背景:成體神經(jīng)發(fā)生是通過再生治療人類中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)疾病的重要過程,它通過招募成體神經(jīng)干細(xì)胞(NSCs)這一過程來完成。NSCs具有產(chǎn)生星形膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)元及少突膠質(zhì)細(xì)胞的能力。為了弄清參與成體神經(jīng)發(fā)生過程中的調(diào)控因素,對于臨床治療應(yīng)用具有重要的啟發(fā)作用。這里我們報(bào)道BAF45D和GFAP在成年脊髓中央管(CC)中的共表達(dá),而且通過定量數(shù)據(jù)分析,發(fā)現(xiàn)了BAF45D優(yōu)先表達(dá)于成體中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的神經(jīng)元。此外,PAX6是神經(jīng)外胚層分化的一項(xiàng)決定因素,而P19細(xì)胞在神經(jīng)外胚層分化過程中,BAF45D參與PAX6的表達(dá)�？偟膩碚f,我們的研究可能為BAF45D在成體神經(jīng)元區(qū)的表達(dá)和對早期神經(jīng)發(fā)展的作用提供一個新的視野。目的:主要研究方面:1):BAF45D在成體神經(jīng)源區(qū)的表達(dá);2):BAF45D和NEUN、BAF45D和GFAP、BAF45D和BETA-III-tubulin在成鼠脊髓中的共表達(dá);3):探討B(tài)AF45D蛋白,在維甲酸(RA)體外誘導(dǎo)P19胚胎癌細(xì)胞向神經(jīng)元樣細(xì)胞分化過程中的作用及其變化;方法:1):選用C57/BL6成年小鼠(10-12周,體重25-30g)制備脊髓橫斷面切片,并采用免疫組織化學(xué)技術(shù)(IHC)和免疫組織熒光技術(shù)(IF)檢測BAF45D、NEUN、GFAP、BETA-III-tubulin蛋白在脊髓中的表達(dá);2):選用維甲酸(RA 1μM)誘導(dǎo)鼠P19細(xì)胞向神經(jīng)方向的分化,并且利用免疫印跡法(IB)技術(shù)檢測BAF45D、OCT4、NESTIN和PAX6的表達(dá)情況;3):制備成鼠脊髓和海馬組織的蛋白懸液,并運(yùn)用免疫印跡法(IB)檢測BAF45D、NEUN、GFAP、GAPDH的表達(dá);結(jié)果:1):BAF45D在成鼠脊髓的非室管膜細(xì)胞核中,和中央管室管膜細(xì)胞核中均可以陽性表達(dá);2):GFAP在細(xì)胞突起中的強(qiáng)表達(dá),且BAF45D和GFAP可共表達(dá)在同一細(xì)胞中;3):BAF45D可在NEUN、BBETA-III-tubulin標(biāo)志的神經(jīng)元中的表達(dá),且BETA-III-tubulin和BAF45D共表達(dá)在細(xì)胞質(zhì)中;4):GFAP同時在脊髓灰質(zhì)和白質(zhì)中表達(dá),而BAF45D和BETA-III-tubulin主要表達(dá)在灰質(zhì)中;5):在RA誘導(dǎo)P19細(xì)胞的第5天時,光鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài),大部分都伸出突起樣結(jié)構(gòu)。而無RA誘導(dǎo)的P19細(xì)胞,維持原先細(xì)胞形態(tài);6):在RA的誘導(dǎo)過程中,神經(jīng)元特異性標(biāo)志物Nestin隨著誘導(dǎo)的時間延長,表達(dá)量也逐漸增加,說明了RA可以有效刺激P19細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞方向的分化;7):在RA誘導(dǎo)P19神經(jīng)分化的過程中,Pax6在早期呈現(xiàn)出逐漸增加的趨勢,在第四天達(dá)到高峰狀態(tài),隨后其表達(dá)量又逐漸降低;OCT4的表達(dá)水平逐漸降低,可呈時間依賴性;BAF45D的表達(dá)量在逐漸增加,可呈時間依賴性;8):GFAP在脊髓中的表達(dá)明顯多于海馬;BAF45D和NEUN在海馬中的表達(dá)稍多于脊髓;結(jié)論:1):BAF45D在成年鼠脊髓的中央管室管膜細(xì)胞中表達(dá);2):BAF45D優(yōu)先表達(dá)在成年鼠脊髓中的成熟神經(jīng)元;3):維甲酸(RA)能成功的誘導(dǎo)P19細(xì)胞向神經(jīng)方向的分化,而且分化過程中PAX6的產(chǎn)生與BAF45D是有一定聯(lián)系的;
【學(xué)位單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R338
【部分圖文】：

圖 3.BAF45D 在成鼠脊髓的星形膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元中的表達(dá)。A-D，BAF45D 在 GFAP標(biāo)志的星形膠質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá)。長箭頭表示 BAF45D 標(biāo)志陽性的細(xì)胞（A，C，D）。而短箭頭表示細(xì)胞核弱表達(dá)或未表達(dá) BAF45D（A，C，D），三角箭頭示 GFAP 在細(xì)胞突起中的強(qiáng)表達(dá)（B，D）。（E-H）BAF45D 在 NEUN 標(biāo)志的神經(jīng)元中的表達(dá)。長箭頭表示 BAF45D 標(biāo)志陽性的細(xì)胞 E-H，同時也表示 NEUN 標(biāo)志陽性的細(xì)胞（F，H）。三角箭頭表示 NEUN 在細(xì)胞質(zhì)中的表達(dá)（F，H）。I-L，BAF45D 在 beta-III-tubulin標(biāo)志的神經(jīng)元中的表達(dá)。長箭頭表示 BAF45D 標(biāo)志陽性的細(xì)胞核（I，L）。三角箭頭（J，L）和短箭頭（I-L）表示 beta-III-tubulin 和 BAF45D 共表達(dá)在細(xì)胞質(zhì)中。標(biāo)尺=10μm。Figure 3 Expression of BAF45D in the neurons and astrocytes of the adult spinal cord.(A D) The expression of BAF45D in the GFAP-positive astrocytes. The arrowsindicate the BAF45D-positive cells (A,C,D). While the arrowheads indicate the cell

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文AP in the cell processes (B,D). (E H) The expressve neurons. The arrows indicate the BAF45D-poalso positive for NEUN (F,H). The triangles indicateell cytoplasm (B,D). (I L) The expression of ositive neurons. The arrows indicate the BAF45D-pion of beta-III-tubulin, which is expressed in the cyplasmic BAF45D was shown (I L, arrowheads). Ba

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文3.3 BAF45D 參與 P19 細(xì)胞向神經(jīng)方向分化在 RA 誘導(dǎo) P19 細(xì)胞的第 5 天，光鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，大部分伸出突起樣結(jié)構(gòu)（圖 5B），而無 RA 誘導(dǎo)的 P19 細(xì)胞，維持原先細(xì)胞形態(tài)（圖 5A）。在 RA 的誘導(dǎo)過程中，神經(jīng)分化特異性標(biāo)志物 Nestin 會隨著誘導(dǎo)時間的延長，表達(dá)量也逐漸增加。說明 RA 可以有效刺激 P19 細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞方向的分化，據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，在 RA 誘導(dǎo) P19 神經(jīng)分化的過程中，Pax6 在早期會呈現(xiàn)逐漸增加的趨勢，在第四天達(dá)到高峰狀態(tài)，隨后其表達(dá)量又逐漸降低，而 BAF45D 的表達(dá)量逐漸增加，并呈時間依賴性。以上結(jié)果表明：BAF45D 可能參與維甲酸誘導(dǎo) PAX6 蛋白的表達(dá)。

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本文編號：2829855