發(fā)布時(shí)間：2017-04-03 01:15

  本文關(guān)鍵詞：全饑餓對(duì)腦皮質(zhì)細(xì)胞凋亡及相關(guān)因子表達(dá)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的研究全饑餓狀態(tài)對(duì)大腦皮層細(xì)胞凋亡及其相關(guān)因子Bcl-2,Bax,Caspase-3的表達(dá)影響。方法成年雄性SD大鼠,健康清潔級(jí)90只,350±30g,隨機(jī)分為6組(每組15只):正常對(duì)照組(即正常進(jìn)食組),饑餓組為五組即3d組、5d組、7d組、9d組、11d組。其后又將每一組隨機(jī)分為三個(gè)亞組I、II、III組,每一個(gè)亞組5只。其中每一組I組應(yīng)用蘇木素-伊紅染色法觀測(cè)大腦皮質(zhì)區(qū)神經(jīng)細(xì)胞的形態(tài)變化,采用TUNEL法檢測(cè)凋亡細(xì)胞,然后利用圖像分析儀來(lái)計(jì)算凋亡細(xì)胞表達(dá)數(shù)和凋亡指數(shù),以此推測(cè)全饑餓狀態(tài)下大腦功能的變化。II組大鼠皮質(zhì)區(qū)Bcl-2、Bax、Caspase-3三種因子表達(dá)的信使核糖核酸及蛋白,其表達(dá)情況利用逆轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)和免疫印跡試驗(yàn)來(lái)檢測(cè)觀察,以研究急性全饑餓對(duì)大鼠腦皮質(zhì)區(qū)凋亡相關(guān)因子的影響。III組大鼠在不同饑餓時(shí)限時(shí)腦組織含水量變化利用干濕重比法來(lái)檢測(cè)觀察,以便我們了解在這種情況下腦組織是否存在脫水情況。結(jié)果1大鼠一般行為觀察饑餓3d和饑餓5d組大鼠的一般狀態(tài)良好,饑餓后期即饑餓7d、9d、11d組,大鼠的一般狀況極度變差,精神狀態(tài)較萎靡,對(duì)刺激反應(yīng)遲鈍。2大鼠重量的變化饑餓前,各組大鼠之間對(duì)其機(jī)體重量進(jìn)行兩兩對(duì)比,均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。隨著饑餓時(shí)間的增加,大鼠的體重不斷減輕。3皮質(zhì)區(qū)HE染色形態(tài)學(xué)比較結(jié)果光鏡下(×400)組織形態(tài)觀察可見:正常對(duì)照組、饑餓3d組和饑餓5d組大鼠皮質(zhì)區(qū)的細(xì)胞清晰飽滿,形態(tài)完整,分布緊密規(guī)則,細(xì)胞質(zhì)染色深,分布均勻,細(xì)胞核居中,有明顯大量的神經(jīng)纖維。隨著饑餓時(shí)間的延長(zhǎng),饑餓7d、9d、11d組大鼠皮質(zhì)區(qū)細(xì)胞排列極其稀疏紊亂,細(xì)胞線不清,細(xì)胞間隙增寬,間質(zhì)水腫疏松,神經(jīng)細(xì)胞丟失、細(xì)胞結(jié)構(gòu)不清,尼氏體減少,細(xì)胞質(zhì)染色淡,細(xì)胞壞死增多。4皮質(zhì)區(qū)細(xì)胞凋亡的檢測(cè)結(jié)果與正常對(duì)照組相比,皮質(zhì)區(qū)凋亡細(xì)胞百分率,饑餓3d組無(wú)顯著差異(P0.05);饑餓5d組稍有增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);而饑餓后期7d、9d、11d組凋亡細(xì)胞百分比增加有顯著差異(P0.01)。說(shuō)明在饑餓早期,即饑餓3d時(shí),大鼠皮質(zhì)區(qū)神經(jīng)細(xì)胞凋亡較少,饑餓5d組略有增加,而在饑餓后期,即饑餓7d、9d、11d時(shí),大鼠皮質(zhì)區(qū)凋亡細(xì)胞的數(shù)目明顯增多。5逆轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)檢測(cè)大腦皮質(zhì)區(qū)在全饑餓狀態(tài)下,三種凋亡相關(guān)因子其m RNA的表達(dá)結(jié)果與實(shí)驗(yàn)正常對(duì)照組相比,饑餓3d組Bax、Caspase-3 m RNA表達(dá)無(wú)明顯增高(P0.05),而饑餓5d、7d、9d、11d組Baxm RNA、Caspase-3 m RNA表達(dá)均顯著增加(P0.01);饑餓3d、5d、7d組Bcl-2m RNA的表達(dá)均增高(P0.05),5d組表達(dá)量最高(P0.01),9d、11d組表達(dá)降低(P0.05),11d組表達(dá)量最低(P0.01)。6免疫印跡試驗(yàn)檢測(cè)大腦皮質(zhì)區(qū)在全饑餓狀態(tài)下,三種凋亡相關(guān)因子其蛋白的表達(dá)結(jié)果與對(duì)照組相比,饑餓3d組Bax蛋白、Caspase-3蛋白表達(dá)無(wú)增加(P0.05),饑餓5d組Caspase-3蛋白表達(dá)增加(P0.05),Bax蛋白表達(dá)明顯增多(P0.01),饑餓后期組7d、9d、11d組Bax蛋白和Caspase-3蛋白表達(dá)均顯著增加(P0.01),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;饑餓3d、5d、7d組Bcl-2蛋白的表達(dá)均明顯增高(P0.01),5d組表達(dá)量最高,9d、11d組表達(dá)降低,11d組表達(dá)量最低(P0.01)。7干濕比重法各饑餓組的腦組織含水量與正常對(duì)照組相比,3d組增加不明顯(P0.05),5d組明顯增加(P0.01),饑餓后期(7d、9d、11d)組均下降(P0.01)。結(jié)論1全饑餓狀態(tài)下大鼠皮質(zhì)區(qū)神經(jīng)細(xì)胞凋亡增加從饑餓第5d開始存在。2在全饑餓狀態(tài)下,短期饑餓應(yīng)激可能有一定的腦保護(hù)作用,而長(zhǎng)期饑餓應(yīng)激引起大量皮質(zhì)細(xì)胞凋亡,導(dǎo)致腦功能受損,應(yīng)積極的預(yù)防和治療。3在全饑餓狀態(tài)下,Bcl-2、Bax、Caspase-3因子在凋亡調(diào)控中起著非常重要的作用。
【關(guān)鍵詞】：全饑餓狀態(tài) 大腦皮質(zhì) 凋亡 Bcl-2 Bax Caspase-3
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R338.25
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文縮略表10-11
• 引言11-13
• 第1章 實(shí)驗(yàn)研究13-47
• 1.1 材料與方法13-27
• 1.1.1 主要試劑13
• 1.1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器13-14
• 1.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇14
• 1.1.4 實(shí)驗(yàn)大鼠分組14-15
• 1.1.5 全饑餓大鼠模型的復(fù)制15
• 1.1.6 標(biāo)本的采集、處理及HE染色15-17
• 1.1.7 皮質(zhì)區(qū)凋亡神經(jīng)細(xì)胞的檢測(cè)17-19
• 1.1.8 RT-PCR法檢測(cè)皮質(zhì)區(qū)Bcl-2、Bax、Caspase-3 三種因子mRNA的表達(dá)情況19-21
• 1.1.9 Western blot方法檢測(cè)皮質(zhì)區(qū)Bcl-2、Bax、Caspase-3 三種因子蛋白的表達(dá)情況21-26
• 1.1.10 干濕比重法26-27
• 1.1.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析27
• 1.2 結(jié)果27-36
• 1.2.1 大鼠一般行為觀察及體重變化27-28
• 1.2.2 皮質(zhì)區(qū)HE染色形態(tài)學(xué)比較結(jié)果28-30
• 1.2.3 各組大鼠皮質(zhì)區(qū)神經(jīng)細(xì)胞凋亡情況30-32
• 1.2.4 大腦皮質(zhì)區(qū)在全饑餓狀態(tài)下Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA表達(dá)結(jié)果32-34
• 1.2.5 大腦皮質(zhì)區(qū)在全饑餓狀態(tài)下Bcl-2、Bax、Caspase-3 蛋白表達(dá)結(jié)果34-36
• 1.2.6 大鼠腦組織含水量的變化36
• 1.3 討論36-42
• 1.3.1 全饑餓大鼠動(dòng)物模型的制備37
• 1.3.2 全饑餓狀態(tài)對(duì)大鼠一般狀況及體重的影響37-38
• 1.3.3 全饑餓狀態(tài)對(duì)大鼠皮質(zhì)區(qū)神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響38-39
• 1.3.4 全饑餓狀態(tài)下Bcl-2、Bax、Caspase-3 三種因子在皮質(zhì)凋亡中的調(diào)控作用39-42
• 1.3.5 全饑餓狀態(tài)對(duì)大鼠腦組織重量的影響42
• 1.4 小結(jié)42
• 參考文獻(xiàn)42-47
• 第2章 綜述47-62
• 2.1 凋亡概述47-48
• 2.2 細(xì)胞凋亡信號(hào)傳導(dǎo)途徑48-49
• 2.2.1 死亡受體信號(hào)通路48
• 2.2.2 線粒體途徑48-49
• 2.2.3 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)通路49
• 2.3 Bcl-2 蛋白家族與細(xì)胞凋亡49-52
• 2.3.1 Bcl-2 蛋白家族的分類、結(jié)構(gòu)與功能49-51
• 2.3.2 Bcl-2 蛋白家族在細(xì)胞凋亡中的調(diào)控機(jī)制51-52
• 2.4 Caspase蛋白與細(xì)胞凋亡52-53
• 2.4.1 Caspase蛋白家族的分類、結(jié)構(gòu)與功能52-53
• 2.4.2 Caspase-3 在細(xì)胞凋亡中的作用機(jī)制53
• 2.5 Bcl-2、Bax、Caspase-3 三者在細(xì)胞凋亡中的相互作用關(guān)系53-55
• 2.5.1 Bcl-2、Bax蛋白間的相互作用關(guān)系53-54
• 2.5.2 Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)能夠作為Caspase-3 的上游調(diào)控因素54-55
• 2.5.3 Caspase-3 亦能夠作為bcl-2 的上游調(diào)控因素55
• 2.6 小結(jié)55
• 參考文獻(xiàn)55-62
• 結(jié)論62-63
• 致謝63-64
• 導(dǎo)師簡(jiǎn)介64-65
• 作者簡(jiǎn)介65-66
• 學(xué)位論文數(shù)據(jù)集66

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 方敏,王曉東;細(xì)胞凋亡的線粒體通路[J];北京大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2002年01期

2 謝靜濤,唐晉;饑餓狀態(tài)對(duì)注意力的影響[J];湖南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2004年03期

  本文關(guān)鍵詞：全饑餓對(duì)腦皮質(zhì)細(xì)胞凋亡及相關(guān)因子表達(dá)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：283481