銅綠假單胞菌是一種常見(jiàn)的機(jī)會(huì)致病菌,是醫(yī)院內(nèi)感染的主要病原菌之一。由于其自身固有的耐藥性和獲得耐藥性,導(dǎo)致該菌引起的感染很難治療。目前對(duì)于該菌的致病性研究多數(shù)集中在單個(gè)菌株,而感染的實(shí)際情況更加復(fù)雜,存在多種微生物。每一種微生物都能進(jìn)行種間或種內(nèi)的信號(hào)傳遞。通過(guò)這種信號(hào)傳遞,不同菌株之間會(huì)產(chǎn)生一種相互作用,在感染過(guò)程中絕大多數(shù)相互作用都會(huì)對(duì)宿主產(chǎn)生不利影響,加大治療的難度。因此,研究多種致病菌之間的作用機(jī)制對(duì)于研發(fā)新的治療藥物及治療策略具有重要意義。實(shí)驗(yàn)前期,將銅綠假單胞菌PAO1和實(shí)驗(yàn)室保存的100株臨床菌分別進(jìn)行共培養(yǎng)篩選,發(fā)現(xiàn)一株臨床菌,在共培養(yǎng)情況下能夠促進(jìn)PAO1綠膿菌素的產(chǎn)生,將其命名為E9。為了找出E9作用于PAO1中的基因,構(gòu)建了轉(zhuǎn)座突變體庫(kù),最終篩選出17株目的菌株。共培養(yǎng)時(shí),E9不能促進(jìn)其綠膿菌素產(chǎn)生,但純培養(yǎng)時(shí)綠膿菌素產(chǎn)量與野生型相似或更高。最后進(jìn)行測(cè)序。根據(jù)篩選的結(jié)果,選擇表型最為明顯的PA2228基因,將其進(jìn)行缺失突變,得到突變體PAO1(?PA2228)。然后,將其與E9進(jìn)行共培養(yǎng)。結(jié)果顯示:在E9和PAO1(?PA2228)共培養(yǎng)時(shí)綠膿菌素產(chǎn)量與PAO1(?PA2228)純培養(yǎng)時(shí)一致。為了排除E9和PAO1(?PA2228)共培養(yǎng)時(shí),綠膿菌素不增加是由于PAO1(?PA2228)生長(zhǎng)劣勢(shì)的可能性,分別對(duì)野生型與突變體的共培養(yǎng)體系中兩種菌的比例進(jìn)行監(jiān)測(cè)。發(fā)現(xiàn)兩種共培養(yǎng)體系中菌數(shù)比例相似。表明在臨床菌E9和銅綠假單胞菌共培養(yǎng)時(shí)作用于PA2228基因,導(dǎo)致綠膿菌素產(chǎn)量增加。臨床菌E9能夠通過(guò)PA2228基因促進(jìn)PAO1綠膿菌素的產(chǎn)生,但E9是否也能通過(guò)PA2228基因改變PAO1中其它毒性因子的變化?于是本實(shí)驗(yàn)對(duì)PAO1(?PA2228)的毒性因子進(jìn)行檢測(cè),發(fā)現(xiàn)PAO1(?PA2228)中毒性因子的產(chǎn)生減少,如生物被膜、胞外多糖、胞外蛋白酶、運(yùn)動(dòng)能力以及Ⅲ型分泌蛋白產(chǎn)量都下降。由此推測(cè),臨床菌E9與銅綠假單胞菌PAO1共培養(yǎng)不僅能促進(jìn)綠膿菌素的產(chǎn)生,也能引起其它毒力因子的變化。
【學(xué)位單位】：西北大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R378
【部分圖文】：

圖 1 由 PCA 到綠膿菌素生物合成途徑[18]1.2.2 生物被膜銅綠假單胞菌有多種抗生素耐藥性，其中一個(gè)主要原因就是細(xì)菌生物被膜（BF）的產(chǎn)生。細(xì)菌生物被膜是由細(xì)菌產(chǎn)生的胞外多糖包圍的微菌落組成的，通常存在于表面，并被包裹在細(xì)胞外基質(zhì)中。它是一種親水性的物質(zhì)，其中的主要成分是水，其中也包含一些胞外多糖、eDNA、蛋白、脂質(zhì)等。銅綠假單胞菌生物被膜具有三個(gè)不同的發(fā)育階段，初始附著階段、成熟階段和分離階段，如圖 2 所示[19]。銅綠假單胞菌的初始附著由粘附素、IV 型菌毛、Psl 和脂多糖介導(dǎo)，并受 c-di-GMP 和 sRNA 調(diào)控[19]。生物被膜的成熟是以生物膜結(jié)構(gòu)的形成和胞外基質(zhì)的產(chǎn)生為特征的。臨床上，從 CF 病人病灶分離的銅綠假單胞菌菌株大多是粘液性的，其生物被膜的主要成分是藻酸鹽。細(xì)菌的生物被膜是引起慢性感染的主要因素，它能夠增加細(xì)菌的耐藥性，抵抗吞噬作用以及獲得性免疫系統(tǒng)耐受性和抗生素耐藥性[20]。生物被膜感染主要發(fā)生在 CF 病人呼吸道表面或者醫(yī)療器械表面，如：氣管導(dǎo)管、導(dǎo)尿管、外科手術(shù)植入物，均能引起嚴(yán)重的治療問(wèn)題，

圖 2 生物被膜生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程[19]1.2.3 Ⅲ型分泌系統(tǒng)Ⅲ型分泌系統(tǒng)（Type Ⅲ secretion system, T3SS）是銅綠假單胞菌與許多革蘭氏陰性菌一個(gè)共同的重要毒力系統(tǒng)，它在進(jìn)化上與鞭毛系統(tǒng)相聯(lián)系，由鞭毛進(jìn)化產(chǎn)生。T3SS是一種功能保守、結(jié)構(gòu)復(fù)雜的中空的針狀大分子，由多個(gè)蛋白組成，跨越細(xì)菌內(nèi)膜、質(zhì)周空間、肽聚糖層、細(xì)菌外膜、細(xì)胞外空間和宿主細(xì)胞膜，如圖 3 所示[20]。它能以高度調(diào)控的方式將效應(yīng)毒素直接從細(xì)菌傳遞到宿主細(xì)胞溶膠中。該系統(tǒng)在接觸真核細(xì)胞膜時(shí)被激活，分泌效應(yīng)毒素，干擾信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，導(dǎo)致宿主細(xì)胞死亡或宿主免疫反應(yīng)的改變[20]。T3SS 是操縱真核宿主細(xì)胞反應(yīng)的主要毒性決定因素，廣泛存在于多種病原體中。銅綠假單胞菌目前已鑒定出 4 種效應(yīng)毒素蛋白，包括 ExoY、ExoT、ExoX、ExoU。其中 ExoY是具有腺苷酸環(huán)化酶活性，它有兩個(gè) ATP 結(jié)合位點(diǎn)，是一種細(xì)胞毒素類因子。ExoT 和ExoS都是具有N-端GTP酶激活結(jié)構(gòu)域和 C-端腺苷二磷酸轉(zhuǎn)移酶結(jié)構(gòu)域的雙功能蛋白，GTP 酶功能的行使能夠?qū)е录?xì)胞肌動(dòng)蛋白骨架裂解，使宿主細(xì)胞呈現(xiàn)圓形，同時(shí)也能

第一章 緒論，ExoU 能夠特異性殺傷中性粒細(xì)胞，中性粒細(xì)胞的減少導(dǎo)致容易受到繼發(fā)性感染。有研究表明 ExoU 能引起小鼠肺部感染表明，銅綠假單胞菌中主要是通過(guò) GacS/GacA 雙組分系統(tǒng)控誘導(dǎo)Ⅲ型分泌蛋白的合成[22]。環(huán)境中的 Ca2+濃度、代謝壓力型分泌蛋白的表達(dá)。
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9 王多寧,白剛;綠膿菌素的抗菌作用及其與臨床感染的關(guān)系[J];中國(guó)抗生素雜志;1992年03期

10 祝飛美;何瑾晨;黃寧;王祎;;PARP抑制劑PJ34在綠膿菌素引起的巨噬細(xì)胞損傷中的作用[J];四川生理科學(xué)雜志;2019年01期

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