【摘要】：背景銀屑病是以表皮過度增生和慢性炎癥為特征的皮膚病。細胞因子在銀屑病的發(fā)病機制中發(fā)揮著重要的作用。IL-33是2005年發(fā)現(xiàn)的IL-1超家族成員之一,廣泛表達于人類組織細胞上,尤其在皮膚組織上的表達最高。本課題組前期在臨床銀屑病標(biāo)本皮損區(qū)中檢測到IL-33高表達,這提示IL-33可能在銀屑病的發(fā)病中扮演重要的角色。本研究進一步探討IL-33對角質(zhì)形成細胞和小鼠銀屑病樣皮損模型的影響,為銀屑病的治療提供新的理論依據(jù)。目的探討IL-33對角質(zhì)形成細胞(HaCaT)和小鼠銀屑病樣皮損模型的影響。方法不同濃度IL-33刺激HaCaT細胞,CCK8和免疫熒光檢測細胞增殖,細胞熒光檢測增殖,Western blot檢測各組細胞中LC3、Beclin1和p-STAT3的水平,流式檢測各組細胞的凋亡水平。將6~8周BALB/c雌性小鼠隨機分為:正常組、IL-33組(腹腔注射IL-33)、咪喹莫特組(背部外涂5%咪喹莫特乳膏,建立銀屑病樣皮損模型)和IL-33處理組(先背部外涂5%咪喹莫特乳膏,建立銀屑病樣皮損模型,然后再腹腔注射IL-33)。使用PASI評分記錄各組小鼠的皮損區(qū)變化情況,HE染色觀察各組小鼠的皮損區(qū)情況,ELISA檢測小鼠血清中IL-33和ST2的表達,RT-PCR檢測皮損組織中IL-33和ST2的表達,Western blot檢測皮損組織中自噬相關(guān)蛋白和磷酸化STAT3的表達,流式檢測各組小鼠脾臟中淋巴細胞亞群的分布情況。結(jié)果1.在小鼠銀屑病樣皮損模型中,與對照組相比,IL-33和ST2在mRNA和蛋白水平均呈高表達狀態(tài)(P0.05)。2.在小鼠銀屑病樣皮損模型中,使用PASI評分,與對照組和咪喹莫特組相比,從形態(tài)學(xué)和HE染色的結(jié)果表明,IL-33處理組小鼠的紅斑、鱗屑及皮損厚度都明顯嚴(yán)重(P0.05)。3.Western blot結(jié)果表明,IL-33處理組皮損中自噬相關(guān)蛋白的表達水平低于咪喹莫特組(P0.001),p-STAT3蛋白的表達水平均高于正常組和咪喹莫特組(P0.001)。4.流式結(jié)果顯示,在咪喹莫特誘導(dǎo)的小鼠銀屑病樣模型中,與模型組相比,IL-33處理組小鼠脾臟中CD3~+CD8~+T和CD3~+CD4~+T比例明顯降低(P0.05),其中CD3~+CD8~+T降低更明顯(P0.001)。5.不同濃度的IL-33刺激HaCaT細胞,結(jié)果顯示,25ng/mL的IL-33處理組促進HaCaT細胞的增殖作用最明顯(P0.05);細胞熒光Ki67染色也表明,25ng/mL的IL-33處理組HaCaT細胞的增殖作用明顯(P0.05);但是IL-33對細胞的凋亡沒有差異。6.在不同濃度IL-33刺激HaCaT細胞,Western blot結(jié)果表明,IL-33可促進LC3、Beclin1和p-STAT3蛋白的表達(P0.05)。結(jié)論1.IL-33和ST2高表達在小鼠銀屑病樣皮損組織。2.IL-33促進HaCaT細胞的增殖,誘導(dǎo)自噬和STAT3的磷酸化。3.IL-33加重咪喹莫特誘導(dǎo)的小鼠銀屑病樣皮損的發(fā)生和發(fā)展,可能的機制是抑制自噬,促使STAT3的磷酸化來實現(xiàn)的。
【圖文】：

(A)The proportion of CD4+and CD8+T cells in mouse spleen. (B and C)Statistical Analysis. **p< 0.01 and***p< 0.001.compared with IMQ group.圖 3 IL-33 對小鼠脾臟中 CD3+CD4+T 細胞和 CD3+CD8+T 細胞比例的影響Figure3.The effect of IL-33 on the ratio of CD3+CD4+T cells and CD3+CD8+Tcells in mouse spleen.2.4 IL-33 抑制自噬相關(guān)蛋白和促使 STAT3 磷酸化的表達IL-33 加重小鼠的銀屑病樣癥狀，，但是具體的作用機制依然不清楚。因此我們通過檢測自噬相關(guān)蛋白，來觀察 IL-33 對其的影響。結(jié)果表明，IL-33 處理組與咪喹莫特組相比，LC3 的蛋白表達水平降低（P< 0.001）；Beclin1 的蛋白表達水平也降低（P<0.001）。同時，在研究中也發(fā)現(xiàn)，與咪喹莫特組相比，IL-33 處理組的 STAT3沒有差異，但是 p-STAT3 的蛋白表達水平升高（P< 0.05）；與對照組相比，p-STAT3蛋白也升高（P< 0.01）。因此，我們猜測 IL-33 加重小鼠的銀屑病樣癥狀可能是通過對自噬的抑制，同時活化 STAT3 來引起的。（圖 4）

(A)The western blot results of eachprotein expression. ***p< 0.001.comp圖 4 IL-33 抑制自噬相關(guān)Figure4. IL-33 inhibited autophphosph2.5 IL-33 促進 HaCaT 細胞的增殖IL-33 在 25～100ng/mL 時促進細胞顯，與未處理組相比（P< 0.01）。HaCa用 Ki67 細胞熒光染色結(jié)果顯示，細胞的
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R758.63;R-332

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本文編號：2691742