【摘要】：HIV感染機(jī)體后可誘導(dǎo)產(chǎn)生細(xì)胞免疫應(yīng)答和體液免疫應(yīng)答,細(xì)胞免疫作用于受感染細(xì)胞繼而控制已發(fā)生的感染,體液免疫中的中和抗體能夠防止游離的病毒發(fā)生擴(kuò)散。用經(jīng)典的疫苗策略誘導(dǎo)機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生針對(duì)HIV的細(xì)胞或體液免疫的方法尚不能有效抵御HIV感染。另一種途徑是依靠轉(zhuǎn)基因載體在機(jī)體細(xì)胞內(nèi)部表達(dá)HIV中和抗體,繞過激活宿主免疫應(yīng)答使之產(chǎn)生抗體的過程,該途徑可能是一種行之有效的HIV治療方法。將HIV中和抗體基因2G12等與穿梭質(zhì)粒構(gòu)成雙啟動(dòng)子重組載體,該載體可表達(dá)抗體輕鏈和重鏈。重組質(zhì)粒鑒定后包裝病毒,在病毒擴(kuò)增,純化等步驟后,在細(xì)胞水平進(jìn)行病毒的滴度測(cè)定和抗體表達(dá)測(cè)定;重組病毒在動(dòng)物水平進(jìn)行最佳免疫劑量測(cè)定;用不同的病毒載體注射小鼠,希望通過以最少的免疫次數(shù)與免疫劑量達(dá)到較高的抗體表達(dá)濃度與抗體表達(dá)持續(xù)時(shí)間。本文初步探討了應(yīng)用F2A序列的HIV中和抗體表達(dá)策略。將抗體輕重鏈基因通過F2A連接,與穿梭質(zhì)粒構(gòu)成重組載體。利用該穿梭質(zhì)粒包裝、擴(kuò)增與純化出重組Adv病毒,檢測(cè)病毒滴度后用該病毒感染細(xì)胞表達(dá)出中和抗體2G12;用該重組Adv載體疫苗注射小鼠,經(jīng)檢測(cè)成功表達(dá)出HIV中和抗體2G12。本課題將攜帶相同或不同HIV抗體基因的多種載體注射小鼠體內(nèi),希望能夠在小鼠體內(nèi)持續(xù)高效地表達(dá)中和抗體,為減少或消除體內(nèi)HIV病毒、治療艾滋病奠定基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：北京工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R392


本文編號(hào)：2744566