【摘要】：目的:自然殺傷細(xì)胞(NK cell)是免疫系統(tǒng)不可或缺的防衛(wèi)細(xì)胞,NK細(xì)胞可利用細(xì)胞毒活性殺死入侵機(jī)體的病原體,并對(duì)腫瘤免疫發(fā)揮關(guān)鍵性作用。脾、肺、肝和子宮等器官的組織和外周循環(huán)血中都有NK細(xì)胞的聚集。當(dāng)機(jī)體被感染或發(fā)生癌變時(shí),機(jī)體組織和循環(huán)血內(nèi)的NK細(xì)胞會(huì)受到細(xì)胞因子等的趨化,調(diào)節(jié)NK細(xì)胞遷移功能,促進(jìn)NK細(xì)胞向炎癥病灶和癌變區(qū)域轉(zhuǎn)移。SP是一種主要由神經(jīng)系統(tǒng)分泌的神經(jīng)肽類物質(zhì),主要參與神經(jīng)調(diào)節(jié),也可參與機(jī)體免疫調(diào)節(jié)和炎癥反應(yīng)。目前,研究發(fā)現(xiàn)SP與免疫系統(tǒng)關(guān)系密切,能增強(qiáng)NK細(xì)胞的增殖并活化免疫細(xì)胞,是體內(nèi)必不可少的調(diào)節(jié)性多肽,對(duì)炎癥發(fā)生時(shí)免疫細(xì)胞的募集也有重要作用。NK細(xì)胞受機(jī)體內(nèi)各種趨化性物質(zhì)的調(diào)節(jié),促進(jìn)細(xì)胞遷移活動(dòng)的發(fā)生,發(fā)揮細(xì)胞毒作用殺死病原微生物或癌變細(xì)胞。本研究通過檢測(cè)SP對(duì)NK92-MI細(xì)胞遷移能力和細(xì)胞表面趨化因子受體表達(dá)的影響,探討SP對(duì)NK細(xì)胞的遷移活性的直接或間接調(diào)控作用;并通過測(cè)定SP對(duì)NK92-MI細(xì)胞上CCR7、CXCR3和CXCR4表達(dá)水平的影響,以及SP受體NK-1R在SP調(diào)控NK92-MI細(xì)胞遷移活性中的作用,進(jìn)一步討論SP調(diào)控NK細(xì)胞遷移活性的機(jī)制。研究方法:(1)Transwell法檢測(cè)不同濃度的SP(10-12 mol/L、10-10 mol/L、10-8 mol/L、10-6 mol/L)對(duì)NK92-MI細(xì)胞遷移能力的影響以及不同濃度SP對(duì)趨化因子CCL21(CCR7配體)和CXCL12(CXCR4配體)對(duì)NK92-MI細(xì)胞趨化作用的影響。(2)Real-time PCR檢測(cè)不同濃度的SP(10-12 mol/L~10-6 mol/L)對(duì)NK92-MI細(xì)胞趨化因子受體CCR7、CXCR3和CXCR4 m RNA表達(dá)水平的影響。(3)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)不同濃度的SP(10-12 mol/L~10-6 mol/L)對(duì)NK92-MI細(xì)胞趨化因子受體CCR7、CXCR3和CXCR4膜表達(dá)的調(diào)控。(4)NK-1R拮抗劑作用NK92-MI細(xì)胞后,再用Transwell法測(cè)定不同濃度SP及趨化因子CCL21和CXCL12對(duì)NK92-MI細(xì)胞的趨化作用;Real-time PCR測(cè)定趨化因子受體CCR7、CXCR3和CXCR4 m RNA表達(dá)水平的變化。結(jié)果:(1)SP對(duì)NK92-MI細(xì)胞的直接趨化作用,在10-12 mol/L~10-10 mol/L濃度范圍內(nèi),隨SP濃度增高,NK92-MI細(xì)胞的遷移力也逐漸增強(qiáng),10-10 mol/L濃度SP的促遷移作用最強(qiáng);其后,SP濃度繼續(xù)增高,其促遷移作用反而逐漸減弱。不同濃度SP同樣可以增強(qiáng)趨化因子CXCL12和CCL21對(duì)NK92-MI細(xì)胞的趨化作用,在低濃度范圍(10-12 mol/L~10-10 mol/L)SP作用下,NK92-MI細(xì)胞遷移力逐漸增加,而隨著SP濃度繼續(xù)增高(10-8 mol/L~10-6 mol/L),NK92-MI細(xì)胞遷移力又有所減弱。(2)SP可明顯增加趨化因子受體CCR7、CXCR3和CXCR4的m RNA表達(dá)。10-12mol/L~10-6 mol/L濃度范圍的SP作用NK92-MI細(xì)胞6h,CCR7、CXCR3和CXCR4的m RNA表達(dá)均明顯增高;僅在10-12 mol/L濃度組,CXCR4的m RNA表達(dá)增高不明顯,與對(duì)照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。SP作用NK92-MI細(xì)胞12h,各濃度(10-12mol/L~10-6 mol/L)SP仍能顯著促進(jìn)CXCR3和CXCR4的m RNA表達(dá),而CCR7的m RNA表達(dá)水平無明顯增高。(3)10-12 mol/L~10-6 mol/L濃度范圍的SP對(duì)趨化因子受體CCR7、CXCR3和CXCR4的膜表達(dá)作用各不相同,其中CCR7的表達(dá)具有隨著SP濃度的增高而增加的趨勢(shì),在10-8 mol/L和10-6 mol/L濃度組CCR7的表達(dá)有顯著增加(P0.05);經(jīng)各濃度SP作用后,CXCR3的表達(dá)水平與對(duì)照組相比有所增加,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;而CXCR4表達(dá)則隨SP濃度的增高,具有先增高后回降的趨勢(shì),10-10 mol/L和10-8 mol/L濃度的SP對(duì)CXCR4表達(dá)有明顯的促進(jìn)作用(P0.01、P0.05)。SP對(duì)三種趨化因子受體表達(dá)的作用趨勢(shì)與SP促進(jìn)NK92-MI細(xì)胞遷移能力的作用趨勢(shì)不完全一致,提示存在有各趨化因子受體的競(jìng)爭(zhēng)表達(dá),或可能還有其他趨化因子受體在協(xié)同發(fā)揮作用。(4)經(jīng)NK-1R拮抗劑處理后,SP、CCL21和CXCL12均不能明顯增加NK92-MI細(xì)胞的遷移活性,且各濃度SP對(duì)CCR7、CXCR3和CXCR4 m RNA的表達(dá)無明顯促進(jìn)作用,說明NK-1R拮抗劑發(fā)揮了阻斷作用,提示NK-1R是SP調(diào)控NK細(xì)胞遷移活性發(fā)揮作用的途徑。結(jié)論:SP能直接促進(jìn)NK92-MI細(xì)胞的遷移,說明SP對(duì)NK細(xì)胞具有直接趨化作用;SP能增加NK92-MI細(xì)胞表面趨化因子受體CCR7、CXCR3和CXCR4的表達(dá),并增強(qiáng)相應(yīng)趨化因子CCL21和CXCL12對(duì)NK92-MI細(xì)胞的趨化作用,說明SP可通過上調(diào)一些趨化因子受體的表達(dá),間接調(diào)控NK細(xì)胞的遷移活性;SP對(duì)NK92-MI細(xì)胞遷移活性的調(diào)控是通過其受體NK-1R來發(fā)揮作用的。
【圖文】：

3.1 SP 對(duì) NK92-MI 細(xì)胞遷移能力的影響3.1.1 SP 對(duì) NK92-MI 細(xì)胞遷移能力的影響與對(duì)照組相比，在 10-12mol/L 10-10mol/L 濃度范圍內(nèi)，隨著 SP 濃度的增加，NK92-MI 細(xì)胞遷移力(趨化指數(shù))逐漸增強(qiáng)，在 10-10mol/L 濃度時(shí) SP 的趨化作用最強(qiáng)(P<0.01)，說明 SP 可直接促進(jìn) NK92-MI 細(xì)胞的遷移。隨后，SP 濃度繼續(xù)增加，NK92-MI 細(xì)胞遷移力反而逐漸減弱，結(jié)果如表 5、圖 1 所示。表 5. SP 對(duì) NK92-MI 細(xì)胞遷移能力的影響SP 濃度(mol/L) SP 對(duì) NK92-MI 細(xì)胞的趨化指數(shù)對(duì)照 1.0010-121.84±0.16*10-103.17±0.17**10-82.56±0.34**10-61.78±0.22**與對(duì)照組(未經(jīng) SP 處理)相比 P<0.05，**與對(duì)照組相比 P<0.01。

圖 2. SP 增強(qiáng)趨化因子 CCL21/CXCL12 對(duì) NK92-MI 細(xì)胞的趨化作用(HE 染色 transwell 圖)；A趨化因子 CCL21 對(duì) NK92-MI 細(xì)胞的趨化作用，B.趨化因子 CXCL12 對(duì) NK92-MI 細(xì)胞的趨化作用3.2 SP 對(duì) NK92-MI 細(xì)胞趨化因子受體 CCR7、CXCR3 和 CXCR4 mRNA表達(dá)的影響SP 對(duì) NK92-MI 細(xì)胞表達(dá)的三種趨化因子受體的 mRNA 表達(dá)具有促進(jìn)作用。①濃度范圍為 10-12mol/L 10-6mol/L 的 SP 刺激 NK92-MI 細(xì)胞 6h，均可明顯促進(jìn)CCR7 的 mRNA 表達(dá)(P<0.01)，且隨著 SP 濃度的增高，其 mRNA 表達(dá)水平也增高(結(jié)果見圖 3A)。而刺激 12h 后，各濃度 SP 對(duì) CCR7 的 mRNA 表達(dá)均無明顯作用(結(jié)果見圖 3B)。②濃度范圍為 10-12mol/L 10-6mol/L 的 SP 刺激 NK92-MI 細(xì)胞 6h，，CXCR3 的 mRNA表達(dá)均可明顯增加。在 10-12mol/L 10-10mol/L 濃度范圍內(nèi)，隨 SP 濃度逐漸增加，
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R392.1

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本文編號(hào)：2679073