探討生物肽P物質(zhì)(substance P,SP)對NK92-MI細胞遷移力和細胞表面趨化因子受體表達的影響,能更好地解釋SP調(diào)控NK細胞遷移的作用機制,為NK細胞的功能研究及潛在的免疫療法提供補充依據(jù)。Transwell法檢測SP對NK92-MI細胞遷移能力的影響及SP對趨化因子CCL21和CXCL12對NK92-MI細胞趨化作用的影響;Real-time PCR檢測SP對CCR7和CXCR4 mRNA表達水平的影響;流式細胞術(shù)檢測SP對CCR7和CXCR4膜表達水平的影響。結(jié)果顯示:①SP促進NK92-MI細胞的遷移,是在低濃度范圍(10~(-12)～10~(-10)mol/L)隨SP濃度增加,促進作用逐漸增強,高濃度范圍(10~(-8)～10~(-6) mol/L)隨SP濃度增加,促進作用又有所減弱,SP濃度在10~(-10) mol/L時,趨化指數(shù)達峰值;SP增強趨化因子CCL21和CXCL12對NK92-MI細胞的趨化作用,這種增強作用在10~(-10) mol/L濃度最顯著。②SP在10~(-12)～10~(-6) mol/L濃度范圍內(nèi)均能明顯促進CCR7 mRNA的表達,且CCR7 mRNA表達水平隨著SP濃度增加而增高;SP在10~(-10 )～10~(-6 ) mol/L濃度范圍內(nèi)能明顯促進CXCR4 mRNA的表達。③CCR7的膜表達水平隨著SP濃度的增加具有逐漸增高的趨勢,在10~(-8) mol/L和10~(-6) mol/L濃度組,CCR7的表達有明顯增加;而CXCR4的膜表達則隨SP濃度的增加,具有先增高后回降的趨勢,在10~(-10) mol/L和10~(-8) mol/L濃度組,CXCR4的表達有明顯增加。SP能直接促進NK92-MI細胞的遷移,說明SP對NK細胞具有直接趨化作用;SP通過上調(diào)趨化因子受體CCR7和CXCR4的表達水平,協(xié)同趨化因子,間接發(fā)揮對NK-92MI細胞的趨化作用。
【部分圖文】：

在10-12～10-10 mol/L濃度范圍內(nèi),隨著SP濃度的增加,其促進NK92-MI細胞遷移作用逐漸增強,1010 mol/L濃度時趨化指數(shù)達最大值(P<0.01),隨濃度繼續(xù)增加,SP促進NK92-MI細胞遷移能力逐漸減弱,結(jié)果如表2、圖1所示。表2 SP對NK92-MI細胞遷移能力的影響Table 2 Effects of SP on migration ability in NK92-MI cells SP濃度/(mol·L-1) SP對NK92-MI細胞的趨化指數(shù) 對照 1.00 10-12 1.84±0.16* 10-10 3.17±0.17** 10-8 2.56±0.34** 10-6 1.78±0.22* 注:*與對照組相比P<0.05,**與對照組相比P<0.01,下表同

表3 SP增強趨化因子CCL21/CXCL12對NK92-MI細胞的趨化作用Table 3 SP enhanced chemotaxis of CCL21/CXCL12 on NK92-MI cells SP濃度/(mol·L-1) CCL21對NK92-MI細胞的趨化指數(shù) CXCL12對NK92-MI細胞的趨化指數(shù) 對照 1.00 1.00 10-12 2.24±0.34* 2.48±0.23** 10-10 2.41±0.31* 2.81±0.11** 10-8 2.05±0.25* 2.48±0.28** 10-6 1.68±0.18 2.24±0.16**2.2 SP對NK92-MI細胞趨化因子受體CCR7和CXCR4 mRNA表達的影響

濃度范圍為10-12～10-6 mol/L的SP作用24 h,CCR7陽性細胞百分率隨著SP濃度的增高而增高,10-8 mol/L和10-6 mol/L濃度的SP可明顯促進CCR7受體膜表達(P<0.05)(結(jié)果見圖4A、圖4C)。濃度范圍為10-12 ～10-6 mol/L的SP作用24 h,CXCR4陽性細胞百分率均高于對照組,且隨著SP濃度的增高,具有先增高后回降的趨勢,10-10 mol/L和10-8 mol/L濃度組,CXCR4陽性細胞百分率有顯著增高(P<0.01、P<0.05)(圖4B、4C)。圖4 SP對NK92-MI細胞趨化因子受體CCR7和CXCR4膜表達的影響
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