目的構(gòu)建Luc-GFP標(biāo)記的高轉(zhuǎn)移性人肝癌細(xì)胞株,兩種方法建立方便觀察且自發(fā)轉(zhuǎn)移的裸鼠原位肝癌模型。方法構(gòu)建p CDH-CMV-Luc-EF1-GFP-Puro重組慢病毒表達(dá)載體,并轉(zhuǎn)染人肝癌細(xì)胞株HCCLM3,通過細(xì)胞懸液肝左葉注射法或皮下移植瘤組織塊肝內(nèi)植入法構(gòu)建裸鼠原位肝癌模型,利用活體成像技術(shù)和組織病理學(xué)比較兩種方法腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移情況。結(jié)果構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶(Luc)和綠色熒光蛋白(GFP)的高轉(zhuǎn)移性人肝癌細(xì)胞株HCCLM3-Luc-GFP,裸鼠活體成像和病理學(xué)結(jié)果發(fā)現(xiàn),兩種方法建立的原位肝癌模型成瘤率均為100%。其中細(xì)胞懸液法建模周期短,對(duì)宿主肝的損傷小,更能模擬出肝癌患者的微環(huán)境,轉(zhuǎn)移率高;而腫瘤組織塊法的成瘤大小和位置較易控制,但轉(zhuǎn)移率較低。結(jié)論成功構(gòu)建Luc-GFP標(biāo)記的高轉(zhuǎn)移性人肝癌細(xì)胞系HCCLM3-Luc-GFP,細(xì)胞懸液法和腫瘤組織塊轉(zhuǎn)接法分別建立了自發(fā)轉(zhuǎn)移且便于觀察的裸鼠原位肝癌模型,為連續(xù)、直觀地監(jiān)測(cè)腫瘤的生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移,評(píng)價(jià)抗肝癌生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移藥物的療效奠定了基礎(chǔ)。
【部分圖文】：

腫瘤HE染色

腫瘤實(shí)體觀察

雙酶切鑒定，得到2個(gè)片段(見圖2),Luc基因在1.6 kb～1.8 kb之間，慢病毒重組表達(dá)載體片段在7.0 kb～10.0 kb之間，酶切結(jié)果與預(yù)期相符。測(cè)序結(jié)果目的基因Luc無(wú)突變，重組表達(dá)載體構(gòu)建成功。圖2 重組表達(dá)載體酶切鑒定圖
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