【摘要】：研究背景胃食管反流病(gastroesophageal reflux disease, GERD)系指胃內(nèi)容物反流入食管、口腔(包括喉部)或肺所致的癥狀和并發(fā)癥。其主要分為非糜爛性反流病(non-erosive reflux disease, NERD)、反流性食管炎(reflux esophagitis,RE)、Barrett食管(Barrett's esophagus,BE)三種類型。GERD是一種常見多發(fā)病,目前在我國發(fā)病率呈現(xiàn)逐漸增高的趨勢。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)主要通過抑制胃酸、調(diào)節(jié)胃腸動(dòng)力、保護(hù)黏膜或者手術(shù)等治療手段進(jìn)行治療。中醫(yī)認(rèn)為胃食管反流病其病機(jī)主要是由于各種因素導(dǎo)致胃失和降,胃氣上逆,其中肝失疏泄是其發(fā)病的一個(gè)關(guān)鍵因素。中醫(yī)藥在GERD的治療方面有一定的優(yōu)勢。本研究通過采用通降顆粒干預(yù)反流性食管炎的肝胃不和型大鼠模型,研究其治療GERD的作用機(jī)理。研究目的通過對中西醫(yī)治療GERD的進(jìn)展進(jìn)行回顧,分析其存在問題和發(fā)展前景,為科研提供思路；通過對通降顆粒進(jìn)行藥效學(xué)實(shí)驗(yàn),試圖明確通降顆粒的藥效作用;通過給予反流性食管炎肝胃不和型模型大鼠不同劑量通降顆粒進(jìn)行干預(yù),觀察其療效并研究通降顆粒促進(jìn)胃腸動(dòng)力及其治療反流性食管炎可能的作用機(jī)制。研究內(nèi)容實(shí)驗(yàn)一、通降顆粒的藥效學(xué)研究目的：觀察通降顆粒對胃腸動(dòng)力的影響和其抗炎鎮(zhèn)痛作用。材料與方法：在反流性食管炎模型大鼠上做胃排空運(yùn)動(dòng)和小腸推進(jìn)實(shí)驗(yàn)來觀察通降顆粒對模型大鼠胃腸動(dòng)力的影響;采用醋酸扭體法和二甲苯致小鼠耳腫脹實(shí)驗(yàn)來觀察通降顆粒是否有抗炎鎮(zhèn)痛作用。結(jié)果：(1)在模型大鼠胃排空運(yùn)動(dòng)的實(shí)驗(yàn)中通降顆粒高劑量組和模型組胃內(nèi)殘留率均高于假手術(shù)組(P0.05),通降顆粒中劑量組、莫沙必利組胃內(nèi)殘留率均低于模型組(P0.01),低劑量胃內(nèi)殘留率亦低于模型組(P0.05),提示通降顆粒中、低劑量、莫沙必利對模型大鼠胃排空運(yùn)動(dòng)有促進(jìn)作用；(2)在模型大鼠小腸推進(jìn)運(yùn)動(dòng)的實(shí)驗(yàn)中,與假手術(shù)組比較,模型大鼠小腸推進(jìn)運(yùn)動(dòng)推進(jìn)率低于假手術(shù)組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),,提示模型大鼠存在胃腸運(yùn)動(dòng)減慢現(xiàn)象；給予藥物干預(yù)后,與模型組比較,通降顆粒高劑量組、中劑量組小腸推進(jìn)率均升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01～0.05),提示通降顆粒高中劑量對大鼠小腸推進(jìn)運(yùn)動(dòng)有促進(jìn)作用。(3)在小鼠醋酸扭體實(shí)驗(yàn)中,阿司匹林組、高中劑量組與正常組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01或P0.05),提示通降顆粒高中劑量、阿司匹林具有一定的鎮(zhèn)痛效果； (4)在二甲苯致小鼠耳腫脹實(shí)驗(yàn)中,通降顆粒中劑量組和阿司匹林組在二甲苯致小鼠耳腫脹實(shí)驗(yàn)中,耳腫脹度低于正常組(P0.05,P0.01),提示通降顆粒對二甲苯致小鼠耳腫脹具有一定抑制作用,提示通降顆粒具有一定抗炎作用。實(shí)驗(yàn)二、通降顆粒對反流性食管炎肝胃不和證大鼠模型胃腸動(dòng)力作用機(jī)制的研究目的：通過觀察通降顆粒干預(yù)反流性食管炎肝胃不和證模型大鼠,從血清學(xué)胃腸激素,鈣調(diào)蛋白、肌球蛋白輕鏈激酶等指標(biāo)的不同分子生物學(xué)水平的檢測,試圖明確通降顆粒調(diào)節(jié)胃腸動(dòng)力的作用機(jī)制。材料與方法：采取食管十二指腸側(cè)側(cè)吻合術(shù)式疊加夾尾刺激,建立反流性食管炎肝胃不和型大鼠模型,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為假手術(shù)組、模型組、通降顆粒高劑量組、中劑量組、低劑量組、奧美拉唑組、莫沙必利組、通降顆粒中劑量合奧美拉唑組。每日上午9時(shí)整,假手術(shù)組及模型組分別給予蒸餾水灌胃,治療組分別給予通降顆粒高中低劑量、奧美拉唑、莫沙必利按1m1/100g大鼠體重灌胃給藥,連續(xù)21天。在此過程中,定時(shí)觀察并記錄大鼠體重、進(jìn)食量、飲水量、抓力、毛色、活動(dòng)等一般情況。治療完成后,麻醉狀態(tài)下腹主動(dòng)脈取血,取食管組織,HE染色觀察大鼠食管組織病理學(xué)改變,Western blot蛋白印跡法檢測Cam、MLCK蛋白相對表達(dá),免疫組化法檢測食管組織Cam、MLCK, Real Time PCR檢測法食管組織Cam、MLCK mRNA的相對表達(dá)。結(jié)果：1一般情況大鼠給藥三周后,通降高中劑量組、奧美拉唑組、通降中劑量合奧美拉唑組相對于模型組體重增加(P0.05)；通降高中劑量組、奧美拉唑組、中劑量合奧美拉唑組相對于模型組進(jìn)食量增加(P0.05)；奧美拉唑組、莫沙必利組相對于模型組進(jìn)食量增加(P0.05)；通降高中劑量組、莫沙必利組、中劑量合奧美拉唑組與模型組比較,其抓力差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)2血清學(xué)指標(biāo)胃動(dòng)素含量,與假手術(shù)組比較,通降顆粒高劑量組、通降顆粒中劑量合奧美拉唑組血清胃動(dòng)素含量高于假手術(shù)組(P0.05)；與模型組比較,通降顆粒高中劑量組及西藥莫沙必利組血清胃動(dòng)素含量高于模型組(P0.05)。胃泌素含量,與假手術(shù)組比較,模型組血清胃泌素含量低于假手術(shù)組(P0.01),其余各組與假手術(shù)組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；與模型組比較,通降顆粒高中低劑量組、中劑量合奧美拉唑組以及假手術(shù)組血清胃泌素含量高于模型組(P0.01),莫沙必利組血清胃泌素含量高于模型組(P0.05),奧美拉唑組與模型組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。膽囊收縮素含量,與假手術(shù)組比較,通降顆粒高中劑量組和模型組血清膽囊收縮素含量均低于假手術(shù)組(P0.01)；與模型組比較,莫沙必利組以及通降顆粒中劑量合奧美拉唑組血清膽囊收縮素含量均高于模型組(P0.01)。血管活性腸肽含量,與假手術(shù)組比較,通降顆粒高劑量組血清血管活性腸肽含量低于假手術(shù)組(P0.05),通降顆粒中劑量組、中劑量組合奧美拉唑組以及模型組血清血管活性腸肽含量高于假手術(shù)組(P0.05)；與模型組比較,通降顆粒高劑量組和奧美拉唑組血清血管活性腸肽含量低于模型組(P0.01)。一氧化氮含量,與假手術(shù)組比較,通降顆粒中劑量組、低劑量組和中劑量合奧美拉唑組血清一氧化氮含量高于假手術(shù)組(P0.05和P0.01)；與模型組比較,通降顆粒中劑量組、低劑量組、莫沙必利組、中劑量合奧美拉唑組血清一氧化氮含量均高于模型組(P0.01)。3 Western blot結(jié)果(1) MLCK相對表達(dá)模型組(P0.05)、通降顆粒高中劑量組(P0.01)、低劑量組(P0.05)、奧美拉唑組(P0.05)、莫沙必利組(P0.01)與假手術(shù)組比較,MLCK的相對表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；除奧美拉唑組和假手術(shù)組外,其余各組與模型組比較,MLCK的相對表達(dá)其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。(2)CaM相對表達(dá)通降高劑量組、莫沙必利組與假手術(shù)組比較其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01或P0.05)；通降高劑量(P0.01)、莫沙必利組(P0.01)、通降中劑量(P0.05)、中劑量合奧美拉唑組(P0.05)與模型組比較,其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4免疫組化結(jié)果MLCK在各組的表達(dá)有一定的差異性,模型組呈現(xiàn)陰性結(jié)果；其余各組均呈現(xiàn)陽性或弱陽性結(jié)果,均與模型組存在差異。CaM在各組的表達(dá)有一定的差異性,模型組呈現(xiàn)陰性結(jié)果；其余各組均呈現(xiàn)陽性或弱陽性結(jié)果,均與模型組存在差異。5 Real Time PCR結(jié)果CaM mRNA的相對表達(dá),莫沙必利組(P0.01)、通降高劑量組(P0.05)、通降中劑量和奧美拉唑組(P0.05)與假手術(shù)組和模型組的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；MLCK mRNA的相對表達(dá),莫沙必利組(P0.01)、中劑量合奧美拉唑組(P0.05)與假手術(shù)組比較其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；通降高劑量(P0.05)、中劑量組(P0.05)、奧美拉唑組(P0.05)、莫沙必利組(P0.01)、中劑量合奧美拉唑組(P0.01)模型組比較其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。研究結(jié)論1通降顆粒具有促進(jìn)胃排空運(yùn)動(dòng)和小腸推進(jìn)以及抗炎鎮(zhèn)痛的藥效學(xué)作用。2通過給予反流性食管炎肝胃不和型模型大鼠不同劑量通降顆粒進(jìn)行干預(yù),初步得出通降顆粒促進(jìn)胃腸動(dòng)力的作用可能是通過調(diào)節(jié)胃腸激素,促進(jìn)或抑制胃動(dòng)素、胃泌素、膽囊收縮素、血管活性腸肽、一氧化氮的分泌和釋放,從而調(diào)節(jié)食管、胃腸的運(yùn)動(dòng)。3通降顆粒能夠影響食管組織中CaM、MLCK蛋白和其基因的表達(dá)。
【學(xué)位授予單位】：中國中醫(yī)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R259;R-332

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2773238