【摘要】：目的:探討靜脈注射鏈脲佐菌素(streptozotocin,STZ)建立巴馬小型豬糖尿病心肌病(diabetic cardiomyopathy,DCM)模型,確定最佳造模方法,研究構(gòu)建巴馬小型豬糖尿病心肌病模型的代謝特點(diǎn)及心肌病理組織學(xué)變化,為今后糖尿病心肌病更廣泛領(lǐng)域的研究提供合適的動(dòng)物模型。方法:實(shí)驗(yàn)一:巴馬小型豬DCM最佳造模方法的確立及鑒定:選取4-5月齡、體質(zhì)量為19-25kg的健康雄性廣西巴馬小型豬12頭,一日三次普通飼料喂養(yǎng),隨機(jī)分為兩組:正常對(duì)照組(n=6只);DCM模型組(n=6只)。DCM模型組空腹12 h后,一次性耳緣靜脈注射STZ 150mg/kg。觀(guān)察兩組小型豬一般狀況,記錄造模前及造模后體重變化及空腹血糖(fasting plasma glucose,FPG)水平。造模前、造模后6月末及10月末,前腔靜脈抽血測(cè)定丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferase,AST)、肌酐(creatinine,Cr)和血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)濃度,造模后6月選取正常對(duì)照組及DCM模型組各一頭,行胰腺及心肌組織進(jìn)行HE染色、胰島β細(xì)胞免疫組化染色,造模后10月末全部處死取材,取兩組小型豬心肌組織進(jìn)行HE及MASSON染色。實(shí)驗(yàn)二:巴馬小型豬DCM可復(fù)制性及特征研究:選取4-5月齡的健康雄性廣西巴馬小型豬10頭,隨機(jī)分為2組:正常對(duì)照組(n=5),DCM模型組(n=5)。DCM模型組空腹12 h后,按照實(shí)驗(yàn)一的造模方法進(jìn)行造模。測(cè)定并記錄兩組小型豬造模前基本情況及生化指標(biāo),造模后10月末兩組小型豬前腔靜脈抽血后全部處死取材,檢測(cè)記錄生化指標(biāo),應(yīng)用試劑盒檢測(cè)小型豬血清氧化應(yīng)激指標(biāo):丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(Orgotein Superoxide Dismutase,SOD)、還原型谷胱甘肽(glutathione peroxidase,GSH-PX);Western blot法檢測(cè)小型豬心肌組織NF-KB p65、BcL-2、Bax、TGFβ1表達(dá)。造模后10月末兩組小型豬心肌取材后行電鏡檢測(cè)。結(jié)果:實(shí)驗(yàn)一:(1)DCM模型組小型豬均成模,表現(xiàn)出典型的“三多一少”的癥狀,無(wú)死亡及感染。(2)自造模后3天開(kāi)始,與對(duì)照組比較,DCM模型組FPG水平明顯升高并一直維持在較高狀態(tài)(P(27)0.01);(3)小型豬造模后6月末及10月末,正常對(duì)照組體重持續(xù)增長(zhǎng),而DCM模型組小型豬體重漲幅并不明顯,與DCM模型組比較有差異(P(27)0.01)。(4)STZ造模后6月末,兩組小型豬ALT、AST、BUN、Cr水平比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),STZ造模后10月末,與正常對(duì)照組比較,DCM模型組AST、BUN、Cr水平明顯升高(P0.05,P0.01)。(5)造模后6月末,兩組小型豬胰腺及心肌組織HE染色鏡下結(jié)果顯示:DCM模型組可見(jiàn)胰島細(xì)胞明顯減少、胰島細(xì)胞分布紊亂、萎縮,空泡變性等病理表現(xiàn)。胰島β細(xì)胞免疫組化染色結(jié)果顯示:DCM模型組可見(jiàn)散在數(shù)個(gè)胰島細(xì)胞團(tuán),細(xì)胞排列紊亂。心肌組織HE染色結(jié)果示:肌纖維排列整齊,分布比較均勻。(6)造模后10月末取心肌組織行HE染色結(jié)果顯示:DCM模型組小型豬心肌細(xì)胞存在不同程度的變性(如空泡變性,水變性等)、壞死及凋亡,局部可見(jiàn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。MASSON染色結(jié)果顯示:心肌細(xì)胞出現(xiàn)水腫、體積變大、腫脹,溶解等現(xiàn)象,纖維化較嚴(yán)重,整體結(jié)構(gòu)極其紊亂,不規(guī)則。實(shí)驗(yàn)二:(1)DCM模型組4只成模,1只死亡;(2)造模后10月末,與正常對(duì)照組小型豬相比,DCM模型組小型豬FPG及ALT水平明顯升高(P0.05,P0.01);(3)試劑盒檢測(cè)血清氧化應(yīng)激指標(biāo)結(jié)果提示:與正常對(duì)照組比較,DCM模型組小型豬MDA含量明顯升高,SOD和GSH-PX活性明顯下降(P0.01);(4)與正常對(duì)照組比較,DCM模型組心肌組織NFKB p65、BAX、TGFβ1蛋白表達(dá)水平明顯升高,BCL-2蛋白表達(dá)水平明顯降低(P0.05,P0.01)。(5)造模后10月末取心肌組織電鏡結(jié)果顯示:心肌組織可見(jiàn)肌原纖維排列較紊亂、肌原纖維間隙線(xiàn)粒體數(shù)量明顯減少,心肌組織可見(jiàn)大量空泡變性線(xiàn)粒體。結(jié)論:采用大劑量STZ(150mg/kg)一次性耳緣靜脈注射10月后可以成功構(gòu)建巴馬小型豬DCM模型,模型重復(fù)性及穩(wěn)定性好,DCM模型組小型豬存在明顯糖代謝紊亂及氧化損傷,且DCM模型組心肌組織存在炎癥反應(yīng)、心肌細(xì)胞凋亡和纖維化表現(xiàn)。
【學(xué)位授予單位】：桂林醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R587.2;R542.2;R-332
【圖文】：

ure 1 Comparison of body weight between two groups of miniature pig（ x s）（(Note: compared with the control group, P<0.01)兩組小型豬空腹血糖（FPG）比較STZ 造模后第三天開(kāi)始，與正常對(duì)照組比較，DCM 模型組小型豬的顯升高（P 0.01），詳見(jiàn)圖 2。

圖 3 兩組小型豬生化指標(biāo)比較（x s）（注：與對(duì)照組比較， P<0.01， P<0.05）Figure3 Comparison of biochemical indicators of two groups of miniature pig(Note: compared with the control group, P<0.01， P<0.05)2.5 兩組小型豬 6 月末胰腺組織 HE 染色結(jié)果造模后 6 個(gè)月末，選正常對(duì)照組及 DCM 模型組各 1 只小型豬禁食 12 小時(shí)后行胰腺組織 HE 染色，模型組鏡下胰島形態(tài)萎縮，邊緣不規(guī)整，細(xì)胞排列紊亂，胰島及胰島內(nèi)細(xì)胞數(shù)目減少、細(xì)胞核形狀不規(guī)則（圖 4B）。

圖 8 兩組小型豬生化指標(biāo)比較（x s）（注：與對(duì)照組比較， P<0.01， P<0.05）gure 8 Comparison of biochemical indicators between two groups of small pigs（x s）(Note: compared with the control group, P<0.01， P<0.05)兩組小型豬 10 月末血清 MDA、SOD、GSH-PX 指標(biāo)比較試劑盒檢測(cè)血清氧化應(yīng)激指標(biāo)：丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、型谷胱甘肽(GSH-PX)。結(jié)果提示：與正常對(duì)照組比較，DCM 模型組 MD明顯升高，SOD 和 GSH-PX 活性明顯下降（P＜0.01），詳見(jiàn)圖 9。

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2789588