發(fā)布時(shí)間：2020-10-26 13:30

　　 目的:探究DNAJB8[DnaJ heat shock protein family(HSP40)member B8]在小鼠精子發(fā)生過程中的表達(dá)模式。方法:分別采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)小鼠各臟器、不同發(fā)育時(shí)期睪丸組織以及不同生精細(xì)胞DNAJB8的mRNA轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)量;免疫熒光檢測(cè)DNAJB8在生精細(xì)胞中的表達(dá)定位。結(jié)果:DNAJB8基因在睪丸組織中特異表達(dá),從小鼠出生后21 d(P21)即圓形精子階段開始DNAJB8 mRNA保持較高的表達(dá),而DNAJB8蛋白在精子變形晚期出生后35 d(P35)才開始表達(dá)。DNAJB8蛋白主要定位在晚期精子細(xì)胞及精子鞭毛中段。結(jié)論:DNAJB8可能參與小鼠精子變形晚期的發(fā)育過程。
【部分圖文】：

為了進(jìn)一步驗(yàn)證DNAJB8抗體的特異性，利用Western blot分別檢測(cè)Dnajb8+/+和Dnajb8-/-小鼠睪丸、精子中的DNAJB8蛋白（26 kDa）的表達(dá)。Westernblot實(shí)驗(yàn)顯示，Dnajb8+/+小鼠睪丸、精子蛋白中有目的條帶（26 kDa）表達(dá)，而Dnajb8-/-小鼠睪丸、精子中無目的條帶表達(dá)（圖2），說明制備的DNAJB8抗體特異性結(jié)合DNAJB8蛋白。2.3 DNAJB8 m RNA和蛋白高度表達(dá)于減數(shù)分裂后的生精細(xì)胞

首先通過qRT-PCR檢測(cè)DNAJB8 mRNA在睪丸組織中特異表達(dá)（圖3A）。隨后選取出生后不同發(fā)育時(shí)間點(diǎn)的野生型小鼠睪丸組織，即P7（主要為精原細(xì)胞）、P14（出現(xiàn)早期精母細(xì)胞）、P21（發(fā)育到粗線期精母細(xì)胞）、P28（生精管腔出現(xiàn)早期圓形精子）、P35（第1波生精波結(jié)束）、P60（成熟精子），同樣采用qRT-PCR檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)精原和早期精母細(xì)胞幾乎檢測(cè)不到DNAJB8 mRNA表達(dá)，從P21開始DNAJB8 mRNA保持較高的表達(dá)水平，成年達(dá)到最高（圖3B）。為了明確DNAJB8基因在睪丸不同生殖細(xì)胞中的表達(dá)情況，對(duì)各級(jí)生精細(xì)胞和支持細(xì)胞進(jìn)行DNAJB8 mRNA水平檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)在支持細(xì)胞（sertoli,SE）和精原細(xì)胞（spermatogonia,SG）中幾乎沒有DNAJB8表達(dá)，粗線期精母細(xì)胞（pachytene spermatocytes,PS）階段DNAJB8 mRNA出現(xiàn)微弱上升，圓形精子（round sper-matid,RS）階段明顯升高，長(zhǎng)形精子（elongated sper-matid,ES）階段達(dá)到頂峰，隨后在附睪尾成熟精子（sperm,SP）里出現(xiàn)極微弱的表達(dá)（圖3C）。隨后，利用Western blot進(jìn)一步驗(yàn)證DNAJB8蛋白在睪丸組織中的特異表達(dá)（圖3D）。檢測(cè)不同年齡段的小鼠睪丸組織，發(fā)現(xiàn)DNAJB8蛋白在出生后第35天（P35）的小鼠中開始表達(dá)（圖3E），明確DNAJB8蛋白在精子變形晚期ES階段才開始表達(dá)（圖3F）。圖3 DNAJB8高表達(dá)于小鼠雄性生殖細(xì)胞

DNAJB8高表達(dá)于小鼠雄性生殖細(xì)胞
【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 張世慶;李德雪;李恩中;王常勇;張學(xué)明;魯景艷;;Bmil基因在小鼠睪丸組織中的表達(dá)定位[J];解剖學(xué)報(bào);2006年01期

2 劉剛;辛鐘成;陳亮;田龍;袁亦銘;郭應(yīng)祿;;趨化素樣因子超家族在小鼠睪丸中的基因發(fā)育表達(dá)調(diào)控和蛋白表達(dá)定位[J];中國(guó)男科學(xué)雜志;2006年09期

3 朱培元,黃宇烽,徐建平;小鼠睪丸精子細(xì)胞的分離與鑒定[J];中華男科學(xué);2002年01期

4 武曉英;喬宏萍;劉桂蘭;曹貴東;;硒對(duì)砷致雄性小鼠睪丸組織損傷的修復(fù)作用[J];山西農(nóng)業(yè)科學(xué);2020年04期

5 郭洪香;蔣靜思;劉波;袁安文;;熱應(yīng)激對(duì)小鼠睪丸組織的影響[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī)文摘;2012年04期

6 黃良田;促甲狀腺激素釋放激素受體基因在小鼠睪丸中的表達(dá)[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);1997年03期

7 虞世嘉;;小鼠睪丸細(xì)胞體外培養(yǎng)制備染色體的初步探討[J];解剖學(xué)通報(bào);1984年01期

8 宋陽,許增祿,崔麗,劉霄,徐健,錢曉菁,黃玉苓;小鼠睪丸Ⅳ型膠原的合成與分布[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào);1999年03期

9 孫亞平,嚴(yán)緣昌,張尚權(quán),趙峰;大鼠和小鼠睪丸表皮生長(zhǎng)因子表達(dá)的免疫組織化學(xué)定位觀察[J];中國(guó)組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志;1997年01期

10 石翠格;王麗麗;李慧;武斌;王介東;徐志卿;張樹成;;甘丙肽在成年雄性小鼠睪丸和附睪中的表達(dá)定位研究[J];中國(guó)計(jì)劃生育學(xué)雜志;2014年07期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前6條

1 胡濤;小鼠睪丸特異性表達(dá)基因TSEG-2的功能初步研究[D];華中科技大學(xué);2010年

2 胡廉;RNAi調(diào)控雄性小鼠睪丸uPA表達(dá)的研究[D];華中科技大學(xué);2011年

3 徐健;小鼠睪丸生殖細(xì)胞凋亡及相關(guān)基因調(diào)控的研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1999年

4 趙慶國(guó);GGNBP1和GGN2在小鼠睪丸中的表達(dá)及相互作用研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2005年

5 周永翠;三個(gè)新的精子發(fā)生相關(guān)基因在人和小鼠睪丸中的表達(dá)特征[D];汕頭大學(xué);2009年

6 郭曰帥;精子發(fā)生相關(guān)泛素化修飾的蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 曾林;自噬在溶血磷脂酰膽堿誘導(dǎo)小鼠睪丸間質(zhì)TM3細(xì)胞凋亡中的作用[D];南昌大學(xué);2019年

2 文玉嬌;hnRNPU蛋白在小鼠睪丸中的表達(dá)和功能研究[D];華中科技大學(xué);2019年

3 李蕊秀;CCP1及其相互作用蛋白MYH11在小鼠睪丸發(fā)育中的作用機(jī)制研究[D];內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué);2019年

4 張茜;CNBP在小鼠睪丸發(fā)育和精子發(fā)生過程中的功能研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2018年

5 吳小英;人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞異種移植不育小鼠睪丸的研究[D];汕頭大學(xué);2009年

6 王得志;β_1整合素在胚胎及生后不同年齡階段小鼠睪丸生精細(xì)胞分布的研究[D];武漢大學(xué);2004年

7 何苗;PLP-I基因在小鼠睪丸中的表達(dá)定位及多克隆抗體制備[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2013年

8 黃禮元;吸煙小鼠睪丸蛋白組差異研究：PEBP1對(duì)吸煙后小鼠睪丸精子發(fā)生功能影響的可能機(jī)制[D];上海交通大學(xué);2012年

9 吳明輝;小鼠睪丸非編碼基因來源小蛋白的蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2015年

10 賈三三;蛋白激酶SRPK2在小鼠睪丸組織的表達(dá)特征及初步功能研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2016年

本文編號(hào)：2857063