第3天開始CD1d-/-小鼠的疾病活動指數(shù)較低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05);CD1d/-小鼠保留的結(jié)腸長度長、腸通透性低(P0.01),結(jié)腸黏膜下層水腫較輕,黏膜下的炎性細(xì)胞浸潤較少(P0.05);并且腸黏膜損傷輕,結(jié)腸上皮細(xì)胞增殖明顯(p0.05)。2.構(gòu)建骨髓嵌合小鼠(WT和WT骨髓自體移植:WTWT;CD1d-/-和CD1d-/-骨髓自體移植:CD1d/CD1d-/-及異體骨髓移植:WTCD1d-/-或CD1d-/-WT)與接受WT骨髓細(xì)胞的受體小鼠相比,接受CD1d-/-骨髓細(xì)胞的小鼠體重丟失緩慢、疾病活動指數(shù)(DAI)低(p0.05);保留的結(jié)腸長度長(p0.01),腸通透性低(P0.01);腸黏膜損傷輕、浸潤的炎性細(xì)胞少;結(jié)腸組織NLRP3蛋白及其底物IL-18表達高(P0.05)。結(jié)論1.CD1d分子促進DSS誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎2.骨髓造血細(xì)胞在CD1d基因敲除小鼠的結(jié)腸炎表型中發(fā)揮主要作用,且可能是通過促進NLRP3炎性小體及其底物IL-18的表達發(fā)揮作用
【學(xué)位單位】：延邊大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R574;R-332
【部分圖文】：

統(tǒng)計學(xué)分析??ｒａｐｈ?ｐａｄ?Ｐｒｉｓｍ?６軟件進行統(tǒng)計分析，各組之間的比較用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差０．０５認(rèn)為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。??果及分析??小鼠生存實驗??生型小鼠相比，ＣＤＡ／－／－小鼠并沒有較明顯的自發(fā)性疾病。為了探討Ｃ鼠急性腸炎的相關(guān)性，我們實驗室使用Ｃ５７ＢＬ／６小鼠（ＷＴ小鼠）和??小鼠（Ｃ５７ＢＬ／６背景）構(gòu)建了２．５％ＤＳＳ誘導(dǎo)的小鼠急性腸炎模型。我鼠喂養(yǎng)２．５％ＤＳＳ連續(xù)６天，第７天換清水喂養(yǎng)，直至２０天。誘導(dǎo)期間存情況。生存實驗結(jié)果表明，在此期間，ＣＤ／Ａ／－小鼠未見死亡，而率高達６０％（Ｐ＜０．０５），統(tǒng)計學(xué)差異顯著。??－??

我們構(gòu)建２．５％ＤＳＳ誘導(dǎo)的急性腸炎模型，每天觀察并記錄兩組小鼠的體重??（ｂｏｄｙ?ｗｅｉｇｈｔ）變化、糞便性狀、毛色、活動情況等，并進行疾病活動指數(shù)（ＤＡＩ）??的評估。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，如圖２．２ａ所示，相對于野生型（ＷＴ）小鼠，ＣＤＭＭ、鼠前３ｄ??體重變化不明顯，從第３天開始ＣＤ７，？小鼠體重下降明顯減輕（／？＜０．０５），差異有??統(tǒng)計學(xué)意義；與此問時如圖２．２ｂ所示，第３天開始小鼠疾病活動指數(shù)明顯低??于野生型小鼠（ｐ＜〇．〇５），差異有統(tǒng)計學(xué)意義，與體重變化相符。這些結(jié)果表明??小鼠ＣＤｌｄ基因缺失后對ＤＳＳ誘導(dǎo)的腸炎的敏感性降低。??ａ?ｂ??芝?ｌｌ〇１?ｘ?１５＂｜?〇?ＷＴ｛ｎ＝６）??否?Ｉ?ｓ，?＊?■〇?？ＣＤ�。颍妗郏睿剑叮�?＊??？５?（ｎ＝６）?５?５！?，ｙ＾??ｌ８〇－?ｓ?〇＾＃Ｈｒ??＼?２．Ｓ％ＤＳＳ?５?２．５％ＤＳＳ??０３?７０?￣｜￣｜?Ｉ?｜￣￣ｌ￣１－５?１￣Ｉ￣￣Ｉ?Ｉ?Ｉ￣Ｉ１??０?１?２?３?４?５?６?０?１?２?３?４?５?６??Ｄａｙｓ?Ｄａｙｓ??圖２．２小鼠體重變化（ａ）和疾病活動指數(shù)評估（ｂ）??Ｆｉｇｕｒｅ?２．２?Ｗｉｌｄ－ｔｙｐｅ?ａｎｄ?ＣＤｌｃｆ?＇ｍｉｃｅ?ｗｅｒｅ?ｔｒｅａｔｅｄ?ｗｉｔｈ?２．５％ＤＳＳ?ｆｏｒ?６?ｄａｙｓ?ａ）Ｂｏｄｙ??ｗｅｉｇｈｔ?ｃｈａｎｇｅ?ｂ）Ｄｉｓｅａｓｅ?ａｃｔｉｖｉｔｙ?ｉｎｄｅｘ?ｗｅｒｅ?ｓｃｏｒｅｄ?ｄａｉｌｙ．?ｎ＝６?ｉｎ?ｅｖｅｒｙ?ｇｒｏｕｐ．??０．０５．??２．３．３小鼠保留的結(jié)腸長度和組織病理學(xué)變化??結(jié)腸長度縮短是ＤＳＳ誘導(dǎo)的腸炎的代表性表現(xiàn)之一

?第二章ＤＳＳ誘導(dǎo)ＣＤ／ｒｆ－／－小鼠與ＷＴ小鼠腸炎模型的建立??情況以及炎性細(xì)胞浸潤等指標(biāo)的觀察結(jié)果如圖２．３ｂ?（Ｘ１００）所示：第６天相對于野??生型小鼠，Ｃ￡）＾＿小鼠結(jié)腸黏膜下層水腫較輕，黏膜下的炎性細(xì)胞浸潤較少。組??織病理學(xué)評分證實ＣＤｉｃｆＭ、鼠結(jié)腸炎較輕，兩組有明顯統(tǒng)計學(xué)差異（／Ｋ０．０５）。??同時對比未用ＤＳＳ處理、沒有炎癥或組織損傷的野生型小鼠和ＣＺ）ｙ小鼠，未見??統(tǒng)計學(xué)差異（；？＞〇．〇５）。ａ、ｂ結(jié)果均進一步表明ＣＤｌｄ基因缺失對ＤＳＳ誘導(dǎo)的腸炎??的敏感性降低。??＾?Ｄａｙ?〇?ｄａｙ?６??＾?．－一６ｌ?ｆ１－??Ｉ?￣？ｈ?＞?Ｉ?〇?１?ｇ３－??ｉ｜＾ｌｌｌ〇ｌ?．?．?■?ｉ、???＾?ｄａｙ?〇?６?（ＤＳ５）?３?＼?ｖ?１?＇?ｄａｙ?０?ｄａｙ?６?（ＤＳＳ）??圖２．３小鼠保留的結(jié)腸長度（ａ）和組織病理學(xué)變化（ｂ）??Ｆｉｇｕｒｅ?２．３?ａ）?Ｍｉｃｅ?ｗｅｒｅ?ｓａｃｒｉｆｉｃｅｄ?ｏｎ?ｄａｙｓ?０?ａｎｄ?６?ａｆｔｅｒ?ｔｈｅ?ｓｔａｒｔ?ｏｆ?ＤＳＳ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ?ｔｏ??ｍｅａｓｕｒｅ?ｃｏｌｏｎ?ｌｅｎｇｔｈ；?＊＊Ｐ＜０．０１?；?ｎｓ，?ｎｏｎｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ．?ｎ＝６?ｉｎ?ＷＴ?ｇｒｏｕｐ：?ｎ＝８?ｉｎ??ＣＤ１?ｄ－／－?ｇｒｏｕｐ?ｂ）?Ａｔ?ｔｈｅ?ｓａｍｅ?ｔｉｍｅ
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本文編號：2867854