【摘要】：研究背景多年以來神經(jīng)損傷后的修復(fù)一直是醫(yī)學(xué)難題,迄今為止,神經(jīng)的自體移植仍然是神經(jīng)斷端治療的“金標(biāo)準(zhǔn)”,但是此種方式存在供體不足的缺點(diǎn)。為此,人們尋找各種替代材料,如殼聚糖、蠶絲蛋白、纖維導(dǎo)管等,這些材料對于神經(jīng)功能的修復(fù),雖然取得一定的進(jìn)展,但是仍然不能令人滿意。神經(jīng)損傷后包裹軸突的髓鞘細(xì)胞-雪旺細(xì)胞起著主要的修復(fù)作用,對軸突的再生修復(fù)起著支持和引導(dǎo)的作用,并能分泌多種細(xì)胞因子營養(yǎng)支持軸突的再生并能吞噬細(xì)胞炎癥過程中產(chǎn)生的細(xì)胞碎片。我們前期研究發(fā)現(xiàn)間充質(zhì)干細(xì)胞能修復(fù)SD大鼠坐骨神經(jīng)的壓榨傷,具有使神經(jīng)功能得到改善的作用。胚胎干細(xì)胞是全能干細(xì)胞,具有向各個(gè)方向分化的潛能,經(jīng)適當(dāng)?shù)奈h(huán)境誘導(dǎo)可以向特定的細(xì)胞群分化,具有廣闊的臨床應(yīng)用前景和價(jià)值,同時(shí)人胚胎干細(xì)胞及其誘導(dǎo)產(chǎn)物,在進(jìn)一步的臨床應(yīng)用中避免了異種移植帶來的免疫排斥反應(yīng),人胚胎干細(xì)胞源神經(jīng)干細(xì)胞在神經(jīng)損傷的修復(fù)中可能提供各種營養(yǎng)因子和信號幫助修復(fù),是潛在的神經(jīng)修復(fù)組織功程材料。研究目的探討人胚胎干細(xì)胞源神經(jīng)干細(xì)胞的誘導(dǎo)分化及神經(jīng)干細(xì)胞條件培養(yǎng)液(human embryonic stem cell-derived neural stem cells conditioned medium,h ESCN-CM)對大鼠坐骨神經(jīng)雪旺細(xì)胞的生物學(xué)作用,為周圍神經(jīng)損傷修復(fù)提供新的思路。研究方法(1)人胚胎干細(xì)胞源神經(jīng)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化及神經(jīng)球培養(yǎng);(2)流式細(xì)胞術(shù)、免疫熒光鑒定神經(jīng)干細(xì)胞;(3)SD大鼠原代雪旺細(xì)胞的分離純化;(4)h ESCN-CM制備;(5)CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測雪旺細(xì)胞的增殖;(6)劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell實(shí)驗(yàn)檢測雪旺細(xì)胞的遷移;(7)RT-q PCR檢測雪旺細(xì)胞的基因表達(dá)。研究結(jié)果(1)人胚胎干細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)分化后,呈現(xiàn)典型的玫瑰花環(huán)結(jié)構(gòu),人胚胎干細(xì)胞源神經(jīng)干細(xì)胞膜表面不表達(dá)Nestin、βⅢTubulin,細(xì)胞質(zhì)內(nèi)表達(dá)Nestin、βⅢTubulin,雙陽性細(xì)胞高達(dá)98.14%。(2)大鼠雪旺細(xì)胞經(jīng)純化后高表達(dá)S100、MBP陽性率分別為99.0%和94.6%。(3)50%h ESCN-CM能促進(jìn)雪旺細(xì)胞的增殖,100%h ESCN-CM為抑制增殖。50%h ESCN-CM和100%h ESCN-CM均能促進(jìn)RSC96的增殖。(4)h ESCN-CM能促進(jìn)雪旺細(xì)胞的遷移。(5)在50%h ESCN-CM作用下4 h,NT3、VEGF、b FGF、NGF的表達(dá)增高,IGF-1變化不明顯。研究結(jié)論(1)體外成功誘導(dǎo)人胚胎干細(xì)胞分化為神經(jīng)干細(xì)胞。(2)h ESCN-CM在適當(dāng)濃度可以促進(jìn)雪旺細(xì)胞的增殖和遷移。(3)h ESCN-CM在適當(dāng)濃度能促進(jìn)雪旺細(xì)胞NT3、VEGF、b FGF、NGF基因表達(dá)。
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R329.2
【圖文】：

神經(jīng)的解剖結(jié)構(gòu)

技術(shù)路線圖

神經(jīng)干貼壁細(xì)胞

【參考文獻(xiàn)】

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1 徐瑞霞;陳曦;陳靜海;韓瑜;韓變梅;;大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)液促進(jìn)心肌細(xì)胞肥大[J];細(xì)胞生物學(xué)雜志;2007年04期

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1 陳湘;人胚胎干細(xì)胞的神經(jīng)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化及神經(jīng)干細(xì)胞分泌的微囊泡對坐骨神經(jīng)缺損性損傷的修復(fù)作用研究[D];江蘇大學(xué);2018年

本文編號：2800917