本文關(guān)鍵詞：不同抗原在小鼠脾臟和胸腺內(nèi)誘導(dǎo)的免疫效應(yīng)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景及目的胸腺是哺乳動物的中樞免疫器官,骨髓來源的前T淋巴細(xì)胞在此發(fā)育、分化和成熟,然后遷移到外周免疫器官參與免疫應(yīng)答,胸腺為T淋巴細(xì)胞的發(fā)育過程提供了必要的微環(huán)境,經(jīng)典的免疫學(xué)理論認(rèn)為,T細(xì)胞在發(fā)育的過程中會與表達(dá)自身MHC分子的細(xì)胞相互作用,經(jīng)歷陽性選擇和陰性選擇篩選出對外界抗原免疫應(yīng)答而對自身抗原免疫耐受的成熟T淋巴細(xì)胞。同時根據(jù)中樞耐受的誘導(dǎo)理論,T淋巴細(xì)胞在發(fā)育成熟的過程中,一旦接觸到同種異基因抗原就會誘導(dǎo)出對該抗原免疫耐受。由于血胸屏障的存在,血液中的大分子物質(zhì)包括外界抗原不能夠進(jìn)入胸腺,所以早前對于胸腺內(nèi)的免疫及其相關(guān)機(jī)制研究未能受到關(guān)注。脾臟是哺乳動物的外周免疫器官,當(dāng)外界抗原侵入機(jī)體,在脾臟會引發(fā)特異性的細(xì)胞免疫和體液免疫。脾臟內(nèi)也存在血-脾屏障,血-脾屏障有很強(qiáng)的選擇透過性,這種選擇性針對的是抗原的性質(zhì)而非完全是抗原的大小,但抗原在脾臟內(nèi)發(fā)生免疫應(yīng)答時是否對胸腺的微環(huán)境有影響?目前卻鮮有報道。為探索不同抗原在小鼠脾臟和胸腺內(nèi)誘導(dǎo)的免疫效應(yīng),我們首先采用AFP(人甲胎蛋白)作為外源性抗原分子,對C57BL/6小鼠進(jìn)行免疫,研究胸腺和脾臟對外界抗原的免疫狀態(tài)有何不同,并采用人肝癌細(xì)胞HepG2作為異種抗原細(xì)胞在C57BL/6小鼠胸腺內(nèi)注射的方法,研究了異種抗原細(xì)胞在胸腺中的命運(yùn)及其可能誘導(dǎo)的免疫效應(yīng)。研究方法1.外源性抗原分子(人AFP)經(jīng)外周免疫后對小鼠脾臟和胸腺的影響1)C57BL/6小鼠的外周AFP免疫2)C57BL/6小鼠脾臟和胸腺稱重及各自總淋巴細(xì)胞的計數(shù)3)C57BL/6小鼠脾臟石蠟切片的制作及HE染色2.外源性抗原細(xì)胞(人HepG2)在小鼠胸腺內(nèi)誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答1)C57BL/6小鼠胸腺發(fā)育情況的分析2) HepG2細(xì)胞培養(yǎng)與熒光材料DiI標(biāo)記3)HepG2細(xì)胞的C57BL/6小鼠胸腺內(nèi)注射及注射結(jié)果的解剖學(xué)觀察4)不同時間檢點(diǎn)的胸腺石蠟切片的制作與HE染色觀察5)不同時間檢點(diǎn)的石蠟切片與熒光顯微鏡觀察研究結(jié)果第一部分1.一次免疫組小鼠的脾臟重量和總淋巴細(xì)胞數(shù)比對照組小鼠的脾重和總淋巴細(xì)胞數(shù)略微提高,胸腺重量和總淋巴細(xì)胞數(shù)較對照組都略微降低,但總體變化不明顯。再次免疫組的脾臟重量與總淋巴細(xì)胞數(shù)與對照組和一次免疫組有明顯的差別,其重量是對照組的2.6倍以上,總淋巴細(xì)胞數(shù)目是對照組的10倍以上,再次免疫組的胸腺重量與一次免疫組和對照組無明顯差異。2.一次免疫組小鼠的脾臟白髓與紅髓比例與對照組相似,而再次免疫小鼠的脾臟白髓比例明顯增加。第二部分1.C57BL/6小鼠胸腺從出生到青春發(fā)育期一直在快速的增長,其體積和重量都有明顯增加,在6周左右時到頂峰,之后胸腺開始萎縮,體積變小,重量下降。2.HepG2細(xì)胞被全部標(biāo)記,在綠色熒光的激發(fā)下細(xì)胞發(fā)出強(qiáng)烈的紅色熒光。3.不同時間檢點(diǎn)的胸腺都顯現(xiàn)出被標(biāo)記的腫瘤細(xì)胞或組織,表明肝癌細(xì)胞在胸腺內(nèi)注射成功。4.小鼠胸腺對異種抗原細(xì)胞產(chǎn)生免疫排斥,3-14天胸腺上皮細(xì)胞對腫瘤組織進(jìn)行完全包繞,逐步出現(xiàn)淋巴細(xì)胞浸潤,巨噬細(xì)胞聚集,最終導(dǎo)致腫瘤組織壞死。5.在腫瘤組織形成初期,周圍聚集有大量的淋巴細(xì)胞,5天左右出現(xiàn)淋巴細(xì)胞在腫瘤組織內(nèi)的浸潤,7天左右腫瘤細(xì)胞出現(xiàn)大量死亡,在腫瘤塊中心的淋巴細(xì)胞浸潤區(qū)可觀察到有空洞狀斑塊的出現(xiàn)。結(jié)論：1.AFP抗原免疫小鼠18周后誘發(fā)的免疫應(yīng)答基本處于靜態(tài)復(fù)原狀態(tài),再次接觸同種抗原,小鼠脾臟內(nèi)會發(fā)生強(qiáng)烈的免疫應(yīng)答,而胸腺內(nèi)幾乎未見有應(yīng)答的征象。2.小鼠胸腺內(nèi)注射的HepG2中瘤細(xì)胞初期會形成腫瘤組織,在第5天到14天,腫瘤組織區(qū)有淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的浸潤,最終腫瘤細(xì)胞被清除。表明異種抗原細(xì)胞在小鼠胸腺內(nèi)引起的免疫排斥反應(yīng),是由胸腺微環(huán)境的組織特征決定的。
【關(guān)鍵詞】：胸腺微環(huán)境 人AFP 人肝癌細(xì)胞 胸腺內(nèi)免疫應(yīng)答
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R392
【目錄】：

• 中文摘要8-11
• ABSTRACT11-13
• 符號說明13-14
• 第一章 緒論(包括文獻(xiàn)綜述)14-31
• 1.1 研究背景14-29
• 1.1.1 胸腺的結(jié)構(gòu)與功能14-19
• 1.1.2 T細(xì)胞在胸腺內(nèi)的成熟過程及其所經(jīng)歷的分子事件19-21
• 1.1.3 胸腺對機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)作用21
• 1.1.4 胸腺對外周免疫的影響與MHC中樞控制21-26
• 1.1.5 脾臟的組織結(jié)構(gòu)及功能26-28
• 1.1.6 AFP(甲胎蛋白)28
• 1.1.7 HepG2(人肝癌細(xì)胞)28-29
• 1.2 課題的提出及意義29-31
• 第二章 外源性抗原分子經(jīng)外周免疫后對小鼠脾臟和胸腺的影響31-40
• 2.1 儀器設(shè)備31
• 2.2 試劑材料31-32
• 2.2.1 實驗材料31-32
• 2.2.2 實驗試劑及其配制32
• 2.3 實驗方法32-35
• 2.3.1 小鼠的免疫32-33
• 2.3.2 小鼠脾臟稱重及細(xì)胞提取計數(shù)33
• 2.3.3 小鼠胸腺稱重及細(xì)胞提取計數(shù)33
• 2.3.4 小鼠脾臟做組織切片及HE染色33-35
• 2.4 實驗結(jié)果35-38
• 2.4.1 小鼠脾臟重量及細(xì)胞數(shù)35-36
• 2.4.2 小鼠胸腺重量及細(xì)胞數(shù)36-37
• 2.4.3 小鼠脾臟組織病理分析37-38
• 2.5 討論38-40
• 第三章 外源性抗原細(xì)胞(人HepG2)在小鼠胸腺內(nèi)誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答40-59
• 3.1 儀器設(shè)備40-41
• 3.2 試劑材料41-43
• 3.2.1 實驗材料41
• 3.2.2 主要試劑及其配制41-43
• 3.3 實驗方法43-46
• 3.3.1 不同發(fā)育階段C57BL/6小鼠胸腺稱重43
• 3.3.2 細(xì)胞培養(yǎng)與DiI標(biāo)記43-44
• 3.3.3 HepG2細(xì)胞的胸腺內(nèi)注射44-46
• 3.3.4 注射結(jié)果的解剖學(xué)觀察46
• 3.4 實驗結(jié)果46-57
• 3.4.1 C57BL/6小鼠胸腺發(fā)育情況的分析47
• 3.4.2 HepG2細(xì)胞DiI染色結(jié)果的觀察47-48
• 3.4.3 HepG2細(xì)胞的胸腺內(nèi)注射結(jié)果觀察48-49
• 3.4.4 組織學(xué)分析的結(jié)果49-57
• 3.5 討論57-59
• 論文總結(jié)與展望59-61
• 前期共同研究論文及簡述(2014年全國免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會論文)61-67
• 參考文獻(xiàn)67-71
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的會議論文(SCI待發(fā)表)71-72
• 致謝72-73
• 學(xué)位論文評閱及答辯情況表73

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