【摘要】：狂犬病是由狂犬病毒引起的人畜共患傳染病,全世界范圍每年超過55000人喪命于狂犬病毒感染,其中大部分人群來著中國、印度、巴基斯坦等發(fā)展中國家。當前市場上預防狂犬病多用滅活狂犬疫苗,但免疫程序復雜需要在28天內注射4-5次,作為免疫效果較好副作用低的人二倍體狂犬疫苗面臨著價格昂貴產量不足的情況,在使用無佐劑狂犬疫苗情況下,中和抗體滴度至少需要14天方可達到有效保護水平,不能滿足暴露個體盡早產生保護性中和抗體的需要。佐劑的使用可有效的降低狂犬病疫苗用量,提升免疫保護能力,提早產生中和抗體,探尋狂犬病疫苗佐劑對于狂犬病的控制有著重要意義。甲型副傷寒沙門氏菌鞭毛蛋白是鞭毛絲的結構組成部分,作為TLR5激動劑被識別,將鞭毛蛋白與抗原混合或者融合表達,已應用于多種疫苗中,TLR5位于多種免疫細胞表面,可觸發(fā)炎性因子、趨化因子、干擾素的分泌啟動天然免疫應答。還可募集T、B淋巴細胞至淋巴器官促進APC的活化,同時增強細胞免疫和體液免疫應答。本研究以角鯊烯、司盤、吐溫、甲型副傷寒桿菌鞭毛蛋白為原料制備了平均粒徑在187nm左右的復合乳佐劑,該佐劑可以加速中和抗體的產生,增強特異性和非特異性免疫應答。通過快速熒光灶抑制試驗發(fā)現(xiàn)中劑量甲型副傷寒桿菌鞭毛蛋白復合乳佐劑在首針免疫后第7天即可產生0.5 IU/ml的中和抗體,中和抗體(1.0 IU/ml)顯著高于全劑量疫苗組(0.38 IU/ml),第14天中和抗體達到3.8 IU/ml,高于全劑量疫苗組(2.2 IU/ml)。該佐劑組小鼠分泌IFN-γ和IL-4的淋巴細胞數(shù)量顯著提升。免疫后注射部位肌肉免疫趨化因子MCP-1、MIP-1a mRNA表達上調,在6 h達到峰值。攻毒挑戰(zhàn)試驗中甲型副傷寒桿菌鞭毛蛋白復合乳佐劑生存率為100%。小鼠心、肝、脾、肺、腎的病理切片與疫苗對照組無異常變化證明佐劑安全性良好。采用肌肉模擬自然感染的小鼠模型研究甲型副傷寒桿菌鞭毛蛋白復合乳佐劑聯(lián)合疫苗在暴露后免疫研究中發(fā)現(xiàn)肌肉注射、皮內注射免疫途徑下存活率均高于無佐劑組,皮內免疫效果最佳,并且可顯著降低抗原用量。綜上所述,甲型副傷寒桿菌鞭毛蛋白復合乳佐劑能夠有效的降低狂犬病疫苗的使用劑量,并具有良好的安全性和免疫原性。
【學位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R392
【圖文】：

邐中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院碩士研究生學位論文邐逡逑析儀、透射電鏡檢查。復合乳佐劑：乳佐劑＋甲型副傷寒桿菌鞭毛蛋白充分混合，逡逑鞭毛蛋白終濃度為１００網／ｍｌ，使用０．４５邋ｐｍ膜，除菌過濾分裝編號４°Ｃ保存。本研逡逑究中乳佐劑配方參考ＭＦ５９制備，在后文中簡稱為ＭＦ５９。逡逑／邐Ｎ逡逑

中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院碩士研究生學位論文電泳結束后，取下凝膠膜，卸下硅膠框，將凝膠放置培養(yǎng)皿中加入固定處理；逡逑加入預先配置的考馬斯亮藍染色液染色４０邋ｍｉｎ；逡逑加入考馬斯亮藍脫色液體脫色，約２ｈ后更換新的脫色液繼續(xù)脫色晰。逡逑驗結果逡逑佐劑的質量檢g義獻艏鐐夤鄢嗜榘咨�，不驮擌崿随机取三批次的乳佐技Z鰨插澹恚旆直皰澹恚椋睿╁�，００邋}穡恚ǎ保板澹恚椋睿�，８０００邋}穡恚ǎ保板澹恚椋睿�，１００００邋}穡恚ǎ玻板澹恚椋睿┨蹕址植鬩約捌迫櫚南窒�。辶x隙姆治鲆橇＞都觳飩峁義

本文編號：2768001