【摘要】：研究背景:炎癥性腸病(Inflammatory bowel disease,IBD)是一種慢性非特異性腸道炎癥,是發(fā)生結(jié)直腸癌(Colorectal cancer,CRC)的高危因素。維生素D(VitaminD,VitD)是一種脂溶性類固醇激素,已被證實(shí)與腫瘤、炎癥、免疫性疾病等相關(guān)。VSL#3是一種復(fù)合益生菌,大量的研究已證實(shí)其具有抗炎抗癌的作用。VitD、腸道菌群和益生菌之間存在密切的聯(lián)系,且VitD和益生菌對炎癥相關(guān)性結(jié)直腸癌(Colitis-associated colorectal cancer,CAC)均存在預(yù)防 作用。研究目的:(1)探究VitD與VSL#3單獨(dú)或聯(lián)合作用對CAC模型小鼠成瘤的影響;(2)探究VitD與VSL#3對炎癥因子的影響;(3)探究VitD與VSL#3作用對腸粘膜上皮E-cadherin表達(dá)的影響;(4)探究VitD與VSL#3對miRNA的作用效果。研究方法:將雄性C57BL/6小鼠隨機(jī)分為7組,空白對照組n=9,不建立CAC模型,其余各組n=10,均建立CAC模型。(1)建模:建模組于第7天12.5%氧化偶氮甲烷(Azoxymethane,AOM)腹腔注射,第14天開始連續(xù)給予2.5%葡聚糖硫酸鈉(Dextransulfatesodium,DSS)飲用5天,至第19天結(jié)束�？瞻讓φ战M以0.9%NaCl溶液代替AOM,普通飲用水代替DSS;(2)干預(yù):空白對照組(0.9%NaCl溶液灌胃)、模型對照組(0.9%NaCl溶液灌胃)、低劑量VitD組(VitD5IU/g/次灌胃)、高劑量 VitD 組(VitD 10IU/g/次灌胃)、低劑量 VitD+VSL#3 組(VitD 5IU/g/次+VSL#35×107CFU/g/次灌胃)、高劑量 VitD+VSL#3 組(VitD 10IU/g/次+VSL#35×107CFU/g/次灌胃)、VSL#3 組(VSL#3 5×107CFU/g/次灌胃),每周 3 次,共33次;(3)評估:至第77天處死小鼠,計(jì)算小鼠結(jié)直腸成瘤數(shù)(Tumornumber,TN)和瘤負(fù)荷(Tumor load,TL),對結(jié)直腸進(jìn)行病理組織學(xué)評估;利用qRT-PCR評估結(jié)直腸組織IL-8及TNF-αmRNA的表達(dá)水平,以及miR-21、miR-194、miR-145的表達(dá)水平;分別利用qRT-PCR及免疫組織化學(xué)染色法評估結(jié)直腸組織E-cadherin的mRNA及蛋白表達(dá)水平。研究結(jié)果:(1)所有建模小鼠結(jié)直腸均可見成瘤,成瘤率100%。與模型對照組相比較,予以VitD和VSL#3干預(yù)的小鼠結(jié)直腸瘤負(fù)荷均有下降,其中VSL#3組瘤負(fù)荷較模型對照組顯著下降(0.69±0.18vs1.49±0.27cm,P=0.03),其余各組較模型對照組瘤負(fù)荷下降,但未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);(2)與空白對照組相比,模型對照組小鼠腸道組織TNF-αmRNA表達(dá)水平顯著增加(0.68±0.09 vs 12.93±3.04,P=0.02)。經(jīng)VSL#3干預(yù),與模型對照組相比,VSL#3組小鼠結(jié)直腸組織TNF-αmRNA 表達(dá)水平顯著下降(12.93±3.04 vs 2.34±0.36,P=0.02);(3)qRT-PCR 及IHC結(jié)果顯示,建模后E-cadherin表達(dá)水平較空白對照組無明顯變化(P0.05)。進(jìn)一步經(jīng)VSL#3干預(yù)后,結(jié)直腸E-cadherin表達(dá)水平較模型對照組亦無明顯變化(P0.05);(4)與空白對照組相比,AOM/DSS建�？墒菇Y(jié)直腸組織miR-21表達(dá)均值增加(0.82±0.12vs3.76±2.44,P=0.30)和 miR-145 的表達(dá)均值下降(1.92±0.97 vs0.50±0.19,P=0.21),但均未達(dá)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,而VSL#3干預(yù)對miR-21和miR-145表達(dá)無明顯影響。對于miR-194,AOM/DSS建�；蚪o予VSL#3干預(yù)均未能明顯改變其表達(dá)(P0.05)。結(jié)論:(1)利用AOM/DSS可成功建立小鼠CAC模型,VSL#3可顯著降低其瘤負(fù)荷,而聯(lián)合VitD和VSL#3對AOM/DSS模型小鼠的減瘤效果較單獨(dú)VitD或VSL#3并未表現(xiàn)出更好的減瘤效果;(2)AOM/DSS建模可上調(diào)小鼠結(jié)直腸組織TNF-αα的表達(dá),而VSL#3干預(yù)可顯著降低TNF-α的表達(dá),VSL#3可能是通過抑制炎癥以降低CAC風(fēng)險(xiǎn);(3)AOM/DSS建模及VSL#3干預(yù)對小鼠結(jié)直腸組織的E-cadherin,miR-21,miR-145,miR-194的表達(dá)并無顯著影響。
【圖文】：

圖１：邋ＡＯＭ／ＤＳＳ誘導(dǎo)的小鼠ＣＡＣ模型及維生素Ｄ、益生菌干預(yù)示意圖逡逑注：ＮＳ０．９％ＮａＣｌ溶液；ｉ．ｐ．腹腔注射逡逑表７：實(shí)驗(yàn)分組和處理逡逑分組邐干預(yù)邐數(shù)目（ｎ）逡逑空白對照組邐０．９％ＮａＣｌ溶液腹腔注射＋普通飲用水９逡逑＋０．９％ＮａＣｌ溶液灌胃逡逑模型對照組邐ＡＯＭ＋ＤＳＳ＋０．９％ＮａＣｌ溶液灌胃邐１０逡逑低劑量邋ＶｉｔＤ邋組邋ＡＯＭ＋ＤＳＳ＋ＶｉｔＤ３邋灌胃（５ＩＵ／ｇ／次，３邋次／周）邋１０逡逑高劑量邋ＶｉｔＤ邋組邋ＡＯＭ＋ＤＳＳ＋ＶｉｔＤ３灌胃（１０ＩＵ／ｇ／次，３邋次／周）１０逡逑低劑量邋ＶｉｔＤ＋ＶＳＬ＃３邋ＡＯＭ＋ＤＳＳ＋ＶｉｔＤ３邋（邋５ＩＵ／ｇ／次）與邋ＶＳＬ＃３邋１０逡逑組邐（５ｘｌ0７ＣＦＵ／ｇ／次）聯(lián)合灌胃（３次／周）逡逑高劑量邋ＶｉｔＤ＋ＶＳＬ＃３邋ＡＯＭ＋ＤＳＳ＋ＶｉｔＤｊ邋（邋１０ＩＵ／ｇ／次）與邋ＶＳＬ＃３邋１０逡逑組邐（５ｘｌ0７ＣＦＵ／ｇ／次）聯(lián)合灌胃（３次／周）逡逑

實(shí)驗(yàn)結(jié)果逡逑１．邋ＡＯＭ／ＤＳＳ誘導(dǎo)的小鼠ＣＡＣ模型的建立逡逑第７７天處死小鼠后，大體觀察結(jié)果（圖３）顯示空白對照組結(jié)直腸未見腫瘤形逡逑成，而其余各組小鼠結(jié)直腸均可見腫瘤形成，ＡＯＭ／ＤＳＳ建模成瘤率１００％。所形成逡逑腫瘤主要位于結(jié)直腸遠(yuǎn)端及中遠(yuǎn)端，其中遠(yuǎn)端直腸肛門處成瘤率８６％邋（４３／５０），中逡逑遠(yuǎn)端結(jié)腸成瘤率７２％邋（３６／５０）。４０％邋（２０／５０）的小鼠可見直腸靠近肛門處數(shù)個(gè)腫瘤逡逑環(huán)腔生長（４０％，２０／５０）。進(jìn)一步病理組織切片結(jié)果（圖４）顯示所形成的結(jié)直腸腫逡逑瘤均為原位癌，致上皮層受累但未突破粘膜肌層。受累部分結(jié)直腸腺體結(jié)構(gòu)紊亂，，逡逑各腫瘤細(xì)胞形態(tài)及大小差異顯著，腫瘤細(xì)胞核大、深染、質(zhì)核比下降，可見明顯的逡逑異型性。逡逑空白對照逡逑0邋１ｃｍ邋２邐３邐５邐６邐７邐８邐９逡逑■。s{ｂ逡逑Ａ0Ｍ？逡逑０邋１ｃｍ邋２邐３邐４邐５邐６邐７逡逑圖３：小鼠結(jié)直腸大體情況。逡逑圖４：小鼠結(jié)直腸組織ＨＥ染色結(jié)果（４０0ｘ）逡逑注：Ａ：正常小鼠結(jié)直腸組織ＨＥ染色（４０0
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R574.62;R735.3;R-332

【參考文獻(xiàn)】

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1 李偉偉;韓文曉;趙新華;汪紅英;;微小RNA-155在結(jié)腸炎相關(guān)結(jié)腸癌發(fā)生過程中的表達(dá)變化[J];中華腫瘤雜志;2014年04期

本文編號：2690882