目的開(kāi)發(fā)復(fù)壯肺炎鏈球菌19F型(Sreptococcus pneumoniae serotype 19F,簡(jiǎn)稱(chēng)PN19F)菌種的方法,并優(yōu)化其莢膜多糖的純化工藝。方法配制PN19F菌種用液體擴(kuò)增培養(yǎng)基和固體選擇培養(yǎng)基,篩選出莢膜較厚的單菌落,比較復(fù)壯前后PN19F菌種的發(fā)酵培養(yǎng)情況、純化后多糖收獲量及多糖質(zhì)量;將發(fā)酵液裂解后分別酸沉淀8、24和48 h,并經(jīng)100 KD超濾純化,再分別用乙醇法和凍干法制備精制多糖,比較其多糖收獲量、組分檢定結(jié)果、抗原活性、核磁共振圖譜。結(jié)果兩種培養(yǎng)基復(fù)壯前后的PN19F菌種,發(fā)酵收獲菌液A_(600)值及培養(yǎng)時(shí)間變化不大。純化后多糖收獲量分別為0. 2和0. 6 g/L,即復(fù)壯后多糖收率提高了195%。酸沉淀8、24 h后純化的多糖質(zhì)量合格,且24 h較8 h多糖收率高約38%,酸沉淀時(shí)間達(dá)48 h時(shí),產(chǎn)率無(wú)明顯變化,但多糖質(zhì)量不合格。乙醇法和凍干法制備的精制多糖各項(xiàng)指標(biāo)均合格,且無(wú)明顯差異。結(jié)論應(yīng)用制備的兩種培養(yǎng)基復(fù)壯的PN19F菌種,可明顯提高莢膜多糖產(chǎn)量。PN19F菌種的酸沉淀時(shí)間不超過(guò)24 h,乙醇法和凍干法均可用于精制多糖制備。
【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 菌種
    1.2 主要試劑及儀器
    1.3 擴(kuò)增培養(yǎng)基及選擇培養(yǎng)基的制備
    1.4 PN19F菌種單菌落的復(fù)壯
    1.5 復(fù)壯前后菌種傳代及培養(yǎng)的比較
    1.6 莢膜多糖的提取
        1.6.1 粗制多糖的制備
        1.6.2 精制多糖的制備
    1.7 莢膜多糖純化工藝的優(yōu)化
        1.7.1 酸沉淀時(shí)間的優(yōu)化
        1.7.2 乙醇法和凍干法制備精糖的比較
        1.7.3 純化方法的應(yīng)用
    1.8 精糖的檢定
2 結(jié)果
    2.1 PN19F菌種復(fù)壯前后的罐培養(yǎng)及莢膜多糖生成情況
    2.2 莢膜多糖純化工藝的優(yōu)化
        2.2.1 不同酸沉淀時(shí)間及精糖制備方法制備的精糖質(zhì)量比較
        2.2.2 不同純化工藝對(duì)純化多糖抗原活性的影響
        2.2.3 乙醇法和凍干法對(duì)純化多糖結(jié)構(gòu)的影響
        2.2.4 酸沉淀時(shí)間對(duì)比實(shí)驗(yàn)的推廣應(yīng)用情況
    2.3 PN19F精糖純化工藝
3 討論

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