結(jié)核病(Tuberculosis, TB)是全球危害最大的傳染病之一。耐藥TB的出現(xiàn)及TB與艾滋病病毒(Human Immunodeficiency Virus, HIV)共感染使人類對抗TB新藥的需求更為迫切。然而傳統(tǒng)的抗TB藥物研發(fā)模式所需周期長、成本高,在長達(dá)40多年的時間里,沒有抗TB新藥誕生。本實驗利用新型的抗TB藥物篩選模型,成功的篩選到一種化合物(5k),在體內(nèi)和體外的評價中都表現(xiàn)出良好的殺菌活性。利用該模型,可以在體內(nèi)外連續(xù)檢測同一樣品,實驗過程中不需要添加任何底物,僅需3-5天便可以對藥物活性進(jìn)行快速評價,靈敏度高,重復(fù)性強(qiáng)。在活性檢測中：使用無抗性的自主發(fā)光的H37Ra (Selectable Marker-free Autoluminent Mycobacterium tuberculosis H37Ra, UAIRa)對一系列化合物進(jìn)行初篩,篩選出包括5k在內(nèi)的數(shù)十個具有體外殺菌活性的新型化合物；用無抗性自主發(fā)光的H37Rv (Selectable Marker-free Autoluminent Mycobacterium tuberculosis H37Rv, UAlRv)對這些化合物的殺菌活性做進(jìn)一步驗證,發(fā)現(xiàn)5k的體外殺菌效果較好；并且對于臨床耐藥菌株,5k也有較好的殺菌活性。在體內(nèi)對于藥物活性的檢測中,使用不同劑量的5k對感染UAIRa的BALB/c小鼠進(jìn)行治療,發(fā)現(xiàn)5k在體內(nèi)也表現(xiàn)出較強(qiáng)的殺菌效果,其殺菌效果與藥物劑量呈正相關(guān)性,并且沒有表現(xiàn)出體內(nèi)毒性。初步的體內(nèi)評價表明5k有希望成為抗TB新藥。自人類首次發(fā)現(xiàn)艾滋病以來,科研人員一直致力于研發(fā)一種安全有效的HIV疫苗�？蒲腥藛T經(jīng)過30多年潛心研究,提出HIV疫苗需要誘發(fā)機(jī)體多重免疫反應(yīng)。這樣,疫苗誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體可以在病毒感染時中和部分病毒,其后以細(xì)胞免疫應(yīng)答為主的免疫反應(yīng)能夠清除被病毒感染的細(xì)胞,從而降低HIV載量,并減少HIV的傳播效率,達(dá)到預(yù)防與治療的雙重目的。近年來,由于性傳播途徑成為HIV傳播的主要方式,所以能夠誘發(fā)機(jī)體粘膜免疫反應(yīng)的分枝桿菌疫苗載體在疫苗研發(fā)中越來越受到重視。將HIV-1的Env抗原展示在恥垢分枝桿菌(Mycobacterium smegmatis, Msmeg)表面,構(gòu)建HIV疫苗,檢測發(fā)現(xiàn),該疫苗可以誘發(fā)機(jī)體長期的粘膜免疫反應(yīng),并且抗原表達(dá)在表面的免疫效果好于抗原表達(dá)在胞內(nèi)。對HⅣ患者體內(nèi)的免疫應(yīng)答和病毒載量進(jìn)行比較,可以發(fā)現(xiàn)只有當(dāng)針對Gag的反應(yīng)更強(qiáng)時,病毒載量才會下降�；谝陨铣晒�,本實驗選擇了三種不同載體蛋白的表面展示系統(tǒng),在新型的無任何毒力的Msmeg疫苗載體的表面展示SIV Gag抗原,構(gòu)建重組菌株。
【學(xué)位單位】：安徽大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2015
【中圖分類】：R392
【部分圖文】：

圖１．１彩色掃描電鏡下的結(jié)核分枝桿菌形態(tài)（來源于Ｐｕｂｌｉｃ??Ｈｅａｌｔｈ?Ｉｍａｇｅ?Ｌｉｂｒａｒｙ）。??ｕｒｅ?１．１?Ｓｃａｎｎｉｎｇ?ｅｌｅｃｔｒｏｎ?ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ?ｏｆ?Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ?ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓＰｕｂｌｉｃ?Ｈｅａｌｔｈ?Ｉｍａｇｅ?Ｌｉｂｒａｒｙ）．??致病機(jī)制??人體多種器官，如骨豁、淋巴結(jié)、腦膜、肺部等，其中以占７０％。侵染機(jī)體后會被機(jī)體的免疫系統(tǒng)大量清除。Ｍｔｂ會被巨唾細(xì)胞表面受體識別，通過內(nèi)吞作用進(jìn)入巨ｆｔ定數(shù)量的Ｍｔｂ可以阻斷吞嗟體與溶酶體的融合，從而在異性免疫階段，Ｔｈｌ輔助細(xì)胞會激活巨哩細(xì)胞清除胞內(nèi)量Ｍｔｂ可以通過降低自身代謝強(qiáng)度進(jìn)入潛伏狀態(tài)，而活潛伏狀態(tài)的ＭＡ，這些特殊狀態(tài)的Ｍｔｂ最終在體內(nèi)形成潛

１．２．２?ＨＩＶ的生物學(xué)特性??ＨＩＶ分為兩種：ＨＩＶ－１和ＨＩＶ－２。其中，ＨＩＶ－１又可以分為４種亞群：Ｍ（Ｍａｊｏｒ）??ｇｒｏｕｐ、Ｎ（Ｎｏｎ－Ｍ，?Ｎｏｎ－０）?ｇｒｏｕｐ、Ｏ（Ｏｕｔｌｉｅｒ）?ｇｒｏｕｐ?和?Ｐ（Ｐｅｎｄｉｎｇ?ｔｈｅ?Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ??Ｆｕｒｔｈｅｒ?Ｈｕｍａｎ?Ｃａｓｅｓ）?ｇｒｏｕｐ。其中的Ｍ?ｇｒｏｕｐ病毒是最主要的亞群，約占總感染??數(shù)的９９．６％。而Ｎ?ｇｒｏｕｐ及０?ｇｒｏｕｐ則相當(dāng)少見，多見于中西非，美國及歐洲則??有少數(shù)案例，亞洲尚未發(fā)現(xiàn)。Ｐ?ｇｒｏｕｐ全球僅有２個案例報道。Ｈ［Ｖ－２目前僅流??行于西非，其毒性與傳染性均低于ＨＩＶ－１。??ＨＩＶ大致呈球形，直徑約１２０ｎｍ，其基因組為兩條相同的正鏈ＲＮＡ單鏈，??每條單鏈長約９．５ｋｂ。ＨＩＶ基因可分為兩類：結(jié)構(gòu)基因（Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ?Ｇｅｎｅｓ）和非??結(jié)構(gòu)基因（Ｎｏｎ－Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ?Ｇｅｎｅｓ）。其中結(jié)構(gòu)基因包括：Ｇａｇ，／Ｗ和￡ｗｖ；非結(jié)??構(gòu)基因包括?ｉＶｅ／，Ｒｅｖ，?Ｔａｔ，?Ｖｉｆ，?Ｖｐｒ，?Ｆｐｗ?或?Ｆｐｊｃ?基因。??

故荊櫻桑鄭牐牽幔緲乖?鬧刈槌芄穹種Ω司?墓菇ǎ崳?檢測小鼠胸部的ＲＬＵ，感染后第七天（ｄａｙ６）檢測每只小鼠胸部的ＲＬＵ后，實??驗結(jié)束。本次實驗同樣使用ＲＩＦ作為陽性對照組。５ｋ體內(nèi)治療的效果如圖２．２??Ａ?Ｂ?１．２?丨?？?ｖｅｈｉｃｌｅ??６?Ｉ?Ｉ?Ｊ?５ｋ?４?ｍｇ／ｋｇ?ｑｄ??０?ｋ?ｏ?＊?＾?＼?—＾５ｋ２０?ｍｇ／ｋｇｑｄ??會?／?＼ｖ?Ｔ?＾?‘?＼?一？￣?５ｋ?１００?ｍｇ／ｋｇ?ｑｄ??ｇ?４?／?會?０．８?－?Ｖ?■?ｒｉｆａｍｐｉｃｉｎ?４０ｍ２／ｋａ?ｑｄ??１：１?／?ｎ?ｉ：：：??１?１???１０?．２?：??０?ｇ?＇４?－－?０?Ｊ？?Ｊ，??０?２?４?６?（ｄａｙｓ）?０?２?４?６?（ｄａｙｓ）??圖２．１５ｋ體內(nèi)治療效果圖。??Ｆｉｇｕｒｅ?２．１?Ｔｈｅ?ａｃｔｉｖｉｔｙ?ｏｆ?５ｋ?ｉｎ?ｌｉｖｅ?ｍｏｕｓｅ?ｍｏｄｅｌ．??圖２．ＫＡ）表現(xiàn)的是不同劑量的５ｋ持續(xù)給藥６天對于感染ＵＡｌＲａ的ＢＡＬＢ／ｃ??小鼠的治療效果。圖中的橫坐標(biāo)代表天數(shù)，縱坐標(biāo)代表的是治療后每天測得的小??鼠胸部ＲＬＵ值與未治療時（ｄａｙＯ）小鼠胸部ＲＬＵ值的比值。圖中可以看出隨著??持續(xù)的治療小鼠胸部ＲＬＵ比值的變化，其中藍(lán)線表示陰性對照組，綠線表示５ｋ??劑量為４ｍｇ／ｋｇ的治療組，紫線表示５ｋ劑量為２０?ｍｇ／ｋｇ的治療組，橘黃線表示??５１ｃ劑量為ｌＯＯｍｇ／ｋｇ的治療組，紅線表示利福平治療組。（Ｂ）為（Ａ）中紅色方??框區(qū)域的放大效果圖。??由圖２．１所示，未治療組小鼠體內(nèi)的ＲＬＵ比值從ｄａｙＯ到ｄａｙ２有明顯的增??長
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本文編號：2861615