【摘要】：研究目的本研究通過將不同組織來源的人間充質(zhì)干細(xì)胞在不同濃度鉀離子(K+)人工內(nèi)淋巴液中進(jìn)行體外培養(yǎng),比較不同組織來源的人間充質(zhì)干細(xì)胞在人工內(nèi)淋巴液中生存能力的差別,并探索最適宜間充質(zhì)干細(xì)胞生存的內(nèi)淋巴液K+濃度。研究方法為了比較不同來源的人間充質(zhì)干細(xì)胞在人工內(nèi)淋巴液中生存能力的差別,我們從人脂肪、骨髓、胎盤和臍帶等4種不同組織中提取了間充質(zhì)干細(xì)胞,并對(duì)其進(jìn)行表型和分化能力鑒定。用MTS細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)4種間充質(zhì)干細(xì)胞在不同K+濃度(5～153.8 mM)的人工內(nèi)淋巴液中增殖能力的區(qū)別。經(jīng)Annexin V-FITC/PI雙染法觀察4種間充質(zhì)干細(xì)胞在不同K+濃度的人工內(nèi)淋巴液中細(xì)胞凋亡率的差別。Caspase-3活性法檢測(cè)4種間充質(zhì)干細(xì)胞在人工內(nèi)淋巴液中的凋亡是否與caspase-3凋亡通路相關(guān)。Elisa法探索間充質(zhì)干細(xì)胞在人工內(nèi)淋巴的生物學(xué)行為是否與炎癥因子相關(guān)。最后,透射電鏡下觀察間充質(zhì)干細(xì)胞在不同K+濃度的人工內(nèi)淋巴液體外培養(yǎng)后,其亞細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變。研究結(jié)果脂肪、骨髓、胎盤、臍帶來源的4種人間充質(zhì)干細(xì)胞均可表達(dá)特征性的表面抗原,并均有成脂成骨分化能力。4種不同來源的間充質(zhì)干細(xì)胞在人工內(nèi)淋巴液中增殖、凋亡等生物學(xué)行為無(wú)明顯差別。當(dāng)改變?nèi)斯?nèi)淋巴液K+濃度至相對(duì)高(55 mM～130 mM)時(shí),間充質(zhì)干細(xì)胞凋亡率較正常對(duì)照組相比無(wú)明顯增高。間充質(zhì)干細(xì)胞在不同濃度K+的人工內(nèi)淋巴液中體外培養(yǎng)時(shí),增殖能力均受抑制。間充質(zhì)干細(xì)胞在相對(duì)高K+濃度(55 mM～130 mM)的人工內(nèi)淋巴液中體外培養(yǎng)時(shí),細(xì)胞質(zhì)內(nèi)可產(chǎn)生大量糖原顆粒。不同濃度K+人工內(nèi)淋巴液組對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞IL-2,IL-6,IL-10和TNF-α的分泌無(wú)明顯影響,初步認(rèn)為其生物學(xué)行為的改變與炎癥反應(yīng)無(wú)顯著相關(guān)性。結(jié)論不同組織來源的間充質(zhì)干細(xì)胞在人工內(nèi)淋巴液中的生存能力無(wú)明顯差別。而改變?nèi)斯?nèi)淋巴液中K+至相對(duì)高濃度時(shí),即55～130 mM,可顯著提高間充質(zhì)干細(xì)胞的體外生存能力;但不同濃度K+人工內(nèi)淋巴液均抑制間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖。
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R329.2
【圖文】：

中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院博士研究生學(xué)位論文結(jié)果與分析逡逑常體外培養(yǎng)條件下ＡＭＳＣｓ，邋ＢＭＳＣｓ，邋ＰＭＳＣｓ，邋ＵＣ－ＭＳＣｓ的形態(tài)特點(diǎn)逡逑不同組織提取的原代人來源ＭＳＣｓ生長(zhǎng)過程相似。ＭＳＣｓ接種后，２壁。培養(yǎng)３天后，細(xì)胞數(shù)量增多，并且光鏡下可見到大量均一的梭形。待培養(yǎng)至８０％－９０％融合后進(jìn)行傳代。ＭＳＣｓ傳代后，生長(zhǎng)加速，長(zhǎng)，光鏡下，細(xì)胞外形呈梭形，類似成纖維細(xì)胞（圖１）。逡逑

光鏡下可見誘導(dǎo)后的細(xì)胞胞漿內(nèi)有圓形脂滴形成，折光性強(qiáng)。油紅０染色后，逡逑光鏡下可見細(xì)胞內(nèi)含橘紅色深染脂滴，其中，ＡＭＳＣ脂滴形成最多。ＭＳＣｓ經(jīng)成骨逡逑誘導(dǎo)后，細(xì)胞無(wú)明顯形態(tài)變化。在ＡＬＰ染色可見ＭＳＣｓ胞i}呈藍(lán)色（圖２）。逡逑ＡＭＳＣ邐ＢＭＳＣ邐ＰＭＳＣ邐ＵＣ－ＭＳＣ逡逑�！觥鼋甒逡逑Ｉ、，~栧義賢跡玻粒停櫻茫�，n停櫻茫�，ＰＭ衙ｓ，ＵＣ－Ｍ衙ｓ成脂（Ａ）航y(tǒng)曬牽ǎ攏┓只ㄇ榭�。（Ａ：辶x嫌禿歟叭舊�；n哄澹粒蹋腥舊╁義希保插義

本文編號(hào)：2718813