本文關(guān)鍵詞：n-3脂肪酸對(duì)氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的作用及其分子機(jī)制，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：本課題利用SH-SY5Y細(xì)胞作為模型研究n-3多不飽和脂肪酸(n-3 PUFAs)對(duì)氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的作用及相關(guān)分子機(jī)制。研究采用終濃度為60μmol的n-3 PUFAs預(yù)處理細(xì)胞24小時(shí)后,再以終濃度為500μM的過(guò)氧化氫處理細(xì)胞一定時(shí)間。用Hoechst染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡、用Western blot和RT-PCR方法研究線粒體凋亡通路中Bcl-2家族蛋白的表達(dá)、MAPK抗凋亡信號(hào)通路中相關(guān)蛋白的表達(dá)、Nrf-2-ARE抗氧化應(yīng)激通中下游目的基因HO-1的表達(dá)。用相應(yīng)試劑盒檢測(cè)線粒體膜電位(MMP)的喪失、活性氧(ROS)的生成。研究結(jié)果表明,經(jīng)過(guò)500μM過(guò)氧化氫處理24h后,SH-SY5Y細(xì)胞發(fā)生嚴(yán)重的細(xì)胞凋亡,60μmol n-3 PUFAs預(yù)處理能顯著抑制這種凋亡現(xiàn)象。對(duì)細(xì)胞凋亡信號(hào)通路的Bcl-2家族相關(guān)蛋白表達(dá)的研究發(fā)現(xiàn),n-3 PUFAs預(yù)處理的細(xì)胞能夠顯著降低過(guò)氧化氫引起的促凋亡蛋白Bax、Bak表達(dá)增加;抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)降低的現(xiàn)象。過(guò)氧化氫刺激導(dǎo)致細(xì)胞正常MMP喪失、細(xì)胞內(nèi)ROS水平顯著上升,而n-3 PUFAs預(yù)處理的細(xì)胞能維持正常MMP,保護(hù)細(xì)胞免受氧化應(yīng)激下的線粒體損傷和顯著抑制ROS水平的升高。MAPK抗凋亡信號(hào)通路中相關(guān)蛋白的表達(dá)研究發(fā)現(xiàn),n-3 PUFAs預(yù)處理的細(xì)胞能夠顯著降低過(guò)氧化氫引起的細(xì)胞內(nèi)Erk蛋白磷酸化水平上升,緩解細(xì)胞抵御氧化應(yīng)激壓力,而對(duì)p38的磷酸化調(diào)控作用不顯著。在對(duì)HO-1基因表達(dá)研究中,RT-PCR結(jié)果顯示細(xì)胞內(nèi)該基因在過(guò)氧化氫刺激下無(wú)顯著變化,而n-3 PUFAs預(yù)處理在12 h內(nèi)各個(gè)時(shí)間點(diǎn)對(duì)其表達(dá)也無(wú)顯著調(diào)控作用。綜上所述,n-3 PUFAs可以抑制過(guò)氧化氫誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡現(xiàn)象,通過(guò)調(diào)節(jié)Bcl-2家族和MAPK信號(hào)通路的相關(guān)蛋白對(duì)凋亡起調(diào)控作用,該過(guò)程可能無(wú)HO-1的參與。此外,n-3 PUFA可以降低細(xì)胞內(nèi)ROS水平、維持細(xì)胞正常MMP保護(hù)細(xì)胞線粒體功能。
【關(guān)鍵詞】：n-3 PUFAs 氧化應(yīng)激 細(xì)胞凋亡 Bcl-2 MAPK ROS
【學(xué)位授予單位】：哈爾濱工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-8
• 第1章 緒論8-19
• 1.1 課題來(lái)源8
• 1.2 課題研究背景及國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀分析8-17
• 1.2.1 氧化應(yīng)激8-10
• 1.2.2 細(xì)胞凋亡10-12
• 1.2.3 Nrf2-ARE抗氧化應(yīng)激通路12-15
• 1.2.4 n-3 多不飽和脂肪酸（n-3 PUFAs）15-17
• 1.3 課題研究的目的和意義17-18
• 1.4 課題研究的主要方法和內(nèi)容18-19
• 1.4.1 課題研究的主要方法18
• 1.4.2 課題研究的主要內(nèi)容18-19
• 第2章 材料與方法19-28
• 2.1 研究材料19
• 2.2 研究主要儀器與試劑19-21
• 2.3 研究方法21-28
• 2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)與傳代21-22
• 2.3.2 藥物處理22
• 2.3.3 Hoechst染色22-23
• 2.3.4 線粒體膜電位（MMP）檢測(cè)23
• 2.3.5 Ros水平檢測(cè)23-24
• 2.3.6 Western blot24-25
• 2.3.7 RT-PCR25-27
• 2.3.8 數(shù)據(jù)處理27-28
• 第3章 N-3 PUFAs對(duì)過(guò)氧化氫誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的影響28-35
• 3.1 引言28
• 3.2 HOECHST染色28-30
• 3.3 BCL-2 家族相關(guān)蛋白表達(dá)30-31
• 3.4 線粒體膜電位（MMP）檢測(cè)31-33
• 3.5 討論33-34
• 3.6 本章小結(jié)34-35
• 第4章 N-3 PUFAs對(duì)過(guò)氧化氫誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激及相關(guān)細(xì)胞信號(hào)通路的影響35-43
• 4.1 引言35
• 4.2 細(xì)胞內(nèi)ROS水平檢測(cè)35-37
• 4.3 MAPK信號(hào)途徑相關(guān)蛋白磷酸化水平37-39
• 4.4 NRF2 下游HO-1 基因表達(dá)水平39-40
• 4.4.1 HO-1 基因表達(dá)檢測(cè)39
• 4.4.2 EPA對(duì)HO-1 表達(dá)的影響（時(shí)間點(diǎn)實(shí)驗(yàn)）39-40
• 4.5 討論40-41
• 4.6 本章小結(jié)41-43
• 結(jié)論43-44
• 參考文獻(xiàn)44-60
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及其它成果60-62
• 致謝62

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