發(fā)布時(shí)間：2020-10-24 19:16

　　 目的:睪酮對(duì)男性生殖系統(tǒng)的發(fā)育和功能至關(guān)重要,包括促進(jìn)精子發(fā)生和維持男性第二性征。作為轉(zhuǎn)錄因子的Lhx9維持著生殖系統(tǒng)的正常發(fā)育,決定著不同類型的性腺細(xì)胞的分化并參與睪酮的合成。但到目前為止,對(duì)Lhx9的研究主要集中于它調(diào)控的靶向分子,對(duì)Lhx9本身的調(diào)控,特別是其翻譯后修飾仍不清楚。蛋白質(zhì)的泛素化修飾是一種重要的翻譯后修飾,在生命活動(dòng)的多個(gè)方面起著重要作用。本論文旨在研究Lhx9的翻譯后修飾是否會(huì)影響睪丸間質(zhì)細(xì)胞合成睪酮的能力。方法:本論文應(yīng)用了 HEK293T細(xì)胞系、TM3細(xì)胞系進(jìn)行分子水平的實(shí)驗(yàn),其中涉及到蛋白免疫印跡技術(shù),定量PCR技術(shù),免疫共沉淀技術(shù),間接免疫熒光技術(shù),慢病毒和小干擾RNA敲低蛋白表達(dá)的實(shí)驗(yàn),原核蛋白誘導(dǎo)表達(dá)和Pull-down實(shí)驗(yàn),雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn);應(yīng)用了原代睪丸間質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行了細(xì)胞功能的研究,其中涉及到,定量PCR技術(shù)和體外hCG刺激睪酮分泌的實(shí)驗(yàn);應(yīng)用了 Smurf1基因敲除小鼠進(jìn)行了動(dòng)物水平的觀察,其中涉及到免疫組化技術(shù),酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn),放射免疫方法檢測(cè)激素水平的實(shí)驗(yàn)。結(jié)果:本研究發(fā)現(xiàn)1)hCG刺激以劑量依賴性和時(shí)間依賴性方式增加原代小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞的睪酮分泌。在這一過程中,睪丸間質(zhì)細(xì)胞中的Lhx9蛋白質(zhì)水平增加、轉(zhuǎn)錄水平不變,并且發(fā)現(xiàn)Lhx9可以被泛素修飾,經(jīng)蛋白酶體途徑被降解。2)Smurf1負(fù)向調(diào)控Lhx9蛋白表達(dá)而不影響Lhx9的轉(zhuǎn)錄水平。Smurf1過表達(dá)細(xì)胞中Lhx9蛋白的半衰期縮短。相反,Smurf1敲低的細(xì)胞中Lhx9蛋白的穩(wěn)定性增加。此外,Smurf1敲除的胚胎成纖維細(xì)胞也表現(xiàn)出更穩(wěn)定的Lhx9表達(dá)。3)Smurf1促進(jìn)Lhx9的泛素化修飾和降解,Smurf1過表達(dá)細(xì)胞中Lhx9的泛素化水平增強(qiáng),而Smurf1敲除的胚胎成纖維細(xì)胞中觀察到Lhx9的泛素化水平減弱。4)Smurf1可以和Lhx9發(fā)生直接相互作用。Smurf1的HECT結(jié)構(gòu)域和Lhx9的LIM1、LIM2結(jié)構(gòu)域介導(dǎo)了這兩個(gè)分子之間的相互作用。在TM3細(xì)胞系和HSD3B1陽(yáng)性的原代睪丸間質(zhì)細(xì)胞中觀察到了 Lhx9和Smurf1主要共定位于細(xì)胞核中。5)通過報(bào)告基因?qū)嶒?yàn),發(fā)現(xiàn)Smurf1負(fù)調(diào)節(jié)Lhx9的轉(zhuǎn)錄活性。6)Smurf1敲除小鼠的睪丸間質(zhì)細(xì)胞中Lhx9、CYP17A1和HSD3B1蛋白表達(dá)上調(diào),并且睪酮合成過程中重要基因(NR5A1,STAR,CYP17A1,HSD3B1,HSD3B6和HSD17B3)的轉(zhuǎn)錄水平均上調(diào)。Smurf1敲除小鼠的睪丸間質(zhì)細(xì)胞相比于野生型,在hCG刺激下合成了更多的睪酮。7)Smurf1敲除小鼠的血清睪酮含量,在不同年齡階段都高于野生型對(duì)照,但血清中黃體生成素的水平與野生型沒有顯著差異,并且在睪丸組織中有更高的Lhx9蛋白表達(dá)。通過免疫組織化學(xué)分析,Smurf1敲除小鼠睪酮中HSD3B1和CYP17A1表達(dá)顯著高于野生型小鼠。Smurf1敲除小鼠的睪丸中NR5A1,CYP17A1,HSD3B1,HSD3B6,HSD17B3和STAR的轉(zhuǎn)錄水平亦增加。結(jié)論:本研究揭示了 Smurf1促進(jìn)Lhx9泛素化修飾并介導(dǎo)了 Lhx9的降解,抑制了睪丸間質(zhì)細(xì)胞中的睪酮合成。本研究結(jié)果增加了對(duì)體內(nèi)睪酮合成調(diào)節(jié)機(jī)制的新認(rèn)識(shí),將泛素化修飾,這一重要蛋白質(zhì)翻譯后修飾,與睪酮的穩(wěn)態(tài)調(diào)控聯(lián)系在了一起。Smurf1可能成為調(diào)節(jié)睪酮水平的靶點(diǎn),已發(fā)現(xiàn)一些小分子化合物可以抑制Smurf1的泛素連接酶的功能。這些化合物的使用為通過靶向Smurf1抑制其泛素連接酶活性,為增加睪酮合成提供了新的策略。
【學(xué)位單位】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R339.2
【部分圖文】：

２?Ａ?１０?Ｂ?８??Ｈ（ｙ??圖１丄１環(huán)戊基菲四環(huán)結(jié)構(gòu)（８）??首先，我們回顧一下睪酮在睪丸間質(zhì)細(xì)胞中合成的過程（圖１．１．２）。??第一步是膽固醇的獲取及轉(zhuǎn)運(yùn)。人體細(xì)胞中的大部分膽固醇來自膳食吸收后??１１??

?解放軍醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文解途徑中的關(guān)鍵酶，其中已糖激酶２（ＨＫ２），磷酸果糖激酶（ＰＦＫ）和脫氫酶（Ｇ６Ｐ）??表達(dá)增加，這導(dǎo)致通過磷酸戊糖途徑或丙酮酸檸檬酸循環(huán)途徑的葡萄糖利用增加??（３１）；?４）睪酮增加糖原合成酶（糖原合成中的限速酶）的活性，而降低糖原磷酸??化酶活性，這樣就減少糖原分解使細(xì)胞中游離葡萄糖的水平降低（３２）。??Ｉｎｓｕｌｉｎ?〇?０?Ｇｌｕｃｏｓｅ?？?／ｆＮ??

?解放軍醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文???的下丘腦一垂體一性腺軸對(duì)睪酮的調(diào)控之外，很多組織和分子都參與到了睪酮的??調(diào)控，例如骨組織分泌的骨鈣素作用于睪丸間質(zhì)細(xì)胞以刺激睪酮，大腦和睪丸之??間的直接神經(jīng)聯(lián)系導(dǎo)致睪酮產(chǎn)生的快速抑制。同時(shí)還有很多�。遥危粒ǎ恚椋悖颍铮遥危粒�??參與調(diào)控睪酮的生成，例如睪酮生成過程中起負(fù)調(diào)控作用的ｍｉＲ－１２５ａ、ｍｉＲ－４５５??和ｍｉＲ－１５０。但是針對(duì)分子水平的不同修飾（磷酸化、乙�；�、泛素化）的作用來??調(diào)控睪酮的合成的報(bào)道仍較少。??
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3 湯雪明;大鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞的自體吞噬活動(dòng)[J];實(shí)驗(yàn)生物學(xué)報(bào);1988年01期

4 劉建忠;睪丸間質(zhì)細(xì)胞調(diào)控的研究現(xiàn)狀[J];草食家畜;1994年03期

5 童國(guó)遐;白蛋白是一種作用于睪丸間質(zhì)細(xì)胞的生物活性蛋白質(zhì)[J];生理科學(xué)進(jìn)展;1990年02期

6 黃洋;靳輝;曹霞;李鵬飛;姜曉龍;陳建偉;姚曉磊;趙妙妙;呂麗華;;一種簡(jiǎn)便的機(jī)械法分離綿羊睪丸間質(zhì)細(xì)胞的研究[J];黑龍江動(dòng)物繁殖;2014年05期

7 肖愛嬌,王晶磊;睪丸間質(zhì)細(xì)胞睪酮生成的影響因素及作用機(jī)理[J];實(shí)用臨床醫(yī)學(xué);2002年03期

8 孫杰;施誠(chéng)仁;席曄斌;李偉毅;李懷遠(yuǎn);;大鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞移植的實(shí)驗(yàn)研究[J];中華男科學(xué)雜志;2008年09期

9 高潔,申立山,韓秀婕;睪丸間質(zhì)細(xì)胞及淋巴管的超微結(jié)構(gòu)[J];解剖科學(xué)進(jìn)展;2000年03期

10 楊建明,吳向東,蔣學(xué)之,丁訓(xùn)誠(chéng),吳曉蕓;鎘對(duì)大鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞脂質(zhì)過氧化的影響[J];中華勞動(dòng)衛(wèi)生職業(yè)病雜志;1998年01期

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4 李明;內(nèi)皮素-1對(duì)大鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞的作用[D];軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2001年

5 王鮮忠;仔豬睪酮合成快速調(diào)節(jié)機(jī)制的研究[D];西南農(nóng)業(yè)大學(xué);2003年

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7 張燁敏;輻射致小鼠不育癥模型的建立及睪丸間質(zhì)細(xì)胞損傷的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

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7 吳旭鵬;維生素A代謝異常對(duì)大鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞發(fā)育的影響[D];暨南大學(xué);2017年

8 高慧艷;氯化汞對(duì)大鼠原代睪丸間質(zhì)細(xì)胞類固醇激素合成的影響[D];鄭州大學(xué);2010年

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10 李陽(yáng);膽固醇對(duì)體外大鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞分泌睪酮的影響研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2017年

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