【摘要】：人胚肺二倍體細(xì)胞是病毒性疫苗生產(chǎn)的重要宿主細(xì)胞之一,20世紀(jì)60年代至今,使用人胚肺二倍體細(xì)胞制備的疫苗在世界各地使用,如脊髓灰質(zhì)炎病毒疫苗、風(fēng)疹病毒疫苗、麻疹病毒疫苗、腮腺炎病毒疫苗、水痘病毒疫苗及甲肝病毒疫苗等。長期使用證明人胚肺二倍體細(xì)胞生產(chǎn)的疫苗是安全有效的,成為WHO推薦的病毒疫苗生產(chǎn)最安全的細(xì)胞。目前全球應(yīng)用較多的是MRC-5和WI-38人二倍體細(xì)胞,雖然有很多企業(yè)及團(tuán)體在開展人二倍體細(xì)胞的研究,但由于嚴(yán)格的倫理審查、復(fù)雜的遺傳背景資料調(diào)查,使新型人胚肺二倍體細(xì)胞的研制緩慢。同時(shí),人胚肺二倍體細(xì)胞有限的生命周期及有限使用代次的特性,使得人胚肺二倍體細(xì)胞資源彌足珍貴�，F(xiàn)在使用的WI-38和MRC-5的供應(yīng)逐漸減少,在我國使用較多的MRC-5,也存在生產(chǎn)細(xì)胞代次高及外部環(huán)境兩個限制因素。因此,新的人胚肺二倍體細(xì)胞的研制已迫在眉睫。國內(nèi)自建的KMB-17和2BS人二倍體細(xì)胞僅在自建單位及少數(shù)單位使用,由于體制原因,難以獲得兩株的細(xì)胞的使用權(quán)�；谌伺叻味扼w細(xì)胞基質(zhì)的優(yōu)越性和資源的珍貴性,本研究于2008年至今開展了全新的人胚胎二倍體細(xì)胞株的研制,成功篩選到一株合格的人胚肺二倍體細(xì)胞,命名為Walvax-2細(xì)胞株。該細(xì)胞株來源于3月齡流產(chǎn)女嬰的肺部組織,經(jīng)無菌分離及傳代培養(yǎng)建立了冷凍保存的完整的三級細(xì)胞庫,三級細(xì)胞庫經(jīng)細(xì)胞鑒別試驗(yàn)、無菌檢查、支原體檢查、細(xì)胞內(nèi)、外源病毒因子檢查、逆轉(zhuǎn)錄病毒檢查、人源、牛源和豬源病毒等全面檢定,質(zhì)量合格,未檢出各類微生物污染,且成瘤性檢查結(jié)果為陰性,未發(fā)現(xiàn)結(jié)瘤馱,是一株優(yōu)質(zhì)細(xì)胞株。Walvax-2細(xì)胞株經(jīng)用于多種病毒的適應(yīng)性研究,以MRC-5細(xì)胞作為對照,開展了狂犬病毒株(CTN-1V株/PV-2061株)、水痘病毒株(Oka株)、甲肝病毒株(YN5株)的傳代適應(yīng)工作。結(jié)果顯示,兩株狂犬病毒在Walvax-2細(xì)胞上病毒滴度均獲得有效增長,狂犬病毒CTN-1V株從第1代病毒滴度為4.84 log FFU/ml,傳至第10代上升到8.141ogFFU/ml�？袢《綪V-2061株第1代病毒滴度為4.44 log FFU/ml,傳至第10代達(dá)到8.02 log FFU/ml,而對照MRC-5細(xì)胞適應(yīng)的病毒滴度表現(xiàn)為：CTN-1V株傳至第10代為7.41 log FFU/ml, PV-2061株傳至第10代為7.11 log FFU/ml。相同代次病毒滴度比較,Walvax-2細(xì)胞獲得的病毒滴度均高于MRC-5細(xì)胞,Walvax-2和MRC-5細(xì)胞適應(yīng)情況有明顯的差異(P0.05)； Oka株(使用時(shí)毒株為32代)在Walvax-2細(xì)胞上進(jìn)行病毒傳代,病毒滴度平均值第1次傳代就達(dá)到6.28 log PFU/ml,至Oka株傳到41代時(shí),最高病毒滴度達(dá)到6.66 log PFU/ml,而在MRC-5細(xì)胞上傳代,最高滴度小于6.0 log PFU/ml�？傮w適應(yīng)情況有顯著差異(P0.05)； YN5株(使用時(shí)毒株代次為23代)在Walvax-2細(xì)胞上進(jìn)行病毒傳代,病毒滴度第1次傳代達(dá)到7.32 logCCID50/ml,連續(xù)傳代至31代,病毒滴度上升至7.65 log CCID50/ml。在Walvax-2細(xì)胞上總體情況較MRC-5細(xì)胞7.0-7.36 log CCID50/ml較高。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明3種病毒均對Walvax-2人胚肺二倍體細(xì)胞株表現(xiàn)了良好的適應(yīng)性,適應(yīng)性病毒培養(yǎng)后滴度均高于MRC-5細(xì)胞,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。Walvax-2作為一株新的人胚肺二倍體細(xì)胞株,對病毒有較好易感性,有希望成為現(xiàn)用二倍體細(xì)胞的替代者。
【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R321;Q813

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本文編號：2795454