【摘要】：目的:研究L-古洛糖酸-γ-內(nèi)酯氧化酶(L-gulono-γ-lactone oxidase,Gulo)在C57BL/6小鼠胚胎腎臟中的表達,以及對后腎間充質(zhì)(metanephric mesenchyme,MM)細胞增殖、凋亡、間質(zhì)-上皮轉(zhuǎn)化(mesenchymal-to-epithelial transformation,MET)過程的影響,進而闡明Gulo在腎臟發(fā)育過程中的潛在生物學(xué)功能。方法:1.分離不同發(fā)育時期的C57BL/6小鼠胚胎腎臟,利用RT-qPCR檢測Gulo的表達情況;培養(yǎng)不同發(fā)育階段的MM細胞,mK3細胞和mK4細胞,通過RT-qPCR檢測Gulo在這兩種細胞的表達情況。2.在mK3細胞中過表達Gulo,在mK4細胞中敲低Gulo,免疫印跡試驗(Western blot,WB)檢測細胞的MET標志物和Sine oculis-related homeobox 2(Six2)的變化;細胞劃痕實驗檢測細胞遷移能力的改變。5-乙炔基-2’-脫氧尿苷(5-Ethynyl-2’-deoxyuridine,Edu)實驗檢測細胞的增殖能力;流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡。3.在過表達Gulo的mK3細胞中再轉(zhuǎn)染Six2過表達質(zhì)粒,在敲低Gulo的mK4細胞轉(zhuǎn)染Six2敲低質(zhì)粒,Western blot檢測細胞的MET過程相關(guān)標志物的變化;細胞劃痕實驗檢測遷移能力的改變。Edu實驗檢測細胞的增殖能力;流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡。結(jié)果:1.Gulo在C57BL/6小鼠胚胎腎臟中胚胎期12.5天(embryonic12.5 days,E12.5)表達顯著增多,在未分化的MM(mK3)細胞中Gulo表達低于已分化的MM(mK4)細胞。2.過表達Gulo可促進mK3細胞的MET和細胞凋亡過程,抑制細胞增殖。mK4細胞中Gulo的敲低使其上皮特性減弱,促進細胞增殖,抑制細胞凋亡。3.Six2受Gulo負調(diào)控。在過表達Gulo的mK3細胞中過表達Six2,在敲低Gulo的mK4細胞中敲低Six2,可部分挽救由于Gulo增多或缺乏引起的MM細胞的MET、增殖和凋亡改變。結(jié)論:綜上所述,我們的研究結(jié)果表明Gulo在小鼠胚胎腎臟中E12.5表達顯著升高,未分化的MM(mK3)細胞Gulo表達顯著低于已分化的MM(mK4)細胞。此外,Gulo通過負調(diào)控Six2從而促進MM細胞的MET和凋亡,抑制其增殖。
【圖文】：

1 Gulo 在腎臟發(fā)育不同階段表達情況（RT-qPCRssion in different stages of kidney development (RT** p <0.01, ns. non-significant.育階段的 MM 細胞中差異表達lo 在不同發(fā)育階段的 MM 細胞中的表達情 PCR（Semi-quantitative PCR，SqPCR）在 的表達。mK3 和 mK4 細胞系代表兩個不同早期未經(jīng) UB 誘導(dǎo)的 MM 細胞，為間質(zhì)細胞胞，為已發(fā)生部分上皮化的細胞。結(jié)果表明而在 mK4 細胞中表達較高（圖 2）。

圖 1 Gulo 在腎臟發(fā)育不同階段表達情況（RT-qPCR） expression in different stages of kidney development (RT-qPC** p <0.01, ns. non-significant.同發(fā)育階段的 MM 細胞中差異表達 Gulo 在不同發(fā)育階段的 MM 細胞中的表達情況，，半定量 PCR（Semi-quantitative PCR，SqPCR）在 mK3 Gulo 的表達。mK3 和 mK4 細胞系代表兩個不同分化階細胞為早期未經(jīng) UB 誘導(dǎo)的 MM 細胞，為間質(zhì)細胞；mM 細胞，為已發(fā)生部分上皮化的細胞。結(jié)果表明，Gu低，而在 mK4 細胞中表達較高（圖 2）。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R329.2

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本文編號：2694695