發(fā)布時(shí)間：2017-03-29 01:03

  本文關(guān)鍵詞：高尿酸血癥的代謝組學(xué)研究及尿酸性腎損傷動物模型的構(gòu)建，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：高尿酸血癥是當(dāng)尿酸生成過多或排泄減少時(shí)所致的一種代謝性疾病,其發(fā)病率呈逐年上升的趨勢。高尿酸血癥與痛風(fēng)、腎功能障礙、心血管疾病、高血壓、高血脂癥、胰島素抵抗、糖尿病、代謝綜合癥密切相關(guān)。代謝組學(xué)作為一種系統(tǒng)生物學(xué),關(guān)注體內(nèi)內(nèi)源性小分子的變化規(guī)律,常被用來研究疾病的發(fā)病機(jī)制、篩選疾病早期標(biāo)志物和闡釋中藥的藥理活性等,在研究代謝性疾病方面具有獨(dú)特的優(yōu)勢。高尿酸血癥傳統(tǒng)觀點(diǎn)上往往只被看作是腎功能減退的標(biāo)志。近年來的研究表明,高尿酸血癥在腎病的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮著重要作用,是獨(dú)立的危險(xiǎn)因素。而西藥治療高尿酸血癥在臨床實(shí)踐中所表現(xiàn)出的不良反應(yīng),促使人們尋找更好、更安全的降尿酸藥物。因此,高尿酸血癥及其與腎損傷的關(guān)系及如何尋找更有效、更安全的降尿酸藥物引起了人們極大的興趣。中藥作為中華民族的瑰寶,在傳統(tǒng)實(shí)踐中自古就有對痛風(fēng)的治療。高尿酸血癥誘導(dǎo)的尿酸性腎損傷動物模型是研究高尿酸血癥與尿酸性腎病的關(guān)系,降尿酸藥物篩選和藥效評價(jià)的基礎(chǔ)。本研究首先利用代謝組學(xué)的方法對尿酸酶抑制劑氧嗪酸鉀誘導(dǎo)的高尿酸血癥進(jìn)行代謝組學(xué)研究。其次通過給藥不同劑量、不同給藥周期氧嗪酸鉀及聯(lián)合尿酸給藥的方法試圖構(gòu)建尿酸性腎損傷模型,為相關(guān)問題的研究提供了依據(jù)。1.采用不同劑量(250mg/kg、500mg/kg)尿酸酶抑制劑氧嗪酸鉀腹腔注射給藥一周。其中高劑量模型組(500mg/kg)成功誘導(dǎo)出高尿酸血癥模型。使用UHPLC-Q-TOF/MS的方法對血清樣品進(jìn)行代謝組學(xué)的分析,共發(fā)現(xiàn)21種差異代謝物,涉及氨基酸代謝、脂質(zhì)代謝、能量代謝等。2.采用不同劑量(250mg/kg、400mg/kg)氧嗪酸鉀灌胃一周。高劑量模型組(400mg/kg)成功誘導(dǎo)出高尿酸血癥模型。兩個(gè)模型組肌酐、尿素氮雖有所增加,但與對照組比沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,不能誘導(dǎo)出尿酸性腎損傷模型。3.采用氧嗪酸鉀(600mg/kg)灌胃兩周、三周。與對照組相比,兩模型組尿酸含量均顯著升高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,提示高尿酸血癥造模成功。兩模型組中肌酐、尿素氮均下降,尿素氮均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,其中三周模型組肌酐有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。4.采用單獨(dú)給藥氧嗪酸鉀與氧嗪酸鉀聯(lián)合不同劑量尿酸給藥對比灌胃一周。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明氧嗪酸鉀單獨(dú)給藥及氧嗪酸鉀聯(lián)合低中劑量尿酸(250mg/kg、500mg/kg)給藥,與對照組比,尿酸含量雖有升高,但未有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。灌胃氧嗪酸鉀聯(lián)合高劑量尿酸(1000mg/kg)的高劑量模型組,與對照組相比,尿酸有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,提示高尿酸血癥造模成功。但所有的模型組中肌酐、尿素氮與對照組相比沒有顯著變化。本文中我們利用給藥尿酸酶抑制劑氧嗪酸鉀的方法成功誘導(dǎo)出高尿酸血癥模型,其中造模方式以灌胃給藥較好,灌胃劑量維持在300mg/kg到400mg/kg較好。利用代謝組學(xué)的方法對高尿酸血癥進(jìn)行了研究,發(fā)現(xiàn)的21種生物標(biāo)志物,為理解高尿酸血癥分子機(jī)制及其與其他疾病的相關(guān)性,發(fā)現(xiàn)疾病早期生物標(biāo)志物提供了線索。采用單獨(dú)給藥不同劑量、不同給藥周期氧嗪酸鉀及其聯(lián)合尿酸給藥的方法均不能構(gòu)建出高尿酸血癥誘導(dǎo)的尿酸性腎損傷動物模型,為相關(guān)方面的研究提供了思考和借鑒。
【關(guān)鍵詞】：高尿酸血癥 尿酸性腎損傷動物模型 代謝組學(xué) UHPLC-Q-TOF/MS
【學(xué)位授予單位】：上海應(yīng)用技術(shù)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R589.7;R-332
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-14
• 第一章 前言14-25
• 一 課題研究背景14-24
• 1 高尿酸血癥概況14-18
• 1.1 高尿酸血癥的定義14
• 1.2 尿酸的生成與排泄14-15
• 1.3 高尿酸血癥的發(fā)病機(jī)制15-16
• 1.4 高尿酸血癥與相關(guān)疾病16
• 1.5 高尿酸血癥的治療策略16-18
• 2 代謝組學(xué)概況18-21
• 2.1 代謝組學(xué)定義與特點(diǎn)18
• 2.2 代謝組學(xué)的發(fā)展歷程與研究現(xiàn)狀18-19
• 2.3 代謝組學(xué)的研究方法19-21
• 2.3.1 樣品的采集和前處理19
• 2.3.2 代謝組學(xué)的分析技術(shù)平臺19-20
• 2.3.3 數(shù)據(jù)的預(yù)處理和多元統(tǒng)計(jì)分析20-21
• 2.3.4 標(biāo)志物的識別和途徑分析21
• 3 代謝組學(xué)的應(yīng)用21-24
• 3.1 中藥現(xiàn)代化21-23
• 3.1.1 中藥物質(zhì)基礎(chǔ)和中藥的質(zhì)量控制21-22
• 3.1.2 中藥安全性評價(jià)及毒理學(xué)研究22
• 3.1.3 中醫(yī)病癥研究22
• 3.1.4 中醫(yī)的藥效評價(jià)22-23
• 3.2 疾病診斷23
• 3.3 微生物領(lǐng)域23-24
• 二 本課題的研究內(nèi)容及意義24-25
• 第二章 基于UHPLC-Q-TOF/MS技術(shù)的氧嗪酸鉀誘導(dǎo)高尿酸血癥小鼠血清代謝組學(xué)研究25-35
• 一 引言25
• 二 實(shí)驗(yàn)部分25-35
• 1 材料和方法25-27
• 1.1 試劑25
• 1.2 氧嗪酸鉀溶液的配制25-26
• 1.3 實(shí)驗(yàn)分組和高尿酸血癥模型的建立26
• 1.4 生物樣本的采集與檢測26
• 1.5 代謝組學(xué)的樣品前處理26
• 1.6 色譜和質(zhì)譜條件26
• 1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理26-27
• 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果27-33
• 2.1 血清尿酸結(jié)果27
• 2.2 血清代謝組學(xué)分析27-33
• 3 討論33-35
• 第三章 尿酸性腎損傷動物模型的構(gòu)建35-47
• 一 引言35
• 二 高尿酸血癥動物模型的研究進(jìn)展35-38
• 1 動物的選擇35-36
• 2 造模方法36-38
• 2.1 尿酸酶的抑制或基因敲出36
• 2.1.1 尿酸酶抑制劑36
• 2.1.2 尿酸酶基因敲出36
• 2.2 補(bǔ)充外源性尿酸或尿酸前體物質(zhì)36-37
• 2.2.1 補(bǔ)充外源性尿酸36-37
• 2.2.2 補(bǔ)充尿酸前體物質(zhì)腺嘌呤37
• 2.2.3 黃嘌呤、次黃嘌呤37
• 2.3 酵母37
• 2.4 果糖37
• 2.5 藥物37-38
• 3 高尿酸血癥誘導(dǎo)的腎損傷動物模型的評價(jià)38
• 三 實(shí)驗(yàn)部分38-47
• (一) 不同劑量氧嗪酸鉀造模實(shí)驗(yàn)38-40
• 1 材料和方法38-39
• 1.1 試劑38
• 1.2 氧嗪酸鉀混懸液的制備38
• 1.3 實(shí)驗(yàn)分組和高尿酸血癥動物模型的建立38
• 1.4 生物樣本的收集及檢測38-39
• 1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理39
• 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果39-40
• 2.1 血清尿酸結(jié)果39
• 2.2 肌酐、尿素氮含量的變化39-40
• 3 討論40
• (二) 高劑量氧嗪酸鉀不同給藥周期造模實(shí)驗(yàn)40-43
• 1 材料和方法41
• 1.1 試劑41
• 1.2 氧嗪酸鉀混懸液的制備41
• 1.3 實(shí)驗(yàn)分組和高尿酸血癥動物模型的建立41
• 1.4 生物樣本的收集及檢測41
• 1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理41
• 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果41-43
• 2.1 小鼠血清尿酸結(jié)果41-42
• 2.2 肌酐、尿素氮含量的變化42-43
• 3 討論43
• (三) 氧嗪酸鉀聯(lián)合尿酸造模實(shí)驗(yàn)43-47
• 1 材料和方法43-44
• 1.1 試劑43
• 1.2 氧嗪酸鉀混懸液的制備43
• 1.3 實(shí)驗(yàn)分組和高尿酸血癥動物模型的建立43-44
• 1.4 生物樣本的收集及檢測44
• 1.5 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)處理44
• 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果44-45
• 2.1 血清尿酸結(jié)果44-45
• 2.2 肌酐、尿素氮的含量變化45
• 3 討論45-47
• 全文結(jié)論47-49
• 參考文獻(xiàn)49-57
• 致謝57-58
• 攻讀學(xué)位期間所開展的科研項(xiàng)目和發(fā)表的學(xué)術(shù)論文58

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8 袁自宏;g

本文編號：273356