目的:本研究旨在分析亞洲帶絳蟲實(shí)驗(yàn)感染乳豬后被囊尾蚴寄生的乳豬肝臟轉(zhuǎn)錄組表達(dá)變化,為探討亞洲帶絳蟲與中間宿主相互作用的可能分子機(jī)制提供基礎(chǔ)資料。方法:將采自貴州省都勻市良畝鄉(xiāng)的亞洲帶絳蟲孕節(jié)解剖后,以生理鹽水反復(fù)清洗并離心收集蟲卵。20日齡約克施格雜交乳豬12頭隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組各6頭,實(shí)驗(yàn)組以定量15萬個(gè)蟲卵/頭灌胃感染,于感染后第15天和第75天解剖乳豬,取實(shí)驗(yàn)組囊尾蚴寄生的肝臟和對(duì)照組對(duì)應(yīng)部位肝臟。采用RNA測(cè)序(RNA-sequence,RNA-seq)技術(shù)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組肝臟mRNA轉(zhuǎn)錄組的表達(dá)差異,并對(duì)差異表達(dá)基因(Differentially expressed genes,DEGs)進(jìn)行生物信息學(xué)分析和實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative Real-time PCR,q RT-PCR)驗(yàn)證。結(jié)果:與對(duì)照組比,感染15天和75天實(shí)驗(yàn)組肝臟中分別檢測(cè)出152個(gè)和558個(gè)DEGs,分別占所有被檢測(cè)的mRNA基因的百分比為0.85%和3.12%。通過GO和KEGG分析,發(fā)現(xiàn)這些DEGs涉及肝臟的免疫反應(yīng)、物質(zhì)代謝、纖維化和組織增生修復(fù)等功能,并與MHC抗原加工、呈遞,IFN受體介導(dǎo)的信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng),細(xì)胞色素P450,TGF-β信號(hào)通路等有關(guān)。對(duì)部分DEGs的q RT-PCR驗(yàn)證結(jié)果與RNA-seq一致。結(jié)論:亞洲帶絳蟲寄生可導(dǎo)致乳豬肝臟組織中出現(xiàn)顯著性的差異基因表達(dá),特定的DEGs參與肝臟的新陳代謝,免疫應(yīng)答和組織修復(fù)或再生等生物過程。這些結(jié)果可能有助于闡明宿主-寄生蟲相互作用的分子機(jī)制。
【學(xué)位單位】：貴州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R383.3
【部分圖文】：

圖 1 帶絳蟲頭節(jié)Fig.1 Scolex of Taenia圖 2 帶絳蟲孕節(jié)Fig.2 Gravid proglottid of Taenia2.1.3 帶絳蟲成蟲分子生物學(xué)鑒定用從良畝鄉(xiāng)帶絳蟲提取的 DNA，以亞洲帶帶絳蟲 cox1 基因片段的特異性引物（Tasia：5’-ACGGTTGGATTAGATGTTAAGACTA-3’）、通用的反向引物（Rev:5’-GACATAACATAATGAAAATG-3’），經(jīng) PCR 擴(kuò)增和瓊脂糖凝膠電泳，均擴(kuò)增出約 260 bp 的產(chǎn)物，而以牛帶絳蟲 cox1 基因片段的特異性引物（Tsag：5’-TTGATTCCTTCGATGGCTTTTCTTTTG-3’）和 Rev 為引物的 PCR 產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳，均未見擴(kuò)增產(chǎn)物（圖 3）。

圖 1 帶絳蟲頭節(jié)Fig.1 Scolex of Taenia圖 2 帶絳蟲孕節(jié)Fig.2 Gravid proglottid of Taenia2.1.3 帶絳蟲成蟲分子生物學(xué)鑒定用從良畝鄉(xiāng)帶絳蟲提取的 DNA，以亞洲帶帶絳蟲 cox1 基因片段的特異性引物（Tasia：5’-ACGGTTGGATTAGATGTTAAGACTA-3’）、通用的反向引物（Rev:5’-GACATAACATAATGAAAATG-3’），經(jīng) PCR 擴(kuò)增和瓊脂糖凝膠電泳，均擴(kuò)增出約 260 bp 的產(chǎn)物，而以牛帶絳蟲 cox1 基因片段的特異性引物（Tsag：5’-TTGATTCCTTCGATGGCTTTTCTTTTG-3’）和 Rev 為引物的 PCR 產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳，均未見擴(kuò)增產(chǎn)物（圖 3）。

絳蟲頭節(jié)colex of Taenia圖 2 帶絳蟲孕節(jié)Fig.2 Gravid proglottid蟲分子生物學(xué)鑒定鄉(xiāng)帶絳蟲提取的 DNA，以亞洲帶帶絳蟲 cox1 基因片段’-ACGGTTGGATTAGATGTTAAGACTA-3’）、通用的ATAACATAATGAAAATG-3’），經(jīng) PCR 擴(kuò)增和瓊脂糖0 bp 的產(chǎn)物，而以牛帶絳蟲 cox1 基因片段的特異性引TTCGATGGCTTTTCTTTTG-3’）和 Rev 為引物的 PC，均未見擴(kuò)增產(chǎn)物（圖 3）。
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本文編號(hào)：2857239