目的探討線粒體融合蛋白2(Mfn2)在氯化錳(MnCl2)誘導的耳蝸毛細胞(HE1-OC1)氧化應激、增殖和凋亡中的作用機制。方法采用不同濃度(0、1、3、5、10μmol/L)的MnCl2染毒培養(yǎng)的HEI-OC1細胞,建立錳中毒細胞模型;MnCl2染毒培養(yǎng)HEI-OC1細胞同時加入抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸(NAC)或si-Mfn2干擾細胞中Mfn2蛋白表達,甲基噻唑基四唑(MTT)法檢測細胞增殖;Western blot檢測細胞中總Caspase-3、總Caspase-9、Mfn2蛋白表達水平;流式檢測細胞中活性氧(ROS)、細胞凋亡。結(jié)果與0μmol/L MnCl2組比較,3、5、10μmol/L MnCl2染毒培養(yǎng)顯著抑制HEI-OC1細胞的增殖、促進細胞中活性氧的產(chǎn)生、總Caspase-3、總Caspase-9、Mfn2蛋白表達以及細胞凋亡,并呈劑量依賴性。與5μmol/L MnCl2染毒培養(yǎng)組比較,干擾Mfn2表達組和NAC處理組細胞的增殖能力顯著增強,而細胞中活性氧的含量,總Caspase-3、總Caspase-9蛋白表達水平以及細胞凋亡比例均顯著下降,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論干擾Mfn2蛋白表達可以減輕MnCl2對HEI-OC1細胞產(chǎn)生氧化應激、細胞增殖抑制以及凋亡促進作用。
【部分圖文】：

與0μmol/L MnCl2組比較，1μmol/L MnCl2染毒培養(yǎng)組HEI-OC1細胞中總Caspase-3、總Caspase-9、Mfn2蛋白相對表達差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；而3、5、10μmol/L MnCl2染毒培養(yǎng)組HEI-OC1細胞中總Caspase-3、總Caspase-9、Mfn2蛋白相對表達均顯著增加，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），并呈劑量依賴性，MnCl2濃度越高，蛋白相對表達增加越顯著，見圖3。圖2 不同濃度的MnCl2對HEI-OC1細胞中ROS相對含量的影響

不同濃度的MnCl2對HEI-OC1細胞中ROS相對含量的影響

上述實驗結(jié)果表明，5μmol/L MnCl2可以顯著抑制HEI-OC1細胞增殖，促進細胞中活性氧的產(chǎn)生以及Mfn2蛋白相對表達。因此，選用5μmol/L進行后續(xù)實驗。與5μmol/L MnCl2染毒培養(yǎng)組比較，培養(yǎng)48、72 h后，MnCl2+si-Mfn2組和MnCl2+NAC組細胞增殖能力顯著增強，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；但MnCl2+siMfn2組細胞增殖能力仍低于MnCl2+NAC組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見圖5。2.6 干擾Mfn2蛋白表達和NAC處理對MnCl2染毒培養(yǎng)的HEI-OC1細胞中ROS相對含量的影響
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