目的構建Luc-GFP標記的高轉移性人肝癌細胞株,兩種方法建立方便觀察且自發(fā)轉移的裸鼠原位肝癌模型。方法構建p CDH-CMV-Luc-EF1-GFP-Puro重組慢病毒表達載體,并轉染人肝癌細胞株HCCLM3,通過細胞懸液肝左葉注射法或皮下移植瘤組織塊肝內植入法構建裸鼠原位肝癌模型,利用活體成像技術和組織病理學比較兩種方法腫瘤的生長和轉移情況。結果構建穩(wěn)定表達熒光素酶(Luc)和綠色熒光蛋白(GFP)的高轉移性人肝癌細胞株HCCLM3-Luc-GFP,裸鼠活體成像和病理學結果發(fā)現(xiàn),兩種方法建立的原位肝癌模型成瘤率均為100%。其中細胞懸液法建模周期短,對宿主肝的損傷小,更能模擬出肝癌患者的微環(huán)境,轉移率高;而腫瘤組織塊法的成瘤大小和位置較易控制,但轉移率較低。結論成功構建Luc-GFP標記的高轉移性人肝癌細胞系HCCLM3-Luc-GFP,細胞懸液法和腫瘤組織塊轉接法分別建立了自發(fā)轉移且便于觀察的裸鼠原位肝癌模型,為連續(xù)、直觀地監(jiān)測腫瘤的生長轉移,評價抗肝癌生長轉移藥物的療效奠定了基礎。
【部分圖文】：

腫瘤HE染色

腫瘤實體觀察

雙酶切鑒定，得到2個片段(見圖2),Luc基因在1.6 kb～1.8 kb之間，慢病毒重組表達載體片段在7.0 kb～10.0 kb之間，酶切結果與預期相符。測序結果目的基因Luc無突變，重組表達載體構建成功。圖2 重組表達載體酶切鑒定圖
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