高尿酸血癥(Hyperuricemia,HUA)是指正常飲食條件下,血尿酸含量顯著高于正常含量的代謝疾病,臨床診斷指標為男性血尿酸含量大于420μmol/L,女性大于357μmol/L。研究表明,高尿酸血癥不僅可以發(fā)展為痛風,同時也是引起動脈硬化、心腦血管紊亂、胰島素抵抗等疾病的危險因素。利用藥物治療高尿酸血癥具有毒副作用強、病人耐受度低等問題,乳酸菌可以通過降解人體外源攝入的嘌呤類化合物間接降低血尿酸含量,成為輔助治療高尿酸血癥的新方法。本研究旨在從30株益生菌種中篩選具有降低血尿酸作用的菌株,并初步探索其作用機制。通過益生菌與含有尿酸、嘌呤(黃嘌呤、次黃嘌呤、鳥嘌呤)、核苷(腺苷、鳥苷)、核苷酸(腺苷酸、鳥苷酸)的磷酸緩沖液培養(yǎng),利用高效液相色譜(HPLC)篩選具有最強降解能力的益生菌,后利用高尿酸血癥大鼠模型驗證菌株是否具有降低血尿酸的作用。利用高效液相(HPLC)檢測益生菌胞內(nèi)物、胞外分泌物對核苷、核苷酸是否具有降解作用;使用三重四級桿質(zhì)譜(QQQ)檢測益生菌降解核苷與核苷酸過程胞內(nèi)、胞外重點代謝物的變化情況,初步探索菌株降低血尿酸的作用機制。高效液相色譜結(jié)果顯示13個種屬共30株益生菌中,干酪乳桿菌(Lactobacillus casei)ZM15具有最強的降解核苷(腺苷、鳥苷)、核苷酸(腺苷酸、鳥苷酸)的能力;ZM15胞內(nèi)物具有降解能力,胞外分泌物沒有降解能力,顯示ZM15降解核苷與核苷酸是胞內(nèi)過程。質(zhì)譜結(jié)果顯示ZM15降解核苷(腺苷、鳥苷)、核苷酸(腺苷酸、鳥苷酸)過程中,胞內(nèi)與胞外均產(chǎn)生黃嘌呤、次黃嘌呤、鳥嘌呤,且三種嘌呤胞內(nèi)含量顯著高于正常菌體內(nèi)含量(P0.01),胞內(nèi)、胞外均未檢測到尿酸與尿囊素。通過給高尿酸血癥大鼠模型灌胃菌株ZM15治療1-2周可以檢測到大鼠血尿酸水平的下降,顯示ZM15具有降血尿酸作用。綜上所述,干酪乳桿菌(Lactobacillus casei)ZM15具有較強的降解核苷與核苷酸能力,推測其主要通過在腸道內(nèi)與腸道上皮細胞競爭吸收核苷與核苷酸,達到降低血尿酸的作用。
【學(xué)位單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R589.7;R-332
【部分圖文】：

補救合成途徑是指利用游離的嘌呤或者嘌呤核苷，經(jīng)過簡單的反應(yīng)生成核苷酸，過程如圖1-1 所示。補救合成途徑過程簡單，消耗能量少，生理意義一方面在于節(jié)省能量、減少氨基酸消耗，另一方面對于某些缺乏主要合成途徑的組織確實是滿足組織需要的合成途徑。在嘌呤核苷酸合成途徑中，一些相關(guān)酶的基因發(fā)生突變，引起酶活性的改變，可致使尿酸含量增高。例如：磷酸核糖焦磷酸合成酶(PRS)參與核苷酸從頭合成途徑，此酶活性增高可以加速合成磷酸核糖焦磷酸與核苷酸，間接引起體內(nèi)過多合成尿酸；次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(HPRT)作為核苷酸補救途經(jīng)中的關(guān)鍵成分，該酶活性減弱可以減弱次黃嘌呤和鳥嘌呤生成相關(guān)核苷酸的過程，使次黃嘌呤和鳥嘌呤主要參與代謝過程被清除，間接導(dǎo)致尿酸含量增加；腺苷酸脫氨酶(AMPD)作用為催化腺苷酸生成肌苷酸，此酶缺乏則破壞了三磷酸腺苷酸的生成途徑，導(dǎo)致腺苷酸生成增多，間接導(dǎo)致尿酸水平增高[7]。圖 1-1 嘌呤合成與代謝過程Figure 1-1 The synthesis and metabolic process of purines

酸（低級多核苷酸）和部分單核苷酸。小腸粘膜分泌的二脂酶將寡核苷水解為單核苷酸，核苷酸酶可以將核苷酸水解為小分子核苷與磷酸。核中通過被動擴散的方式被吸收，次黃嘌呤與黃嘌呤被腸粘膜表皮細胞分呤氧化酶（XO）降解為尿酸，尿酸通過擴散或者載體運輸被人體吸收化合物的分解代謝產(chǎn)物因物種的不同而有所差別。對大部分魚類、兩長類哺乳動物本身有尿酸氧化酶，可以將尿酸進一步代謝為溶解度更高人體由于進化的原因?qū)е履蛩嵫趸溉狈�，尿酸作為嘌呤類化合物代謝物[9]。研究表明尿酸并不是沒有作用的代謝產(chǎn)物，尿酸與其鈉鹽均是良劑，具有保護膜結(jié)構(gòu)、防止脂質(zhì)過氧化、捕捉人體內(nèi)自由基、防止細胞化的作用，同時與 vitamin C 相互還原間接強化體內(nèi)抗氧化系統(tǒng)。研究苷酸在人體內(nèi)的具體代謝過程如圖 1-2 所示。

圖 1-3 腺嘌呤、鳥嘌呤、次黃嘌呤、黃嘌呤、尿酸的化學(xué)結(jié)構(gòu)Figure 1-3 The chemical structures of adenosine, guanosine, hypoxanthine,xanthine and uric acid食物中含有不同含量的嘌呤，目前對于同一種食物中含有嘌呤的含量文獻之間的差異比較大，對于如何準確定量食物中各類嘌呤的含量沒有明確的標準參考。常見測定嘌呤的方法有高效液相色譜（High Performance Liquid Chromatography ，HPLC）、氣相色譜法（Gas Chromatography，GC）、毛細管電泳法（High PerformanceCapillary Electrophoresis, HPCE）、離子色譜法（Ion Chromatography，IC）等，利用各種方法測定嘌呤含量前均需要對樣品進行前處理，將樣品中的各種嘌呤解離后進行測定。例如張艷萍等將啤酒在 100 ℃條件下與三氟乙酸/甲酸混合液（體積比 1:1）混合，水解釋放嘌呤，利用 HPLC 測定啤酒中鳥嘌呤、次黃嘌呤、黃嘌呤、腺嘌呤的含量，條件如下：ZORBAX SB-AQ 色譜柱（250×4.6 mm，5μ
【參考文獻】

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本文編號：2847832