目的:阿爾茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是一種與衰老相關(guān)的神經(jīng)退行性疾病,也是老年癡呆中最為常見(jiàn)的一種類(lèi)型。AD病因復(fù)雜多樣,腦內(nèi)β-淀粉樣蛋白(β-amyloid protein,Aβ)的大量聚積是AD發(fā)生的重要因素。Aβ聚積可誘導(dǎo)神經(jīng)炎癥,然而,一些研究表明,腦內(nèi)持續(xù)的慢性炎性反應(yīng)會(huì)加速Aβ沉積等其它核心病理,因此減輕炎癥反應(yīng)可能成為防治AD的有效措施。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi),星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞的活化與神經(jīng)炎癥密切相關(guān)。星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞在正常情況下主要起支持作用,當(dāng)中樞神經(jīng)系統(tǒng)受損后可引起星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞活化�；罨男切文z質(zhì)細(xì)胞成為反應(yīng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞,分泌IL-1β、TNF-α等促炎因子。活化的小膠質(zhì)細(xì)胞有兩種亞型:其一是經(jīng)典激活型(M1型),其二是選擇性激活型(M2型)。M1型細(xì)胞分泌IL-1β、TNF-α等促炎因子;M2型細(xì)胞分泌白介素-4、白介素-10等抗炎因子。研究發(fā)現(xiàn),在AD腦內(nèi)反應(yīng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞和活化的小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量顯著增多,隨著病情的加重小膠質(zhì)細(xì)胞可從M2型向M1型轉(zhuǎn)變,且在AD模型小鼠的發(fā)病進(jìn)程中腦內(nèi)IL-1β表達(dá)持續(xù)增高,而TNF-α表達(dá)則先下降后升高。因此,減少反應(yīng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞M1型活化可減輕AD腦內(nèi)炎癥反應(yīng)。Toll樣受體-2(Toll-like receptor-2,TLR2)是星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞表面的一種先天性受體,下調(diào)其表達(dá)可降低Aβ引起的星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞M1型活化。核轉(zhuǎn)錄因子(Nuclear factorκB,NF-κB)是TLR2下游的轉(zhuǎn)錄因子,正常情況下以非活化形式存在于膠質(zhì)細(xì)胞中;當(dāng)膠質(zhì)細(xì)胞活化后,可參與調(diào)控促炎因子的表達(dá)。NF-κB蛋白家族中的NF-κBp65是調(diào)控炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵因子。因此,下調(diào)TLR2可抑制膠質(zhì)細(xì)胞活化,降低NF-κBp65和促炎因子表達(dá),從而減輕神經(jīng)炎癥反應(yīng)。益生元是指不易被消化的低聚糖、多糖、多元醇等,主要包括低聚半乳糖(galactooligosaccharide,GOS)、乳蔗糖等,可通過(guò)抗炎、抗氧化等多種途徑發(fā)揮拮抗AD的作用。文獻(xiàn)報(bào)道,乳蔗糖可降低大鼠結(jié)腸內(nèi)TLR2表達(dá),然而,GOS能否下調(diào)AD腦內(nèi)TLR2表達(dá)尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究探討了GOS是否可抑制AD模型小鼠腦內(nèi)TLR2表達(dá)的升高,降低反應(yīng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞M1型活化,減少NF-κBp65活化和促炎因子表達(dá),從而發(fā)揮拮抗AD的作用。方法:選取5月齡APPswe/PS1dE9雙轉(zhuǎn)基因小鼠,將其分成AD模型組(AD)和AD干預(yù)組(AD+GOS),同時(shí)將同窩出生的野生型C57/BL6小鼠,分成野生對(duì)照組(WT)和野生干預(yù)組(WT+GOS)。野生干預(yù)組和AD干預(yù)組小鼠喂飼含有5%GOS的飼料,野生對(duì)照組和AD模型組小鼠喂飼普通飼料。連續(xù)干預(yù)6個(gè)月,實(shí)驗(yàn)?zāi)┢诓捎肕orris水迷宮進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)檢查,采用硫黃素T染色法檢測(cè)腦組織Aβ沉積情況,采用qRT-PCR法檢測(cè)腦皮質(zhì)GFAP(反應(yīng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物)、CD86(小膠質(zhì)細(xì)胞M1型活化標(biāo)記物)以及TLR2、IL-1βmRNA相對(duì)表達(dá)水平。采用Western Blotting法檢測(cè)腦皮質(zhì)GFAP、CD86、TLR2、NF-κBp65、IL-1β蛋白相對(duì)表達(dá)水平。采用SPSS20.0對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果:1.各組小鼠隨著訓(xùn)練天數(shù)的增加逃避潛伏期均有所減少。與野生對(duì)照組小鼠相比,AD模型組小鼠逃避潛伏期增加,第3、4天差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05,P0.01),停留時(shí)間、穿臺(tái)次數(shù)均減少(P0.05);與AD模型組小鼠相比,AD干預(yù)組避潛伏期呈縮短趨勢(shì),第3、4天差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),停留時(shí)間、穿臺(tái)次數(shù)均增加(P0.05)。2.與野生對(duì)照組小鼠相比,AD模型組及AD干預(yù)組小鼠腦組織Aβ沉積個(gè)數(shù)增多(P0.01,P0.05);與AD模型組小鼠相比,AD干預(yù)組小鼠腦組織Aβ沉積個(gè)數(shù)減少(P0.01)。3.與野生對(duì)照組小鼠相比,AD模型組小鼠腦皮質(zhì)GFAP、CD86、IL-1βmRNA及蛋白相對(duì)表達(dá)水平升高(P0.01),AD干預(yù)組小鼠腦皮質(zhì)GFAP、CD86 mRNA及蛋白相對(duì)表達(dá)水平升高(P0.05);與AD模型組小鼠相比,AD干預(yù)組小鼠腦皮質(zhì)GFAP、CD86、IL-1βmRNA及蛋白相對(duì)表達(dá)水平降低(P0.01,P0.05)。4.與野生對(duì)照組小鼠相比,AD模型組小鼠腦皮質(zhì)TLR2 mRNA及蛋白、NF-κBp65蛋白相對(duì)表達(dá)水平升高(P0.01);與AD模型組相比,AD干預(yù)組小鼠腦皮質(zhì)TLR2 mRNA及蛋白、NF-κBp65蛋白相對(duì)表達(dá)水平降低(P0.01,P0.05)。結(jié)論:GOS可下調(diào)TLR2表達(dá),降低反應(yīng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞M1型活化,減少NF-κBp65活化和IL-1β表達(dá),減輕Aβ沉積,改善APPswe/PS1dE9雙轉(zhuǎn)基因小鼠的認(rèn)知功能損傷。
【學(xué)位單位】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類(lèi)】：R749.16;R-332
【部分圖文】：

各組小鼠腦組織 Aβ 沉積情況注：標(biāo)尺為 100 μm，放大倍數(shù) 10×10。A，硫黃素 T 染色鏡下觀察結(jié)果，綠光代表 Aβ 沉積情況；B，Aβ 沉積個(gè)數(shù)分析結(jié)果。與 WT 組相比，*P<0.05，**P<0.01；與 AD 組相比，##P<0.01。3. 3 腦皮質(zhì)膠質(zhì)細(xì)胞活化及 IL-1β 表達(dá)3.3.1 腦皮質(zhì) GFAP mRNA 及蛋白表達(dá)水平與野生對(duì)照組小鼠相比，AD 模型組及 AD 干預(yù)組小鼠腦皮質(zhì) GFAP mRNA及蛋白表達(dá)水平升高（P<0.01，P<0.05）；與 AD 模型組小鼠相比，AD 干預(yù)組小鼠腦皮質(zhì) GFAP mRNA 及蛋白相對(duì)表達(dá)水平降低（P<0.01，P<0.05）。具體結(jié)果見(jiàn)圖 2。

各組小鼠腦組織 Aβ 沉積情況注：標(biāo)尺為 100 μm，放大倍數(shù) 10×10。A，硫黃素 T 染色鏡下觀察結(jié)果，綠光代表 Aβ 沉積情況；B，Aβ 沉積個(gè)數(shù)分析結(jié)果。與 WT 組相比，*P<0.05，**P<0.01；與 AD 組相比，##P<0.01。3. 3 腦皮質(zhì)膠質(zhì)細(xì)胞活化及 IL-1β 表達(dá)3.3.1 腦皮質(zhì) GFAP mRNA 及蛋白表達(dá)水平與野生對(duì)照組小鼠相比，AD 模型組及 AD 干預(yù)組小鼠腦皮質(zhì) GFAP mRNA及蛋白表達(dá)水平升高（P<0.01，P<0.05）；與 AD 模型組小鼠相比，AD 干預(yù)組小鼠腦皮質(zhì) GFAP mRNA 及蛋白相對(duì)表達(dá)水平降低（P<0.01，P<0.05）。具體結(jié)果見(jiàn)圖 2。

預(yù)組小鼠腦皮質(zhì) CD86 mRNA 及蛋白相對(duì)表達(dá)水平降低（P<0.01，P<0.05）。具體結(jié)果見(jiàn)圖 3。圖 3，各組小鼠腦皮質(zhì) CD86 mRNA 表達(dá)水平及蛋白表達(dá)水平注：與 WT 組相比，*P<0.05，**P<0.01；與 AD 組相比，#P<0.05，##P<0.01。3.3.3 腦皮質(zhì) IL-1β mRNA 及蛋白表達(dá)水平與野生對(duì)照組小鼠相比，AD 模型組小鼠腦皮質(zhì) IL-1β mRNA 及蛋白表達(dá)水平升高（P<0.01）；與 AD 模型組小鼠相比，AD 干預(yù)組小鼠腦皮質(zhì) IL-1β mRNA及蛋白表達(dá)水平降低（P <0.01，P <0.05）。具體結(jié)果見(jiàn)圖 4。
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本文編號(hào)：2836540