【摘要】：細(xì)胞色素P450是藥物代謝中的一個(gè)重要酶系,具有催化內(nèi)源性以及外源性物質(zhì)代謝的作用,被稱為“肝藥酶”。在CYP2D亞家族中,CYP2D6是遺傳多態(tài)性特征最為明顯、研究最全面的一類酶,但是它的含量在肝臟中卻只有細(xì)胞色素P450酶的2%。CYP2D6是非常重要的藥物代謝酶,約1/4的臨床藥物可以被CYP2D6酶代謝,鹽酸文拉法辛和金雀花堿就是其中具有代表性的兩種。據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道,人的CYP2D6和大鼠的CYP2D1是直系同源基因,他們有著高達(dá)72%的同源性。同時(shí)大鼠相比于其他物種而言,在各方面和人更為接近,尤其是針對(duì)于某些疾病的研究,更適合作為研究對(duì)象。因此,我們嘗試?yán)么笫竽Ｐ蛠砟M研究鹽酸文拉法辛和金雀花堿在人體內(nèi)的藥效與代謝情況。我們實(shí)驗(yàn)室前期利用CRISPR/Cas9技術(shù)構(gòu)建CYP2C11-null和CYP2D1-null兩種大鼠模型來分別模擬CYP2C9和CYP2D6慢代謝人群。其中本研究利用CYP2D1-null大鼠模型,研究了鹽酸文拉法辛和金雀花堿的代謝和藥效學(xué)影響,闡明CYP2D6慢代謝人群對(duì)鹽酸文拉法辛和金雀花堿的影響,為指導(dǎo)臨床疾病監(jiān)測和臨床合理用藥提供了科學(xué)借鑒。研究主要結(jié)果如下:1.CYP2D1-null大鼠中鹽酸文拉法辛的藥效學(xué)研究利用分養(yǎng)和慢性不可預(yù)見性刺激的方式對(duì)大鼠造模20 d后,對(duì)抑郁狀態(tài)下的大鼠進(jìn)行灌胃給藥14 d,評(píng)價(jià)抑郁狀態(tài)下野生型(WT)大鼠和CYP2D1-null大鼠對(duì)鹽酸文拉法辛的藥效學(xué)影響。造模20 d后的實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),與空白組的大鼠相比,抑郁狀態(tài)下大鼠的體重,飲食,1%糖水偏好和曠場運(yùn)動(dòng)水平顯著性降低(P0.05),說明抑郁癥模型造模成功,可以用于抗抑郁藥鹽酸文拉法辛的藥效學(xué)研究。此外,實(shí)驗(yàn)結(jié)果還發(fā)現(xiàn)在同品系間,雌性大鼠比雄性大鼠進(jìn)入抑郁狀態(tài)更快。在鹽酸文拉法辛治療2周后發(fā)現(xiàn),在同性別組間,相比于給藥組的野生型大鼠,CYP2D1-null大鼠的體重,飲食量,1%蔗糖偏好,運(yùn)動(dòng)水平,去甲腎上腺素(NE)和5-羥色胺(5-HT)水平有顯著性差異,P0.05。2.CYP2D1-null大鼠肝微粒體對(duì)鹽酸文拉法辛體外代謝研究利用高效液相色譜法,對(duì)比研究了CYP2D1-null大鼠和野生型大鼠肝微粒體對(duì)鹽酸文拉法辛的體外代謝活性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),與野生型大鼠相比,CYP2D1-null大鼠肝微粒體對(duì)鹽酸文拉法辛的K_m值升高(P0.05),最大反應(yīng)速率V_(max)及清除率CL_(int)降低。此外,在不同性別組間也有差異。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,CYP2D1-null大鼠肝微粒體對(duì)鹽酸文拉法辛的體外代謝活性降低。3.鹽酸文拉法辛在CYP2D1-null大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究本研究在灌胃給藥后,從大鼠的眼球后靜脈采集血樣,利用高效液相來檢測36小時(shí)內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)的鹽酸文拉法辛在CYP2D1-null大鼠和野生型大鼠體內(nèi)的血藥濃度變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)同性別組間CYP2D1-null雄鼠的表觀分布容積和清除率比野生型雄鼠小,但是CYP2D1-null雄鼠的AUC_((0-t))、AUC_((0-∞))、C_(max)和T_(max)較大。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,鹽酸文拉法辛在CYP2D1-null大鼠體內(nèi)的代謝速率變慢。4.CYP2D1-null大鼠肝微粒體對(duì)金雀花堿體外代謝研究利用高效液相色譜,對(duì)比研究了CYP2D1-null大鼠和野生型大鼠肝微粒體對(duì)金雀花堿的體外代謝活性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)與野生型大鼠相比,CYP2D1-null大鼠肝微粒體對(duì)金雀花堿的K_m值升高(P0.05),最大反應(yīng)速率V_(max)及清除率CL_(int)降低。此外,在不同性別組間也有差異。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,CYP2D1-null大鼠肝微粒體對(duì)金雀花堿的體外代謝活性降低。綜上所述,得到以下結(jié)論:藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),鹽酸文拉法辛在CYP2D1-null大鼠中的抗抑郁作用略弱。在體外代謝活性中發(fā)現(xiàn),CYP2D1-null大鼠肝微粒體對(duì)鹽酸文拉法辛和金雀花堿的代謝活性降低。體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),鹽酸文拉法辛在CYP2D1-null大鼠體內(nèi)的代謝能力降低。
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R-332;R96
【圖文】：

中鹽酸文拉法辛和金雀花堿的代謝不同的含有堿性氮原子的藥劑D6 功能性酶的個(gè)體不會(huì)代謝喹胍，右美沙芬和可待因等有增加不良反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)。物金雀花、黃花羽扁豆的全草中國種子植物科屬辭典》，性；黃花羽扁豆始載于《東北植效。白屈菜為罌粟科白屈菜屬、腎經(jīng)，具有清熱解毒，止痛

成員在物種間的多樣性和底物特異性存預(yù)測人類 CYP2D6 依賴性藥物代謝的途徑模型，我們課題組前期通過 CRISPR/模型（CYP2D1-null），其 4 號(hào)外顯子 7b繁殖，基因型鑒定以及表型鑒定。研究發(fā)現(xiàn)在外觀，行為能力以及繁殖能力均無明顯異常。P450 酶主要亞型鑒定發(fā)現(xiàn) CYP著誘導(dǎo)，CYP1A2，CYP2E1 和 CYP2B 的在CYP2D1-null大鼠中的9個(gè)潛在脫靶位

消耗量測定：在測定當(dāng)天早上九點(diǎn)將空白組分籠，1 大鼠鼠糧，在次日上午九點(diǎn)，稱量 24 h 后大鼠鼠糧的的飼料消耗量。食物消耗量以 24 h 的攝入食物量（m糖水消耗實(shí)驗(yàn)：在實(shí)驗(yàn)前，預(yù)先訓(xùn)練大鼠飲用蔗糖水禁食 24 h 后，給予大鼠 1%蔗糖水 24 h，稱量 24 h 前 24 h 內(nèi)的蔗糖水飲用量。蔗糖水消耗量按照 24 h 攝 g）評(píng)定。實(shí)驗(yàn)：將大鼠置于 80 cm*80 cm*50 cm 的敞箱中，如 后，運(yùn)用 TSE 多功能條件反射實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)自動(dòng)記錄其在其總的移動(dòng)距離。每只大鼠在評(píng)測完后，清理干凈敞箱以消除氣味，避免對(duì)下一只大鼠的測定造成干擾

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2749105