體液免疫應(yīng)答在抵御胞外菌和病毒感染中發(fā)揮重要的作用,同時也是臨床多種抗體相關(guān)自身免疫性疾病發(fā)病的關(guān)鍵因子,深入了解體液免疫應(yīng)答的調(diào)控機(jī)制無論是對免疫學(xué)基礎(chǔ)理論還是臨床疾病的診治都具有重要的意義。本論文主要圍繞兩個先前在體液免疫應(yīng)答調(diào)控中作用未知的分子-程序性死亡受體1(program death-1,PD-1)和富含亮氨酸重復(fù)序列激酶2(Leucine-rich repeat kinase2,LRRK2)參與體液免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)機(jī)制開展系統(tǒng)研究。PD-1,又名CD279,首次是在死亡T細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞中被鑒定出來。PD-1是含有268個氨基酸的I型跨膜蛋白,屬于CD28/CTLA-4家族,是T細(xì)胞功能的重要反饋調(diào)節(jié)分子。PD-1在T細(xì)胞上誘導(dǎo)性表達(dá),通過與表達(dá)于抗原遞呈細(xì)胞、造血細(xì)胞及非造血細(xì)胞表面的配體PD-L相互作用進(jìn)而弱化TCR信號通路的活化。以PD-1/PD-L1為靶點(diǎn)的阻斷抗體可以通過提高CD8~+T細(xì)胞的免疫功能增強(qiáng)其抗腫瘤作用,并在多種腫瘤的臨床治療中具有很好療效。然而,PD-1/PD-L1信號通路在體液免疫應(yīng)答中的作用還需進(jìn)一步研究。為此,我們利用卵白蛋白(OVA)免疫小鼠的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?采用PD-1阻斷抗體處理小鼠,觀察其對體液免疫應(yīng)答的影響。結(jié)果顯示PD-1阻斷抗體處理的OVA免疫小鼠體內(nèi)總IgG和OVA特異性IgG的含量顯著高于未處理組。將NP-CGG免疫小鼠進(jìn)行PD-1阻斷抗體處理后,雖然NP特異性IgG抗體的水平有所升高,但是處理與否對抗體親和力的成熟沒有影響。分析PD-1阻斷抗體作用后對OVA免疫小鼠B細(xì)胞分化的影響,結(jié)果顯示,PD-1阻斷抗體處理后,OVA免疫小鼠脾臟中與抗體產(chǎn)生密切相關(guān)的生發(fā)中心B細(xì)胞(germinal center B cell,GCB)和記憶性B細(xì)胞(memory B cells)的比例顯著高于對照組;脾臟和骨髓中抗體產(chǎn)生細(xì)胞(antibody secreting cells)的比例也顯著升高。為了分析上述B細(xì)胞分化過程中亞群分布差異的原因,我們進(jìn)一步檢測了小鼠脾臟生發(fā)中心T細(xì)胞的分布和數(shù)量,結(jié)果顯示PD-1阻斷抗體處理組小鼠脾臟生發(fā)中心中CD4~+T細(xì)胞的數(shù)目顯著增多,同時細(xì)胞表面ICOS的表達(dá)顯著升高。進(jìn)一步探討阻斷PD-1是如何促進(jìn)ICOS的表達(dá),OVA免疫小鼠來源的脾臟細(xì)胞體外經(jīng)PD-1阻斷抗體處理,發(fā)現(xiàn)與對照組相比,PD-1阻斷抗體處理組培養(yǎng)上清抗體水平以及CD4~+T細(xì)胞表面ICOS表達(dá)水平均顯著升高,并伴隨顯著增強(qiáng)的ERK信號通路的活化。體外培養(yǎng)中抑制ERK信號通路,可以消除抗體水平的升高和CD4~+T細(xì)胞表面ICOS表達(dá)水平的差異。此外,臨床肺癌病人接受PD-1單克隆抗體治療后血漿中IgG抗體水平顯著高于使用PD-1單克隆抗體前血漿中的IgG抗體水平。綜上所述,我們的研究結(jié)果表明阻斷PD-1信號通路可以增強(qiáng)體液免疫應(yīng)答,并且一定程度上是依賴于對CD4~+T細(xì)胞的ICOS表達(dá)水平的上調(diào),而阻斷PD-1使ICOS表達(dá)水平升高依賴于ERK信號通路的活化。阻斷PD-1信號通路對體液免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)作用提示了它具有作為腫瘤免疫治療療效評判的潛在功能。LRRK2分子最重要的病理作用是在帕金森病人中存在廣泛突變,被認(rèn)為是帕金森病的首個遺傳相關(guān)因素。LRRK2包含多個潛在功能結(jié)構(gòu)域,包括ROC,COR,激酶,ANK,LRR,WD40等結(jié)構(gòu)域。研究表明LRRK2在多種人免疫細(xì)胞,包括B細(xì)胞,單核/巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞中大量表達(dá)。在小鼠也主要是B細(xì)胞表達(dá)LRRK2,而T細(xì)胞并不表達(dá)LRRK2,提示LRRK2在免疫系統(tǒng)特別是B淋巴細(xì)胞中可能發(fā)揮一定的作用。系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)是典型的病理性自身抗體介導(dǎo)的自身免疫性疾病,檢測發(fā)現(xiàn)SLE病人外周B細(xì)胞中LRRK2的表達(dá)水平顯著高于正常人,并且LRRK2的表達(dá)水平與系統(tǒng)性紅斑狼瘡疾病活動度評分呈顯著正相關(guān)。同時,LRRK2缺陷顯著降低了Pristane誘導(dǎo)的SLE病理模型小鼠外周自身抗體水平,降低腎臟中與病理損傷相關(guān)的抗體沉積水平,表明LRRK2在SLE病理性抗體的產(chǎn)生過程中可能具有正向的調(diào)節(jié)作用。我們進(jìn)一步通過腹腔注射NP-CGG抗原分別免疫野生型和LRRK2~(-/-)小鼠,結(jié)果顯示LRRK2~(-/-)小鼠血清中NP特異性抗體的水平顯著低于野生型小鼠,而LRRK2分子本身隨著B細(xì)胞的終末分化,表達(dá)水平呈現(xiàn)逐漸上調(diào)的趨勢。通過骨髓嵌合小鼠實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)B細(xì)胞中LRRK2基因的缺失是導(dǎo)致小鼠體液免疫應(yīng)答減弱的原因,體外增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示LRRK2的缺失對B細(xì)胞的增殖沒有影響。上述結(jié)果表明LRRK2在體液免疫反應(yīng)中具有一定的正向調(diào)節(jié)作用,該分子可能通過參與調(diào)節(jié)B細(xì)胞的終末分化影響體液免疫應(yīng)答的結(jié)局,并進(jìn)而在體液免疫應(yīng)答介導(dǎo)的疾病發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮一定作用。
【學(xué)位單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R392
【部分圖文】：

上海交通大學(xué)博士學(xué)位論文變（somatic hypermutation），突變后產(chǎn)生的各種 B 力各不相同，經(jīng)過抗原的不斷選擇，使表達(dá)高親和力其總體結(jié)果是，后代 B 細(xì)胞及其產(chǎn)生的抗體對抗原此過程也被稱為抗體的親和力成熟（affinity maturati B 細(xì)胞的免疫球蛋白基因發(fā)生類別轉(zhuǎn)換（class switcwitch），由此形成包括 IgM、IgG、IgA 和 IgE 在內(nèi)的通過生發(fā)中心反應(yīng)，活化的 B 細(xì)胞最終分化為高親和LLPCs。

上海交通大學(xué)博士學(xué)位論文PD-L2 主要表達(dá)于胸腺的髓質(zhì)區(qū)域，且可誘導(dǎo)性表達(dá)于多種細(xì)胞，如 DCs、B 細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、骨髓來源的肥大細(xì)胞和記憶性 B 細(xì)胞等34。2.2 PD-1/PD-L 信號通路與免疫調(diào)控2.2.1 PD-1/PD-L 的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)PD-1/PD-L 的信號活化依賴于免疫應(yīng)答發(fā)生后免疫表面 PD-1 的表達(dá)上調(diào)，并通過與 APC 和其他非免疫細(xì)胞上的 PD-L1 結(jié)合后，PD-1 胞內(nèi)段 ITIM 和 ITSM基序中的酪氨酸發(fā)生磷酸化，進(jìn)一步募集胞漿內(nèi)的 SHP-1 與 SHP-2（主要是SHP-2），SHP-2 可使已經(jīng)活化的重要信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子，如 PIK3/AKT 及 ZAP70CD3ζ 及下游信號分子 PKCθ 發(fā)生去磷酸化，從而抑制活化信號向核內(nèi)傳入以及后續(xù)功能基因的表達(dá)受到抑制（圖 2）38,39。因此，PD-1/PD-L 信號通路的激活成為眾多免疫細(xì)胞活化后的主要反饋抑制機(jī)制。

40圖 1-1：OVA 免疫小鼠 CD4+T 細(xì)胞表面 PD-1 及 B 細(xì)胞表面 PD-L 表達(dá)量上升Figure 1-1: Increased expression levels of PD-1 on CD4+T cells and PD-L on B cells upon OVAimmunization(A) OVA 免疫小鼠與未免疫對照組小鼠脾細(xì)胞中 CD4+T 細(xì)胞上 PD-1 表達(dá)水平的流式檢測散點(diǎn)圖。(B) CD4+T 細(xì)胞表達(dá) PD-1 的細(xì)胞百分比統(tǒng)計(jì)圖。(C) OVA 免疫小鼠與未免疫對照組小鼠脾細(xì)胞中 B 細(xì)胞上 PD-L 表達(dá)水平的流式檢測散點(diǎn)圖。(D) B 細(xì)胞表達(dá) PD-L 的細(xì)胞百分比統(tǒng)計(jì)圖。*: P<0.05，**: P<0.01。3.1.2 體內(nèi)阻斷 PD-1 可以增強(qiáng) TD 抗原免疫小鼠的抗體水平
【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 張清泉，彭聿平，邱一華，李炳源，李新玲;5－羥色胺與體液免疫應(yīng)答的相互作用[J];南通醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1995年04期

2 戚丹英,劉福安;一種小雞體液免疫應(yīng)答能力指示系統(tǒng)的建立[J];華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);1988年04期

3 劉克;;HBsAg前S(2)區(qū)的11個連續(xù)性氨基酸殘基具有兩個不同但相互重疊的撫體結(jié)合位點(diǎn)[J];國外醫(yī)學(xué).預(yù)防.診斷.治療用生物制品分冊;1988年01期

4 楊耀;;去垢劑和磷酸鋁對細(xì)菌和病毒膜蛋白體液免疫應(yīng)答的協(xié)同作用[J];國外醫(yī)學(xué).預(yù)防.診斷.治療用生物制品分冊;1988年06期

5 蔣玖;;牛奶過敏患兒對牛奶的體液免疫應(yīng)答[J];國外醫(yī)學(xué)(免疫學(xué)分冊);1988年03期

6 戚丹英,劉福安;一種小雞體液免疫應(yīng)答能力指示系統(tǒng)的建立[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào);1989年S1期

7 王天然;淫羊藿多糖對初次和再次體液免疫應(yīng)答的作用[J];中藥藥理與臨床;1989年04期

8 王天然;小鼠初次及再次體液免疫應(yīng)答測定及多抗甲素的作用[J];中國免疫學(xué)雜志;1989年01期

9 張定鳳;乙型肝炎的細(xì)胞免疫功能研究的進(jìn)展[J];臨床肝膽病雜志;1989年02期

10 洪秀華;;乙型肝炎病毒感染的體液免疫應(yīng)答[J];國外醫(yī)學(xué)(微生物學(xué)分冊);1984年02期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前7條

1 張美玉;體液免疫應(yīng)答的調(diào)控新機(jī)制和病理意義研究[D];上海交通大學(xué);2018年

2 董慶洋;體液免疫應(yīng)答失調(diào)促進(jìn)慢性乙型肝炎病毒感染[D];軍事科學(xué)院;2018年

3 梁云飛;病毒抗原蛋白的B細(xì)胞表位生物學(xué)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2006年

4 徐小剛;斑馬魚TIM家族基因鑒定及其在適應(yīng)性體液免疫應(yīng)答中的功能研究[D];浙江大學(xué);2015年

5 王潔;沙眼衣原體感染體液免疫應(yīng)答譜的建立及Tarp蛋白生物學(xué)特性的研究[D];中南大學(xué);2011年

6 段志青;犬尿氨酸對體液免疫應(yīng)答的影響及其機(jī)制的初步探討[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2014年

7 馬千里;肺炎鏈球菌毒力蛋白基因工程疫苗優(yōu)勢抗原篩選[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2009年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前7條

1 李秀芬;HIV-1感染者抗p24和gp41體液免疫應(yīng)答的特征及流行病學(xué)意義[D];南方醫(yī)科大學(xué);2017年

2 朱振營;馬傳染性貧血病毒弱毒疫苗株和強(qiáng)毒株誘導(dǎo)的特異性體液免疫應(yīng)答差別[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2009年

3 黃薇;Tespal負(fù)向調(diào)節(jié)BCR信號和B細(xì)胞介導(dǎo)的體液免疫[D];浙江大學(xué);2015年

4 呂艷;Mtb感染BALB/c鼠B細(xì)胞亞群變化及體液免疫應(yīng)答研究[D];大理學(xué)院;2014年

5 羅滿生;CpG寡核苷酸增強(qiáng)重組HBsAg疫苗免疫應(yīng)答的實(shí)驗(yàn)研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2006年

6 魏玉英;新型腫瘤基因疫苗載體的構(gòu)建及其抑瘤活性的初步研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2009年

7 張霞;犬傳染性肝炎核酸疫苗免疫效果研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2007年

本文編號：2845064