【摘要】：目的:尋求有效、穩(wěn)定的產(chǎn)褥期抑郁模型的構(gòu)建方法,探究糖皮質(zhì)激素受體(GR)在產(chǎn)褥期抑郁發(fā)病中的作用;并進(jìn)一步驗(yàn)證SIRT1能否通過靶向調(diào)控GR改善產(chǎn)褥期抑郁的癥狀。方法:(1)通過兩種方式構(gòu)建產(chǎn)褥期抑郁模型:(1)產(chǎn)后第1至第21天CORT(Corticosterone)注射誘導(dǎo)產(chǎn)褥期抑郁藥理學(xué)應(yīng)激模型;(2)去勢手術(shù)+雌激素撤退(激素撤退法)構(gòu)建產(chǎn)褥期抑郁模型,對比抑郁相關(guān)的行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,尋找最為有效、穩(wěn)定的產(chǎn)褥期抑郁模型的構(gòu)建方法。(2)以雌激素撤退構(gòu)建的產(chǎn)褥期抑郁模型鼠為研究對象,海馬腦區(qū)埋套管、微注射GR抑制劑RU486,通過行為學(xué)實(shí)驗(yàn)、分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證GR(Glucocorticoid receptor)是否為產(chǎn)褥期抑郁的潛在調(diào)控靶點(diǎn)。(3)HEK293T細(xì)胞系脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法過表達(dá)SIRT1和GR質(zhì)粒,Co-IP技術(shù)驗(yàn)證SIRT1與GR是否存在直接的相互作用,評價(jià)SIRT1過表達(dá)能否誘導(dǎo)GR轉(zhuǎn)錄及翻譯水平上調(diào)。(4)以雌激素撤退構(gòu)建的產(chǎn)褥期抑郁模型大鼠為研究對象,海馬腦區(qū)埋套管、微注射SIRT1激動(dòng)劑SRT2104,行為學(xué)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證活化SIRT1能否拮抗產(chǎn)褥期抑郁的癥狀,分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)明確SIRT1是否通過調(diào)控GR發(fā)揮的抗產(chǎn)褥期抑郁的作用。結(jié)果:(1)與對照組相比,CORT注射組大鼠在強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)和懸尾實(shí)驗(yàn)中的靜止不動(dòng)時(shí)間無顯著差異,該方法無法有效誘導(dǎo)產(chǎn)褥期抑郁模型;而激素撤退法構(gòu)建的產(chǎn)褥期抑郁模型鼠在強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)和懸尾實(shí)驗(yàn)中靜止不動(dòng)時(shí)間較對照組顯著增加,可以有效誘導(dǎo)抑郁模型。(2)曠場實(shí)驗(yàn)和高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:激素撤退法構(gòu)建的產(chǎn)褥期抑郁模型鼠存在焦慮樣情緒,其海馬組織GR表達(dá)量顯著降低,SIRT1表達(dá)量無明顯改變;大鼠微注射GR抑制劑-RU486表現(xiàn)為焦慮樣情緒(曠場實(shí)驗(yàn)和高架十字迷宮實(shí)驗(yàn))及抑郁樣情緒(強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)和懸尾實(shí)驗(yàn)),上述行為學(xué)表現(xiàn)伴隨著海馬組織GR表達(dá)量顯著降低,SIRT1表達(dá)量無明顯改變。(3)Co-IP結(jié)果顯示GR和SIRT1之間存在直接的聯(lián)系,RT-qPCR及Western blot結(jié)果顯示SIRT1增加GR的轉(zhuǎn)錄及表達(dá),而GR卻無法增加SIRT1的轉(zhuǎn)錄及表達(dá),即SIRT1靶向調(diào)控GR參與了產(chǎn)褥期抑郁的調(diào)控。(4)糖水偏好實(shí)驗(yàn)、強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)和懸尾實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:微注射SIRT1激動(dòng)劑-SRT2104能夠明顯降低大鼠抑郁樣行為,并伴隨海馬腦區(qū)GR和SIRT1表達(dá)上調(diào);然而曠場實(shí)驗(yàn)和高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明SIRT1活化劑無法改善產(chǎn)褥期抑郁大鼠焦慮樣情緒。結(jié)論:(1)去勢手術(shù)+雌激素撤退(激素撤退法)構(gòu)建的產(chǎn)褥期抑郁模型能夠有效模擬大鼠產(chǎn)褥期抑郁和焦慮樣癥狀,GR為產(chǎn)褥期抑郁的潛在調(diào)控靶點(diǎn)(2)SIRT1通過靶向調(diào)控GR可以有效緩解產(chǎn)褥期抑郁樣行為,而對焦慮情緒無明顯改善作用。
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R749.4;R-332;R714.6
【圖文】：

圖3.1大鼠腦區(qū)套管埋置手術(shù)Figure 3.1 The surgery for osmotic pump3.2.3實(shí)驗(yàn)分組實(shí)驗(yàn)分為三組，即：①HSP 組（激素模擬妊娠組）：苯甲酸雌二醇（EB） 2.5ug + 孕激素（P4）4 mg 皮下注射 16 天，EB 50 ug 皮下注射 12 天。②HSP-RU486組（激素模擬妊娠并微注射 GR 抑制劑組）：EB 2.5 ug + P4 4 mg 皮下注射 16天，EB 50 ug 皮下注射 12 天。于 24-28 天通過預(yù)先埋置的套管向雙側(cè)海馬微注射糖皮質(zhì)激素受體抑制劑 RU486。③EW 組（雌激素撤退組）：EB2.5 ug + P4 4 mg皮下注射 16 天，EB 50 ug 皮下注射 7 天。3.2.4模型建立及給藥方式

江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文39圖4.1 Co-IP實(shí)驗(yàn)證明SIRT1與GR蛋白之間存在直接聯(lián)系Figure 4.1 Co-IPexperiment demonstrates GR and SIRT1 physically interact with eachother.SIRT1可以增強(qiáng)GR轉(zhuǎn)錄活性向 6 孔板中 HEK-293T 細(xì)胞 2 孔轉(zhuǎn)染 3 ug GR-Flag 過表達(dá)質(zhì)粒，2 孔轉(zhuǎn)染 3ug SIRT1-HA 過表達(dá)質(zhì)粒,剩余 2 孔轉(zhuǎn)染對照質(zhì)粒。轉(zhuǎn)染 24h 后，收集細(xì)胞提取RNA。結(jié)果顯示向細(xì)胞轉(zhuǎn)染 SIRT1 過表達(dá)質(zhì)粒后，細(xì)胞內(nèi) GR 轉(zhuǎn)錄水平增高，而向細(xì)胞轉(zhuǎn)染 GR 過表達(dá)質(zhì)粒后，細(xì)胞內(nèi) SIRT1 轉(zhuǎn)錄水平無明顯變化。4.3.2圖4.2 RT-qPCR實(shí)驗(yàn)證明SIRT1可以增強(qiáng)GR轉(zhuǎn)錄。Figure 4.2 RT-q PCR experiment proved that SIRT1 could enhanc GR transcription al level

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 楊榮;王志華;史金鳳;;海馬神經(jīng)元新生在產(chǎn)后抑郁中的研究進(jìn)展[J];中國生育健康雜志;2017年03期

2 張國雙;楊坤;;抗抑郁新靶點(diǎn)-糖皮質(zhì)激素受體[J];國際精神病學(xué)雜志;2015年01期

3 倪保臻;宋玉萍;;心理社會因素對產(chǎn)后抑郁的影響[J];中國健康心理學(xué)雜志;2012年08期

本文編號：2723197