【摘要】：[目的]利用新西蘭雄性白兔制備腎移植模型,采用經(jīng)腎動脈順行持續(xù)低溫灌注與經(jīng)腎靜脈逆行持續(xù)低溫灌注兩種不同灌洗方法保存家兔供腎并行同種異體腎移植術(shù),觀察腎移植術(shù)后新西蘭白兔血清肌酐(Serum cr eat in,Scr)及尿量、移植腎組織病理、移植腎組織中表皮生長因子(epidermal growth factor,EGF)及髓過氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)的表達(dá)水平,初步探討不同灌注方法對供腎質(zhì)量的影響,為臨床實踐中供體器官保存和提高腎動脈畸形等邊緣供腎的利用率提供新的思路。[方法]選取成年健康雄性新西蘭白兔作為腎移植供體、受者,體重均為2.0-3.0kg。將60只新西蘭白:兔按1-60編號,采用完全隨機設(shè)計(隨機數(shù)字表法)將其分為2組,順行持續(xù)低溫灌注組(A組)和逆行持續(xù)低溫灌注組(B組)每組各30只,再于A、B兩組組內(nèi)將白兔隨機分為供體與受體兩組,每組15只。將A、B兩組供體熱缺血15min左側(cè)腎臟按不同組的方法灌注2小時后移植到受體原位,移植完成后去除受體右腎。術(shù)后予以環(huán)孢素A抗排斥治療,比較順、逆行2種不同灌注組受體新西蘭白兔術(shù)后第一天、第三天、第五天的血清肌酐水平及尿量情況,觀察術(shù)后第五天時移植腎組織病理、移植腎組織EGF和MPO的表達(dá)情況。[結(jié)果]1、血肌酐變化A組(順行灌注組)術(shù)后第一天、第三天、第五天血清肌酐值分別為(323.89±19.15)umol/L、(203.34±14.02)umol/L、(121.51±8.76)umol/L;B組(逆行灌注組)術(shù)后第一天、第三天、第五天血清肌酐值分別為(335.11±18.62)umol/L、(212.03±9.66)umol/L、(125.94±7.35)umol/L。兩者相比較,逆行灌注組術(shù)后血肌酐值與順行灌注組術(shù)后血肌酐值對比無明顯差別,P0.05,差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義。2、尿量變化A組(順行灌注組)術(shù)后第一天、第三天、第五天尿量分別為(96.36±9.36)ml、(129.91±10.72)ml、(168.40±12.34)ml;B組(逆行灌注組)術(shù)后第一天、第三天、第五天尿量分別為(91.89±8.30)ml、(123.78±10.79)ml、(158.23±16.46)ml。兩者相比較,逆行灌注組術(shù)后尿量與順行灌注組術(shù)后尿量對比無明顯差別,P0.05,差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義。3、移植腎組織病理(HE 染色,hematoxylin and eosin staining)兩組移植腎病理切片HE染色檢查結(jié)果顯示術(shù)后第五天的病理改變,A組(順行灌注組)和B組(逆行灌注組)移植腎的腎小球和腎小管結(jié)構(gòu)接近正常,間質(zhì)水腫和炎癥細(xì)胞的浸潤比較少,逆行灌注組術(shù)后組織結(jié)構(gòu)與順行灌注組術(shù)后組織結(jié)構(gòu)對比無明顯差別,P0.05,差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義。4、移植腎組織免疫組化檢測EGF表達(dá)情況。A組(順行灌注組)術(shù)后第五天EGF陽性表達(dá)率(23.27±4.48)%,B組(逆行灌注組)術(shù)后第五天EGF陽性表達(dá)率(20.70±3.34)%,兩者相比較,逆行灌注組術(shù)后EGF表達(dá)情況與順行灌注組術(shù)后EGF表達(dá)情況對比無明顯差別,P0.05,差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義。5、移植腎MPO檢測A組(順行灌注組)術(shù)后第五天MPO表達(dá)(0.474±0.07)U/g,B組(逆行灌注組)術(shù)后第五天MPO表達(dá)(0.425±0.08)U/g,兩者相比較,逆行灌注組術(shù)后MPO表達(dá)情況與順行灌注組術(shù)后MPO表達(dá)情況對比無明顯差別,P0.05,差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義。[結(jié)論]逆行灌注法同順行灌注法一樣有保護移植腎功能的作用。尤其對因腎動脈畸形、狹窄等原因所致的供腎灌注不良,經(jīng)腎動脈無法充分灌注時,采取經(jīng)腎靜脈的逆行灌注可作為有效的補救灌注措施。
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R699.2;R-332
【圖文】：

決定是否需要繼續(xù)推注（推注速度過快或者過量都易指致死亡，寧少勿多，術(shù)中可以研腹腔追加少量麻醉藥物），待麻醉效果滿意后，將白兔仰臥于操作臺上，四肢用兔肢固定夾固定，頭用兔頭固定夾固定，手術(shù)區(qū)領(lǐng)用電動剃刀剔除毛發(fā)，清洗后消毒，最后鋪上無菌洞巾，所用手術(shù)器低均所 70%酒精中浸泡消毒。2.2.3.2 移植供腎缺血模型沿腹部正中線縱行切開皮膚、肌肉等，打開腹腔，用皮膚拉鉤拉開兩側(cè)皮膚和肌肉，無菌濕紗布研右側(cè)推開胃腸等腹腔臟器，暴露左側(cè)腎臟及腹腔血管，可見左側(cè)腎臟位于腹膜后。用無齒鑷、玻璃分針及濕棉簽仔細(xì)分離腎周，游離左側(cè)腎臟動脈、靜脈至起始部，7-0 細(xì)絲線分專所起始部結(jié)扎腎動靜脈，并記錄缺血時間。無菌濕鹽水紗布覆蓋腹腔臟器，如圖 2.2-2.3 所示，可見腎臟顏色由鮮蘇色逐漸變暗黑色，由此模擬臨床供腎獲取前腎臟所需經(jīng)歷的熱缺血過程。

決定是否需要繼續(xù)推注（推注速度過快或者過量都易指致死亡，寧少勿多，術(shù)中可以研腹腔追加少量麻醉藥物），待麻醉效果滿意后，將白兔仰臥于操作臺上，四肢用兔肢固定夾固定，頭用兔頭固定夾固定，手術(shù)區(qū)領(lǐng)用電動剃刀剔除毛發(fā)，清洗后消毒，最后鋪上無菌洞巾，所用手術(shù)器低均所 70%酒精中浸泡消毒。2.2.3.2 移植供腎缺血模型沿腹部正中線縱行切開皮膚、肌肉等，打開腹腔，用皮膚拉鉤拉開兩側(cè)皮膚和肌肉，無菌濕紗布研右側(cè)推開胃腸等腹腔臟器，暴露左側(cè)腎臟及腹腔血管，可見左側(cè)腎臟位于腹膜后。用無齒鑷、玻璃分針及濕棉簽仔細(xì)分離腎周，游離左側(cè)腎臟動脈、靜脈至起始部，7-0 細(xì)絲線分專所起始部結(jié)扎腎動靜脈，并記錄缺血時間。無菌濕鹽水紗布覆蓋腹腔臟器，如圖 2.2-2.3 所示，可見腎臟顏色由鮮蘇色逐漸變暗黑色，由此模擬臨床供腎獲取前腎臟所需經(jīng)歷的熱缺血過程。

注射器及時抽吸干凈，灌注時間控制所 2 小時。灌注結(jié)束后，修剪左側(cè)輸尿管周圍結(jié)締組織，預(yù)留部分結(jié)締組織以保證血供,研下游離出輸尿管直至膀胱處并剪斷。拔出腎動脈（或腎靜脈）留置針，并將腎動靜脈所起始處剪斷，靜脈切口邊緣用 9-0 尼龍線一針以示標(biāo)記。將左腎連同輸尿管整塊卸下并放入 0-4℃離體腎保存液中。圖 2.4 順行灌注模型（灌注 5min 后） 圖 2.5 逆行灌注模型（灌注 5min 后）

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本文編號：2796391