【摘要】：近年來,大氣壓低溫等離子體(cold atmospheric plasma,CAP)在醫(yī)學(xué)尤其是皮膚科中的應(yīng)用研究已成為國內(nèi)外的研究熱點。研究表明CAP可適用于皮膚傷口殺菌消毒、創(chuàng)傷愈合、組織再生以及治療各種皮膚腫瘤性和炎癥性疾病等。銀屑病是一種常見的炎性增生性皮膚病,其發(fā)病機(jī)制尚未完全明了,現(xiàn)有的治療手段均無法完全治愈銀屑病。角質(zhì)形成細(xì)胞(keratinocyte,KC)過度增殖,表皮增厚是銀屑病皮損的特征性表現(xiàn)之一。研究表明CAP處理可以抑制細(xì)胞增殖,誘發(fā)細(xì)胞凋亡;此外,還有研究表明CAP中的活性氧(reactive oxygen species,ROS)具有免疫調(diào)節(jié)的作用,因此推測CAP可用于治療銀屑病。本課題主要針對CAP對KC增殖的影響來研究其對銀屑病的治療作用,進(jìn)行了大氣壓等離子體射流(atmospheric pressure plasma jet,APPJ)對Ha Ca T細(xì)胞增殖和咪喹莫特(IMQ)誘導(dǎo)的銀屑病樣小鼠模型的影響研究。主要內(nèi)容和結(jié)果概括如下:1.研究APPJ裝置的放電特性,使用APPJ處理培養(yǎng)基得到等離子體活化培養(yǎng)基(plasma activated medium,PAM),檢測不同處理時間PAM的PH值和主要活性物質(zhì)的含量。結(jié)果表明,隨著處理時間延長,PAM中各種活性物質(zhì)的含量逐漸增多,PH值并無顯著改變。2.檢測PAM對Ha Ca T細(xì)胞增殖的影響及相關(guān)作用機(jī)理。結(jié)果表明,PAM處理可以誘導(dǎo)細(xì)胞形態(tài)變化、抑制細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,并且這種作用是通過誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)ROS水平上升引起的,呈PAM強(qiáng)度依賴。3.構(gòu)建兩種常規(guī)的細(xì)胞炎癥模型模擬銀屑病皮損的炎性微環(huán)境,檢測PAM對細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果表明,與正常的Ha Ca T細(xì)胞相比,炎性狀態(tài)下的細(xì)胞對相同強(qiáng)度的PAM更加敏感。推測是由于LPS或TNF-α誘導(dǎo)后,細(xì)胞內(nèi)ROS水平增高,處于氧化應(yīng)激狀態(tài)而對PAM的耐受性降低所引起。正常Ha Ca T細(xì)胞和炎性誘導(dǎo)Ha Ca T細(xì)胞的共培養(yǎng)體系,也進(jìn)一步驗證其對PAM的敏感性差異。4.根據(jù)PASI評分、HE染色切片考察APPJ對IMQ誘導(dǎo)的銀屑病樣小鼠模型的治療作用。結(jié)果表明,IMQ誘導(dǎo)的模型組小鼠出現(xiàn)典型的銀屑病樣皮損,APPJ處理后皮損PASI積分下降,HE染色趨于正常,表明APPJ對IMQ誘導(dǎo)的銀屑病樣小鼠模型具有治療作用。5.通過免疫組化和免疫熒光檢測APPJ對皮損局部KC增殖(Ki67)及凋亡(active caspase-3)情況的影響。結(jié)果顯示,模型組小鼠表皮Ki67陽性細(xì)胞比例升高,APPJ處理后,Ki67陽性細(xì)胞比例顯著降低,但表皮細(xì)胞的凋亡無明顯變化。表明APPJ主要通過抑制皮損KC異常增殖來發(fā)揮治療作用。6.采用免疫組化方法檢測APPJ對銀屑病樣皮損局部炎性狀態(tài)及血管新生情況的影響。結(jié)果顯示,APPJ處理后皮損局部CD3陽性細(xì)胞浸潤明顯減少;炎性因子TNF-α、IL-17和IL-22表達(dá)明顯降低;新生血管也明顯減少。表明APPJ還可以通過抗炎、抗血管新生來發(fā)揮治療作用。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R758.63;R-332
【圖文】：

述一種常見的由遺傳和環(huán)境因素等共同作用所致的炎性增統(tǒng)計，銀屑病的全球發(fā)病率為 0.09%-5.1%，我國發(fā)病率內(nèi)的世界各地發(fā)病率均呈逐年升高趨勢[3-5]。各種類尋常型銀屑病，其在臨床上以紅色丘疹或斑塊上覆有多害可泛發(fā)全身，可累及皮膚附屬器和黏膜，并可伴不同要的組織病理表現(xiàn)有：表皮過度增殖，表皮及真皮的炎形成[6, 7]。銀屑病臨床病程表現(xiàn)為慢性復(fù)發(fā)和緩解交者帶來嚴(yán)重的心理和生活負(fù)擔(dān)。銀屑病的發(fā)病機(jī)制較前一般認(rèn)為銀屑病是在遺傳與環(huán)境等多種因素共同影形成細(xì)胞（Keratinocyte, KC）的異常相互作用引起的α 信號通路在其中發(fā)揮重要作用，如圖 1.1[1, 8-10]

圖 1.2 銀屑病皮損 KC 過度增殖及分化異常模式圖[6]雖然在銀屑病發(fā)病過程中，KC 可能只被視為異常免疫激活的下游細(xì)胞，被認(rèn)為是IL-17、IL-22 等效應(yīng)細(xì)胞因子的靶細(xì)胞，而不是銀屑病發(fā)病的主要驅(qū)動因子。然而近來也有一些研究表明，KC 異常分化與基底層 KC 的表觀遺傳狀態(tài)密切相關(guān)，KC 中的某些信號異常是銀屑病發(fā)病機(jī)制中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。如 KC 中的 TRAF6 信號對于咪喹莫特誘導(dǎo)的小鼠銀屑病樣皮炎的發(fā)生至關(guān)重要[13]。KC 內(nèi)源性異常細(xì)胞信號轉(zhuǎn)錄調(diào)控可能是遺傳易感性人群發(fā)生銀屑病的主要原因，如通過表觀遺傳調(diào)控 KC 中 IL-23 的表達(dá)參與銀屑病的發(fā)生；KC 中 Tnip1 的缺失將導(dǎo)致 IL-17 的誘導(dǎo)的基因表達(dá)失調(diào)、趨化因子過度產(chǎn)生以及明顯的銀屑病樣炎癥[14-16]。同時 KC 和 IL-23/IL-17 炎癥軸之間的相互作用是銀屑病皮損微環(huán)境中 IL-17 介導(dǎo)的炎癥循環(huán)的核心。這不僅表現(xiàn)在皮膚炎性細(xì)胞分泌的炎性細(xì)胞因子主要作用于 KC 來產(chǎn)生下游的級聯(lián)放大作用，KC 自身也可以分泌大量促炎性因子并通過自分泌和旁分泌作用形成一個惡性循環(huán)導(dǎo)致表皮異常增

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本文編號：2741809