目的建立一種可視化的恒溫?cái)U(kuò)增方法用于檢測(cè)膿腫分枝桿菌(MAB)。方法采用特異性全長erm(41)基因建立基于多交叉置換擴(kuò)增(MCDA)結(jié)合羥基萘酚藍(lán)(HNB)的方法,通過比色法直接檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物,采用23株膿腫分枝桿菌復(fù)合群和8種細(xì)菌標(biāo)準(zhǔn)株對(duì)該方法進(jìn)行初步評(píng)價(jià)。結(jié)果建立的MAB-MCDA-HNB檢測(cè)限為100 fg的DNA模板。31株細(xì)菌菌株中,只有膿腫分枝桿菌檢測(cè)結(jié)果為陽性,其它細(xì)菌包括結(jié)核分枝桿菌,卡介苗,馬賽分枝桿菌、鳥分枝桿菌等非結(jié)核分枝桿菌和金黃色葡萄球菌等均為陰性。膿腫分枝桿菌模擬痰標(biāo)本檢測(cè)靈敏度為1.7×10~3 CFU/mL(每次反應(yīng)17 CFU)。結(jié)論 MAB-MCDA-HNB方法能夠快速準(zhǔn)確診斷膿腫分枝桿菌的感染。
【部分圖文】：

表2 多重交叉置換擴(kuò)增引物信息Tab.2 MCDA primers information Primers Sequences (5′-3′) Length/bp F1 TGCTAGCCGTCGAGCT 16 CP1 GCAGGTCCGCTTCCGCTATTCGACACCTTCGTTCACG 37 C1 GCAGGTCCGCTTCCGCTAT 19 D1 GACATCTTCCTCGGCAAAC 19 R1 AATGGCCGTCGCGGCCA 17 R2 CCCTACCAAGTCACCAGC 18 D2 ACCTGGTGCTGCAGCG 16 C2 TACGGAGTCTCTTGACGCCGGAAT 24 CP2 TACGGAGTCTCTTGACGCCGGAATGCTTCGCATGTTTGTGC 41 F2 TGGCGAACAGGTGCTC 161.4 MAB-MCDA-HNB測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)化

在MAB-MCDA-HNB測(cè)定中使用系列稀釋的膿腫分枝桿菌桿菌參考菌株(ATCC 19977)基因組DNA,最后我們證實(shí)低至100 fg的DNA模板可以啟動(dòng)MAB-MCDA反應(yīng)(圖2)。2.4 測(cè)定的特異性和靈敏度

在31種細(xì)菌菌株中,只有來自M. abscessus的DNA顯示陽性結(jié)果,來自M. massilience、結(jié)核分枝桿菌、BCG、M. kansassi、M. smegmatis、M. phlei、M. avium和金黃色葡萄球菌的DNA模板表現(xiàn)為陰性結(jié)果(圖3)。2.5 erm(41)PCR產(chǎn)物的片段大小
【相似文獻(xiàn)】

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2 呂恒;張錦海;陳鳳娟;譚維國;顧海濤;王平;王長軍;;大腸埃希菌O157:H7環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增可視化檢測(cè)方法的建立[J];中國病原生物學(xué)雜志;2013年04期

3 李玉綠，文建國，盧迪生;酶組化顯示睪丸LDH－X方法的再探討[J];湖南醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1996年01期

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