【摘要】：狂犬病是由狂犬病毒引起的人畜共患傳染病,全世界范圍每年超過55000人喪命于狂犬病毒感染,其中大部分人群來著中國、印度、巴基斯坦等發(fā)展中國家。當(dāng)前市場(chǎng)上預(yù)防狂犬病多用滅活狂犬疫苗,但免疫程序復(fù)雜需要在28天內(nèi)注射4-5次,作為免疫效果較好副作用低的人二倍體狂犬疫苗面臨著價(jià)格昂貴產(chǎn)量不足的情況,在使用無佐劑狂犬疫苗情況下,中和抗體滴度至少需要14天方可達(dá)到有效保護(hù)水平,不能滿足暴露個(gè)體盡早產(chǎn)生保護(hù)性中和抗體的需要。佐劑的使用可有效的降低狂犬病疫苗用量,提升免疫保護(hù)能力,提早產(chǎn)生中和抗體,探尋狂犬病疫苗佐劑對(duì)于狂犬病的控制有著重要意義。甲型副傷寒沙門氏菌鞭毛蛋白是鞭毛絲的結(jié)構(gòu)組成部分,作為TLR5激動(dòng)劑被識(shí)別,將鞭毛蛋白與抗原混合或者融合表達(dá),已應(yīng)用于多種疫苗中,TLR5位于多種免疫細(xì)胞表面,可觸發(fā)炎性因子、趨化因子、干擾素的分泌啟動(dòng)天然免疫應(yīng)答。還可募集T、B淋巴細(xì)胞至淋巴器官促進(jìn)APC的活化,同時(shí)增強(qiáng)細(xì)胞免疫和體液免疫應(yīng)答。本研究以角鯊烯、司盤、吐溫、甲型副傷寒桿菌鞭毛蛋白為原料制備了平均粒徑在187nm左右的復(fù)合乳佐劑,該佐劑可以加速中和抗體的產(chǎn)生,增強(qiáng)特異性和非特異性免疫應(yīng)答。通過快速熒光灶抑制試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)中劑量甲型副傷寒桿菌鞭毛蛋白復(fù)合乳佐劑在首針免疫后第7天即可產(chǎn)生0.5 IU/ml的中和抗體,中和抗體(1.0 IU/ml)顯著高于全劑量疫苗組(0.38 IU/ml),第14天中和抗體達(dá)到3.8 IU/ml,高于全劑量疫苗組(2.2 IU/ml)。該佐劑組小鼠分泌IFN-γ和IL-4的淋巴細(xì)胞數(shù)量顯著提升。免疫后注射部位肌肉免疫趨化因子MCP-1、MIP-1a mRNA表達(dá)上調(diào),在6 h達(dá)到峰值。攻毒挑戰(zhàn)試驗(yàn)中甲型副傷寒桿菌鞭毛蛋白復(fù)合乳佐劑生存率為100%。小鼠心、肝、脾、肺、腎的病理切片與疫苗對(duì)照組無異常變化證明佐劑安全性良好。采用肌肉模擬自然感染的小鼠模型研究甲型副傷寒桿菌鞭毛蛋白復(fù)合乳佐劑聯(lián)合疫苗在暴露后免疫研究中發(fā)現(xiàn)肌肉注射、皮內(nèi)注射免疫途徑下存活率均高于無佐劑組,皮內(nèi)免疫效果最佳,并且可顯著降低抗原用量。綜上所述,甲型副傷寒桿菌鞭毛蛋白復(fù)合乳佐劑能夠有效的降低狂犬病疫苗的使用劑量,并具有良好的安全性和免疫原性。
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R392
【圖文】：

邐中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院碩士研究生學(xué)位論文邐逡逑析儀、透射電鏡檢查。復(fù)合乳佐劑：乳佐劑＋甲型副傷寒桿菌鞭毛蛋白充分混合，逡逑鞭毛蛋白終濃度為１００網(wǎng)／ｍｌ，使用０．４５邋ｐｍ膜，除菌過濾分裝編號(hào)４°Ｃ保存。本研逡逑究中乳佐劑配方參考ＭＦ５９制備，在后文中簡(jiǎn)稱為ＭＦ５９。逡逑／邐Ｎ逡逑

中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院碩士研究生學(xué)位論文電泳結(jié)束后，取下凝膠膜，卸下硅膠框，將凝膠放置培養(yǎng)皿中加入固定處理；逡逑加入預(yù)先配置的考馬斯亮藍(lán)染色液染色４０邋ｍｉｎ；逡逑加入考馬斯亮藍(lán)脫色液體脫色，約２ｈ后更換新的脫色液繼續(xù)脫色晰。逡逑驗(yàn)結(jié)果逡逑佐劑的質(zhì)量檢g義獻(xiàn)艏鐐夤鄢嗜榘咨�，不驮擌崿随机取三批次的乳佐技Z鰨插澹恚旆直皰澹恚椋睿╁澹擔(dān)埃埃板澹潁穡恚ǎ保板澹恚椋睿�，８０００邋}穡恚ǎ保板澹恚椋睿保埃埃埃板澹潁穡恚ǎ玻板澹恚椋睿┨蹕址植鬩約捌迫櫚南窒�。辶x隙姆治鲆橇＞都觳飩峁義

本文編號(hào)：2768001