【摘要】：研究背景和目的:臨床中跨區(qū)切取皮瓣常常引起皮瓣遠(yuǎn)端壞死。本研究旨在構(gòu)建一種新的三血管體遠(yuǎn)端潛在區(qū)非生理性增壓模型。并探討潛在區(qū)存活機制。同時將其與超引流技術(shù)進(jìn)行比較。從而明確手術(shù)優(yōu)選方式,提高手術(shù)安全性,降低穿支皮瓣遠(yuǎn)端壞死率。方法:1.對6只大鼠進(jìn)行顯微鏡下胸背靜脈(TDV)和旋髂深靜脈(DCIV)解剖、測量,并以臨床靜脈留置針內(nèi)芯作為鏡下參照,對比兩者鏡下管徑直徑。予以統(tǒng)計學(xué)處理,明確兩者管徑大小對比情況。以大鼠背部一側(cè)三血管體穿支皮瓣模型為基礎(chǔ),設(shè)計旋髂深血管(DCIA/DCIV)為蒂,皮瓣向大鼠頭部擴展至肋間血管(ICA/ICV)區(qū)和胸背血管(TDA/TDV)區(qū)。設(shè)計胸背血管(TDA/TDV)為蒂,皮瓣向大鼠頭部擴展至肋間血管(ICA/ICV)區(qū)和旋髂深血管(DCIA/DCIV)區(qū)。12只大鼠隨機分成兩組,A組以胸背動脈(TDA/TDV)穿支為蒂,B組:以旋髂深動脈(DCIA/DCIV)穿支為蒂。術(shù)后測量皮瓣成活率并進(jìn)行組間比較。激光多普勒血流檢測血流顯影情況和明膠-氧化鉛動脈造影顯示血管形態(tài)情況。比較兩種模型后期用于增壓實驗的優(yōu)劣。2.以大鼠背部一側(cè)三血管體穿支皮瓣模型為基礎(chǔ),設(shè)計胸背血管(TDA/TDV)為蒂,皮瓣向大鼠頭部擴展至肋間血管時CA/ICV)區(qū)和旋髂深血管(DCIA/DCIV)區(qū)。分離并保留旋髂深靜脈(DCIV)。分離鼠尾動脈。12只實驗大鼠隨機分成兩組:A組為對照組,不做吻合鼠尾動脈吻合,于血管旋轉(zhuǎn)點處將鼠尾離斷、結(jié)扎血管;B組為皮瓣遠(yuǎn)端非生理性增壓組,將鼠尾動脈分離后,經(jīng)皮下隧道與旋氃深靜脈(DCIV)吻合。術(shù)后測量皮瓣成活率并進(jìn)行組間比較。進(jìn)行激光多普勒血流檢測血流顯影情況和明膠-氧化鉛動脈造影顯示血管形態(tài)情況。比較兩者差異。3.96只大鼠隨機分為兩組,皮瓣設(shè)計同第二部分。分別于術(shù)后1h、3h、6h、12h、1d、3d、5d和7d進(jìn)行激光多普勒血流檢測。觀察皮瓣choke vessel區(qū)有無血流信號阻礙現(xiàn)象,及其持續(xù)、解除時間。以上述時間點大鼠行明膠-氧化鉛造影,觀察皮瓣血管形態(tài)變化和choke vessel區(qū)血管形態(tài)變化時間。對比兩組有無差異。4.以第三部分大鼠激光多普勒血流檢測儀檢測圖片為研究對象。分組遵循第三部分。利用moorLDI Review V6.1軟件,分析激光多普勒血流檢測圖,測量皮瓣術(shù)后1h,3h,6h,12h,1d,3d,5d及7d血量情況。對比組內(nèi)相鄰時間點choke vessel Ⅱ區(qū)/Ⅰ區(qū)情況,和DICA、ICA血流量變化情況。檢測結(jié)果將兩組間潛在區(qū)、動力區(qū)的血流量分別除以解剖區(qū)的血流量,得出相應(yīng)比值進(jìn)行組間各時間點的對應(yīng)比較。同時對比各時間點兩組間choke vessel Ⅱ區(qū)/Ⅰ區(qū)情況。并進(jìn)行統(tǒng)計分析。明確非生理性增壓對于皮瓣各區(qū)血流量,特別是早期皮瓣血流量的影響。5.皮瓣模型同第二部分。24只大鼠隨機分為兩組,分組情況同第二部分。利用蘇木素-伊紅(HE)對皮瓣進(jìn)行染色觀察。觀察潛在區(qū)微細(xì)結(jié)構(gòu),同時對choke vessel Ⅱ區(qū)進(jìn)行血管計數(shù),比較增壓與否對皮瓣遠(yuǎn)端微細(xì)結(jié)構(gòu)和choke vessel Ⅱ區(qū)血管新生的影響。并對兩組皮瓣choke vessel Ⅱ區(qū)進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色和Western blotting檢測。分析兩組VEGF的表達(dá)情況。從而從分子水平評價大鼠皮瓣遠(yuǎn)端增壓與否對組織血管新生情況的影響。6.以大鼠18只,作為實驗動物,皮瓣模型在第二部分基礎(chǔ)上保留旋髂深靜脈(DCIV),作為遠(yuǎn)端增壓靜脈。術(shù)后7天,對其進(jìn)行皮瓣大體觀察及成活率檢測、利用激光多普勒血流檢測儀和明膠-氧化鉛血管造影明確壞死區(qū)域。同時進(jìn)行蘇木素-伊紅(HE)染色并檢測血管密度,免疫組織化學(xué)(IHC)染色和Western blotting檢測,明確VEGF表達(dá)情況。結(jié)合之前部分?jǐn)?shù)據(jù),對比其與皮瓣遠(yuǎn)端非生理性增壓技術(shù)對三血管體穿支皮瓣遠(yuǎn)端存活影響的差異。結(jié)果:1.鏡下檢測TDA管徑直徑為0.427±0.10,DCIV管徑直徑為0.632±0.06,p=0.002,兩者間差異具有明顯統(tǒng)計學(xué)差異。A組皮瓣成活率為(81.2±6.3)%,B組皮瓣成活率為(88.8±5.3)%,兩組間成活率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.047)。激光多普勒血流顯影圖和明膠-氧化鉛造影均顯示兩組遠(yuǎn)端缺血性改變。2.A組皮瓣成活率為(81.9±5.4)%,B組皮瓣成活率為100%。兩者比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.001)。激光多普勒血流顯影圖和明膠-氧化鉛造影均顯示A組遠(yuǎn)端缺血性改變,而B組遠(yuǎn)端血流正常、血管顯影良好。3.激光多普勒血流檢測示A組可見choke vessel I區(qū)出現(xiàn)血流阻礙現(xiàn)象,阻礙現(xiàn)象在6-12h后消失。choke vessel Ⅱ區(qū)血流3d才通過。B組可見choke vessel Ⅰ區(qū)出現(xiàn)血流阻礙現(xiàn)象,阻礙現(xiàn)象在6-12h后消失。而choke vessel Ⅱ區(qū)非生理性增壓后,術(shù)后1d內(nèi)潛在區(qū)血流信號較弱。1d后血流已通過choke vessel Ⅱ區(qū),隨著時間推移,血流信號明顯增強。明膠-氧化鉛血管造影顯示A組術(shù)后3小時choke vessel Ⅰ區(qū)血管以choke vessel相連為主,其間含少量細(xì)小真性吻合,其后至1天時間內(nèi)皮瓣氧化鉛造影均表現(xiàn)為細(xì)小真性吻合為主,其間出現(xiàn)大量纖細(xì)血管結(jié)構(gòu)。3-7天內(nèi)出現(xiàn)粗大真性吻合,纖細(xì)血管逐漸消失。B組術(shù)后choke vessel Ⅰ區(qū)血管明膠氧化鉛造影顯示與A組基本相同。A組術(shù)后choke vessel Ⅱ區(qū)主要為choke vessel血管,12h出現(xiàn)少許細(xì)小真性吻合,1d時出現(xiàn)較多細(xì)小真性吻合,并持續(xù)至7d。B組術(shù)后3h內(nèi),第二血管體和第三血管體間choke vesselⅡ區(qū)血管表現(xiàn)為choke vessel。術(shù)后6h時,出現(xiàn)細(xì)小真性吻合,12h時轉(zhuǎn)為以大量的細(xì)小真性吻合。術(shù)后1d、3d、5d和7d出現(xiàn)以少量的粗大真性吻合血管連接兩個血管體間。4.通過兩組組內(nèi)各個時間點choke vessel Ⅱ區(qū)/Ⅰ區(qū)血流量對比發(fā)現(xiàn),兩組均呈增長趨勢。但增長趨勢存在差異。A組12h內(nèi)增長平緩,12h和1d間增長存在差異(p0.05),而3d至7d,增長趨于平緩。B組1h和3h間存在顯著差異(p0.01),12h至1d,相鄰各組間血流量對比無明顯差異。而1d和3d間存在顯著差異(pp0.01),其后增長趨于平緩。其他相鄰時間間比較未見差異。通過組內(nèi)不同時間點血流量的曲線圖觀察發(fā)現(xiàn),A組和B組各個血管體區(qū)域內(nèi)血流量均呈上升趨勢。并于3d-7d增長區(qū)域平穩(wěn)。而A組DCIA血管體增長緩慢。A組ICA區(qū)3h和6h間、12h和1d、1d和3d間存在顯著差異(p0.01),其余各區(qū)相鄰時間點間未見明顯差異。B組TDA相鄰時間點間未見明顯差異。ICA區(qū)3h和6h間、12h和1d、1d和3d間存在顯著差異(pp0.01),其余相鄰時間點間未見明顯差異。DCIA區(qū)1h和3h、6h和12h、12h和1d、1d和3d間均存在顯著差異(p0.01)。其余相鄰時間點間未見明顯差異。通過兩組組間各個時間點choke vesse1 Ⅱ區(qū)/Ⅰ區(qū)血流量對比發(fā)現(xiàn),B組1h至3d內(nèi)各個點血流量比值均明顯高于A組(p0.01)。5d和7d B組仍高于A組(p0.05)。通過兩組皮瓣ICA區(qū)/TDA區(qū)各時間點對比柱狀圖發(fā)現(xiàn),B組ICA區(qū)/TDA區(qū)于1h、3h、6h和12h時均高于A組,具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。1d后兩組間差異無明顯統(tǒng)計學(xué)意義。而兩組皮瓣DCIA區(qū)/TDA區(qū)各時間點對比柱狀圖發(fā)現(xiàn),DCIA區(qū)/TDA區(qū)各時間點均高于A組,具有統(tǒng)計學(xué)意義(pp0.05)。5.HE染色示A組和B組新生血管計數(shù)分別為(25.83±5.62)/mm和(54.88±7.80)/mm,組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.001)。免疫組織化學(xué)(IHC)染色及Western blotting檢測顯示B組皮瓣VEGF表達(dá)較A組高(p0.001)。6.皮瓣成活率檢測,C組皮瓣成活率為(92.8±4.1)%,其與A組(81.9±5.4)%和B組(100%)分別進(jìn)行比較,兩者差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。激光多普勒血流顯影圖和明膠-氧化鉛造影均顯示A組、C組遠(yuǎn)端缺血性改變,而B組遠(yuǎn)端血流正常、血管顯影良好。HE染色示新生血管計數(shù)為(37.14±7.49)/mm2,與 A 組(25.83±5.62)/mm2和 B 組(54.88±7.80)/mm2分別比較,兩組間均有統(tǒng)計學(xué)差異(p0.05)。免疫組織化學(xué)(IHC)染色和Western blotting檢測證實C組皮瓣中VEGF的表達(dá)水平較A組顯著高;B組中VEGF的表達(dá)較C組上調(diào)。結(jié)論:以TDA為蒂時,DICV更為粗大、適于吻合,加之遠(yuǎn)端壞死面積更大,便于觀察,其更適合作為大鼠背部三血管體穿支遠(yuǎn)端非生理性增壓模型。該模型構(gòu)建后證實,這種非生理性增壓方式能改善穿支跨區(qū)皮瓣遠(yuǎn)端血運,促進(jìn)其存活。本組實驗證實,潛在區(qū)內(nèi)靜脈在動脈化增壓后,choke vessel Ⅰ區(qū)的形態(tài)變化未因增壓作用而發(fā)生明顯的形態(tài)學(xué)變化。而choke vessel Ⅱ區(qū)粗大的真性吻合較對照組出現(xiàn)時間明顯提前。通過非生理性增壓方式,choke vessel Ⅱ區(qū)12h才緩慢開放,動力區(qū)與潛在區(qū)建立血流信號連接,3天后潛在區(qū)的血流量才與近端趨于平衡。前期潛在區(qū)仍處于低灌注的狀態(tài)。特別是1天內(nèi)激光多普勒血流檢測及氧化鉛造影均證實choke vessel Ⅱ區(qū)血流灌注不佳。而通過激光多普勒血流量測量可發(fā)現(xiàn),盡管潛在區(qū)血流量較近端兩區(qū)血流量要低,但仍能明顯的改善皮瓣遠(yuǎn)端血流量。同時3h時choke vessel Ⅱ區(qū)即有明顯的血流增加�？梢娡ㄟ^開放部分細(xì)小血管即可使?jié)撛趨^(qū)增壓后血液得到回流,從解決了早期皮瓣臃腫情況、緩解皮瓣的血流瘀滯。促進(jìn)皮瓣的早期存活。這種增壓方式亦能通過血管新生,結(jié)合choke區(qū)血管重塑、擴張,有效改善皮瓣整體血供。在這種情況下,即使增壓血管閉塞,仍能有效的維持皮瓣遠(yuǎn)端血運。這成為皮瓣遠(yuǎn)期存活的重要機制。通過比較發(fā)現(xiàn)超引流能部分改善潛在區(qū)血流灌注,超引流能促進(jìn)皮瓣遠(yuǎn)端潛在區(qū)單一血管體內(nèi)一定區(qū)域范圍的皮瓣組織血流灌注改善,存進(jìn)一定范圍的皮瓣存活。單非整個血管體。而相較下,通過實驗證實,對皮瓣遠(yuǎn)端潛在區(qū)內(nèi)穿支靜脈的伴行靜脈進(jìn)行非生理性增壓,能獲得整個穿支體的存活。臨床工作中,其可作為存進(jìn)遠(yuǎn)端灌注的優(yōu)選術(shù)式。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R687;R-332
【圖文】：
逑計算血管外徑寬度。即測量血管外徑寬度＋測量留置針內(nèi)芯寬度。血管測量寬度逡逑平面定于血管最擴張?zhí)幫鈴�。（見圖１）。逡逑ＴＤＶ邐ＤＣＩＶ逡逑圖１胸背靜脈和旋髂深靜脈顯微鏡下以留置針為對照觀察（比例尺＝ｌｃｍ）逡逑１．邋１．邋３皮瓣模型制作與分組逡逑Ａ組：以胸背動脈（ＴＤＡ／ＴＤＶ）穿支為蒂（ｎ＝６）；Ｂ組：以旋髂深動脈（ＤＣＩＡ／ＤＣＩＶ）逡逑穿支為蒂（ｎ＝６）。隨機取健康的ＳＤ大鼠，麻醉后俯臥位固定，脫毛，消毒，鋪逡逑巾。以背部后正中線為內(nèi)側(cè)界線；旁開２．邋５ｃｍ做平行線為外側(cè)界線；兩側(cè)髂脊連逡逑線為下界線；兩側(cè)肩胛下角連線為上界線。結(jié)扎旋髂深動靜脈（ＤＣＩＡ／ＤＣＩＶ）或逡逑胸背動靜脈（ＴＤＡ／ＴＤＶ）及肋間動靜脈（ＩＣＡ／ＩＣＶ），以胸背血管體（ＴＤＡ／ＴＤＶ）或逡逑旋髂深血管體（ＤＣＩＡ／ＤＣＩＶ）為蒂，分離蒂部以外組織。結(jié)扎其他血管，徹底止血。逡逑在大鼠背部形成一約１１邋Ｘ２．邋５ｃｍ大小單一血管蒂的軸型穿支皮瓣。以４－０醫(yī)用慕逡逑絲縫線，將皮瓣原位縫合。創(chuàng)面涂抹金霉素軟膏，預(yù)防術(shù)后感染。腹腔內(nèi)注射生逡逑理鹽水５０ｍｌ／ｋｇ抗休克治療。術(shù)后實驗大鼠單籠喂養(yǎng)。逡逑１．邋１．邋４皮瓣的大體觀察逡逑術(shù)后１－７天，肉眼觀察皮瓣存活情況，包括皮瓣的顏色、組織張力、毛細(xì)血逡逑管反應(yīng)及水腫情況。逡逑１．１．５皮瓣壞死的標(biāo)準(zhǔn)及其成活率的計算逡逑皮瓣的壞死標(biāo)準(zhǔn)包括：皮瓣膚色變黑、結(jié)黑痂、質(zhì)地變硬、無明顯毛細(xì)血管逡逑反應(yīng)及切緣無明顯出血。將大鼠麻醉后，用數(shù)碼相機（佳能５Ｄ－ＩＩ、佳能ＥＦ邋２４－７０ｍｍ逡逑ｆ／２．８Ｌ邋ＵＳＭ邋鏡頭）拍攝皮瓣全面積
１．２．１鏡下ＴＤＶ和ＤＣＩＶ血管外徑與留置針內(nèi)芯比值的大小比較逡逑鏡下檢測邋ＴＤＶ邋比值為邋０．４２７±０．邋１０，ＤＣＩＶ邋比值為邋０．邋６３２±０．邋０６，邋；？＝０．邋００２，逡逑兩者間差異具有明顯統(tǒng)計學(xué)差異。（見圖２）逡逑１９逡逑
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本文編號：
2741931
