【摘要】：第一部分外耳道真菌病大鼠模型的建立以及病理分析目的:建立模擬人外耳道真菌病的外耳道真菌病動物模型,觀察外耳道真菌病動物模型中疾病的自然病程及臨床特征變化,在外耳道真菌感染的不同階段進(jìn)行組織病理學(xué)檢查,以期其他外耳道真菌病研究建立一定基礎(chǔ)。方法:將36只wistar大鼠隨機(jī)分為免疫抑制實驗組、普通實驗組、對照組3組,每組12只。免疫抑制組在實驗開始前給予免疫抑制組大鼠腹腔注射地塞米松(30mg/kg),連續(xù)注射3天。用磨砂棍搔刮大鼠雙側(cè)外耳道至稍紅,免疫抑制組及普通實驗組大鼠雙側(cè)外耳道均滴入濃度為1.0*10^8CFU/ml的煙曲霉菌菌絲懸液50ul,同時對照組雙側(cè)大鼠外耳道滴入生理鹽水50ul,每日應(yīng)用電耳鏡對大鼠進(jìn)行觀察,隔天按照大鼠情況進(jìn)行評分并記錄,分別在實驗進(jìn)行過程的第7天、第14天、第21天從3組中隨機(jī)抽取大鼠取外耳道組織并進(jìn)行組織病理觀察描述。全部實驗數(shù)據(jù)均采用SPSS 24.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行具體分析及處理。結(jié)果:對3組臨床評分進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析,免疫抑制組和普通實驗組的臨床評分平均分均高于對照組,且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.01),免疫抑制組臨床評分平均分高于普通實驗組,且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05);對不同時期的臨床評分進(jìn)行分析,免疫抑制組、普通實驗組在實驗第14天左右臨床評分呈現(xiàn)明顯升高情況,隨后呈現(xiàn)下降趨勢;HE染色切片分析表明外耳道真菌病建模大鼠的外耳道皮膚表現(xiàn)為復(fù)層鱗狀上皮增生,伴有表面的角化過度,部分區(qū)域可見延伸的上皮角,表皮下毛細(xì)血管有增生和擴(kuò)張,部分可見炎癥細(xì)胞的浸潤。結(jié)論:1.通過砂紙搔刮、真菌懸液滴耳可在免疫抑制大鼠及普通大鼠中成功建立外耳道真菌病大鼠模型。2.外耳道真菌病病程呈現(xiàn)先加重后減輕的變化趨勢,感染在病程2周左右最重,在第3周可有明顯好轉(zhuǎn),呈現(xiàn)一定程度的自愈傾向。第二部分免疫組化法檢測大鼠外耳道真菌模型蠟塊中TLR2、TLR4的表達(dá)目的:通過觀察在外耳道真菌病動物模型的不同分組、病程中TLR2、TLR4的分布、表達(dá)情況,討論兩者在外耳道真菌病的發(fā)病過程中可能起到的作用以期對臨床研究提供實驗依據(jù)。方法:對免疫抑制組、普通實驗組及對照組的wistar大鼠在實驗過程的第7天、第14天、第21天從3組中隨機(jī)抽取的大鼠取外耳道組織通過IHC方法對外耳道TLR2、TLR4表達(dá)進(jìn)行檢測,對其結(jié)果進(jìn)行等級評價并將結(jié)果轉(zhuǎn)化為AOD值,對TLR2、TLR4的等級資料及AOD值采用SPSS 24.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行具體分析及處理。結(jié)果:通過觀察免疫組化切片,發(fā)現(xiàn)TLR2、TLR4主要在外耳道皮膚的角質(zhì)層、顆粒層、棘細(xì)胞層及基底層的胞質(zhì)、胞膜中呈現(xiàn)不同程度的表達(dá),棘細(xì)胞層最為明顯;建模組即免疫抑制組及普通實驗組TLR2、TLR4陽性表達(dá)率為100%,(p0.01)對照組陽性率約為50%,且主要集中在實驗早期;建模組TLR2、TLR4表達(dá)強(qiáng)度明顯高于對照組(p0.01);對3組AOD值進(jìn)行分析,免疫抑制組和普通實驗組的TLR2及TLR4的AOD值平均值均高于對照組,且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.01),免疫抑制組TLR2及TLR4的AOD值平均值與普通實驗組之間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05);在建模組中,TLR4的表達(dá)強(qiáng)度與TLR2的表達(dá)強(qiáng)度有顯著相關(guān)性(p0.01)。結(jié)論:1.在外耳道真菌病動物模型中建模大鼠TLR2、TLR4的表達(dá)顯著升高,主要在外耳道皮膚的角質(zhì)層、顆粒層、棘細(xì)胞層及基底層的胞質(zhì)、胞膜中呈現(xiàn)不同程度的表達(dá)。其中棘細(xì)胞層最為明顯。2.在外耳道真菌病動物模型中建模大鼠TLR2、TLR4的表達(dá)變化趨勢與外耳道真菌病的炎癥進(jìn)展基本一致。這表明TLR2、TLR4參與了外耳道真菌病的發(fā)病過程。3.外耳道真菌病大鼠模型中TLR4表達(dá)強(qiáng)于TLR2的表達(dá)。
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R764.1;R-332
【圖文】：

圖 1.1 3 組臨床評分平均值隨病程變化折線圖圖可得出：3 組在嚴(yán)重程度上存在明顯差異，其中免疫抑制之，對照組最輕。在實驗進(jìn)行過程當(dāng)中，免疫抑制組及普通，免疫抑制組升高明顯，在實驗進(jìn)行至 14 天最為明顯，在與普通實驗組評分均呈現(xiàn)下降趨勢。對照組評分呈現(xiàn)持續(xù)

普通實驗組在實驗第7天的鏡下表現(xiàn)

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本文編號：2716898