【摘要】：目的:本研究試圖探討中性粒細(xì)胞胞外誘捕網(wǎng)(neutrophil extracellular traps,NETs)在小鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型中的表達(dá)情況,并且通過檢測緊密連接蛋白(claudin-1)的表達(dá),闡述NETs與腸道屏障功能損傷程度的相關(guān)性。研究方法:本研究采用清潔級生后6-8周的雄性Balb/c小鼠60只,按完全隨機(jī)方法分為正常對照組和模型組。通過葡聚糖硫酸鈉(dextran sulfate sodium,DSS)建立潰瘍性結(jié)腸炎急性期小鼠模型,并分別于造模后的1d、3d、5d留取小鼠結(jié)腸組織及血液樣本。通過觀察各組小鼠的臨床表現(xiàn),進(jìn)行疾病活動指數(shù)評分及常規(guī)HE病理分析,反映腸組織損傷情況,以證明急性結(jié)腸炎的形成。采用PicoGreen?染料定量檢測小鼠血漿中游離DNA的含量,免疫組織化學(xué)方法觀察腸組織中NETs主要組成成分髓過氧化物酶(MPO)和瓜氨酸化組蛋白(CitH3)的表達(dá)及定位情況,Western blot方法檢測緊密連接蛋白(claudin-1)的表達(dá)水平,明確NETs與腸道屏障功能損傷程度的相關(guān)性。結(jié)果:與正常對照組相比,DSS誘導(dǎo)建立的潰瘍性結(jié)腸炎急性期小鼠模型在造模后均出現(xiàn)明顯的體重下降,HE病理學(xué)染色均可見明顯的結(jié)腸炎改變,并且隨著時間的變化體重逐漸回升,各模型組的炎癥活動指數(shù)DAI值與其正常對照組相比均顯著上升(P均0.05)。各模型組小鼠的血漿中游離DNA含量與其正常對照組相比均顯著升高(P均0.05),且隨病情逐漸恢復(fù),含量逐漸降低。免疫組織化學(xué)檢測可見各模型組NETs形成增加,且隨病情逐漸恢復(fù),其含量呈逐漸下降的趨勢。Western blot檢測發(fā)現(xiàn)各模型組緊密連接蛋白claudin-1表達(dá)均下降(P均0.05),且隨病情逐漸恢復(fù),其含量呈逐漸上升的趨勢。結(jié)論:在潰瘍性結(jié)腸炎急性期小鼠模型中NETs形成增加,且NETs的形成增加與腸屏障功能損傷相關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R574.62;R-332
【圖文】：

全部實(shí)驗(yàn)小鼠在造模前飲食飲水均正常，自主活動正常，毛色干凈清潔，大小正常，糞便的性狀正常，顏色正常，為黃褐色，呈長橢圓形。造模開始后，模小鼠逐漸出現(xiàn)精神萎靡，少食懶動，貼邊扎堆，自主活動減少，體毛凌亂，少，體重逐漸下降，出現(xiàn)粘液便或粘液血便，肛周污穢，與正常糞便有明顯差別。重下降、粘液便或粘液血便等癥狀的出現(xiàn)，模型組小鼠的疾病活動指數(shù)（DAI）上升。模型組小鼠在造模后的第 1 天，體重下降最為顯著，全部出現(xiàn)肉眼可見液血便，1d 組平均 DAI 評分為（11.00±1.22），明顯高于其對照組（0.38±0.48），0.05）；在造模后的第 3 天，體重稍有回升，3 只出現(xiàn)肉眼可見的粘液血便，4現(xiàn)大便潛血強(qiáng)陽性，3d 組平均 DAI 評分為（8.88±1.76），明顯高于其對照組.13±0.33），（P＜0.05）；在造模后的第 5 天，體重較前回升，癥狀較前減輕，出現(xiàn)肉眼可見的粘液血便，3 只出現(xiàn)大便松散，4 只出現(xiàn)大便潛血弱陽性，5d均 DAI 評分為（6.50±2.40），但仍明顯高于其對照組（0.13±0.35），(P＜0.05）。圖 1A）

血水腫及增厚，腸壁與腹膜或大網(wǎng)膜之間發(fā)生黏連，可見多個腫大的腸系膜淋巴結(jié)其中部分癥狀較重的小鼠可見結(jié)腸組織呈現(xiàn)嚴(yán)重的壞死，而無穿孔表現(xiàn)。1d 組小鼠結(jié)腸組織病變最為嚴(yán)重，可見不同程度的潰瘍、糜爛及壞死，腸壁與周圍組織發(fā)生多處黏連，3d 組及 5d 組小鼠結(jié)腸組織病變可見逐漸緩解減輕，腸壁充血水腫及增厚程度逐漸減輕，腸壁與周圍組織黏連發(fā)生減少，潰瘍及糜爛范圍逐漸減小。而各對照組小鼠結(jié)腸組織可見腸壁光滑且薄，周圍解剖結(jié)構(gòu)清楚，與周圍組織無黏連，未見潰瘍、糜爛及壞死等表現(xiàn)。各組小鼠結(jié)腸組織大體損傷評分結(jié)果見下表 4 及下圖 1B。表 4. 結(jié)腸大體損傷評分組別模型組 對照組1 天組 3 天組 5 天組 1 天組 3 天組 5 天組損傷評分3.1 ±0.742.0±0.821.1±0.320.40±0.520.30±0.480.30±0.48

中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文量的炎性細(xì)胞浸潤至黏膜下層，形成炎性團(tuán)塊，腸壁增厚，充血水腫明顯。1d 組結(jié)腸黏膜呈明顯炎癥反應(yīng)，主要累及黏膜、黏膜下層，可見以中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞為主的大量炎性細(xì)胞浸潤，上皮內(nèi)杯狀細(xì)胞減少，隱窩嚴(yán)重破壞，四周黏膜腺體排列不齊。3d 組、5d 組炎癥細(xì)胞浸潤逐漸減輕，水腫逐漸減輕，潰瘍淺表輕微。（如圖 1C）

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本文編號：2763244